本发明专利技术涉及生物和医学检测技术领域，具体涉及一种在同一反应体系内同时综合检测胃癌肿瘤标志物指标CA724、CEA、CA199的时间分辨荧光免疫检测试剂盒，同时还涉及该试剂盒在综合检测胃癌肿瘤标志物CA724、CEA、CA199中的应用。该试剂盒包括：分别抗CA724、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板；用Eu3+标记的抗CA724、Tb3+标记的抗CA199、Sm3+标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；质控品。本发明专利技术提供的试剂盒可用于胃癌的临床辅助诊断、疗效观察及预后判断，对胃癌肿瘤的治疗和预防具有重要意义，同时检测三个肿瘤标志物，简化了检测步骤，提高了检测数据综合分析的特异性和灵敏性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物和医学检测
，具体涉及一种在同一反应体系内同时综合检测胃癌肿瘤标志物指标CA724、CEA、CA 199的时间分辨荧光免疫检测试剂盒，同时还涉及该试剂盒在综合检测胃癌肿瘤标志物CA724、CEA、CA 199中的应用。
技术介绍
全球每年新发胃癌100余万，中国占42%,死亡约80万，中国占35%,是胃癌发病率和死亡率最高的国家之一，发病率和死亡率均是世界平均水平两倍多。资料显示，2007年，在我国前10位癌症中，胃癌发病率为第二位，死亡率为第二位；胃癌发病率和死亡率的男女之比均为2比I ;农村的发病率是城市的1.6倍、农村的死亡率是城市的1.9倍；死亡/发病比率(相当于患病后的病死风险)为第八位。胃癌的发病率随着年龄的增加而显著升高，发病的高峰年龄在50岁 80岁，但已逐年呈现年轻化趋势，胃癌中19 35岁患者的比例40年来已从1.7%升至当前的3.3%。目前国人死因1/4是癌症,癌症死因的1/4是胃癌，在消化系统恶性肿瘤死亡病例中，约半数死于胃癌。胃癌疗效与病期早晚和诊治方法及手段密切相关，早期胃癌经足够的治疗后90%以上患者能生存5年以上或治愈，而晚期胃癌患者，治疗后5年生存率不足5%，因此早期确诊依然是治疗该病的关键。目前，诊断胃癌的常用检测指标有CA724、CEA、CA199等几种。在实际诊断胃癌时，一般是用CA724、CEA、CA 199三种指标综合确诊胃癌，因为三项指标综合分析在特异性和敏感度上明显高于单一指标。目前常规实验室或医疗单位用于检测该三项指标通常分别采用单一试剂盒，即一个试剂盒针对一种肿瘤标记物进行检测，此种方式存在的缺点是:1、检测步骤繁多，费时费力；2、几种标记物分别采用几种单指标试剂盒检测，由于不同生产厂家的试剂盒存在差异，且同一厂家的不同试剂盒由于检测的标记物不同可能会存在控制条件、参数的差异而导致检测结果存在误差，此种误差在综合分析三种标记物的特异性和敏感性上会产生较大的影响，可能导致判断结果相差甚远。因此，开发一种能够在相对同一的检测条件下同时能够检测该三种肿瘤标记物的试剂盒，就能降低由于人为原因造成的检测误差，大大提高综合分析检测结果的特异性和敏感性，为下一步的研究或判断做出准确的结论提供更充分的依据。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的问题，提供一种在同一反应体系内同时综合检测胃癌肿瘤标志物指标CA724、CEA、CA199的时间分辨荧光免疫检测试剂盒。本专利技术的目的还在于提供一种该试剂盒的应用。为了实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是:一种时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，把三种胃癌肿瘤标志物CA724、CEA、CA 199综合在同一微孔的同一反应体系内，采用时间分辨荧光免疫法检测，该试剂盒包括:分别抗CA724、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板；用Eu3+标记的抗CA724、Tb3+标记的抗CA199、Sm3+标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；质控品。所述的第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板的制备方法为:把分别抗CA724、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体用包被缓冲液稀释，制得抗体包被液，然后向微孔板的每个孔中分别加入100 μ I的所述抗体包被液，于37°C包被2小时，然后用生理盐水冲洗微孔板三次，然后再向微孔板的每个孔中分别加入200 μ I的封板液，于室温封闭2小时或于4°C封闭过夜，然后用生理盐水冲洗微孔板两次，冷冻干燥，制得第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板。其中，所述抗体包被液中，分别抗CA724、CEA、CA 199的第一株单克隆抗体的浓度均为 0.010 0.019g/L。所述用Eu3+标记的抗CA724、Tb3+标记的抗CA199、Sm3+标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体中，用Eu3+标记的抗CA724抗体、Tb3+标记的抗CA199抗体、Sm3+标记的抗CEA抗体的质量配比为:Eu3+标记的抗CA724抗体:Tb3+标记的抗CA199抗体:Sm3+标记的抗 CEA 抗体=(3 6): (3 7): (5 9)。分析缓冲液的制备方法为:向每升浓度为0.05mol/L、pH值为8.0的Tris-Hcl缓冲液中加入9g NaCU0.5g NaN3UOg BSA、0.1ml吐温_40、5g聚乙二醇，混合均匀，即制得分析缓冲液。所述共用荧光增强剂的制备方法为:解离部分:将70 200 μ mol的PTA、2 7 μ mo I的氧化乾、0.6g的Triton X-100和300ml的乙醇混合,用水定容至I升,用乙酸调pH值至3.5，制得解离部分；增强部分:将0.1 0.4mmol的邻菲罗啉和0.2mol的Tris混合，用水定容至1L，制得增强部分。所述洗涤液的制备方法为:在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入吐温-20，混匀，制得吐温-20质量百分比浓度为0.05%的PBS溶液，然后用质量百分比浓度为0.2%的NaN3溶液防腐处理，制得洗涤液。所述质控品为CA724、CEA、CA 199标准品的混合物。一种时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒在综合检测胃癌肿瘤标志物CA724、CEA, CA 199中的应用。所述的试剂盒在综合检测胃癌肿瘤标志物CA724、CEA、CA 199中的应用，包括以下步骤:(I)用分析缓冲液稀释质控品，制成具有系列浓度梯度包含有CA724、CEA、CA199标准品的混合溶液；(2)将待测样品与步骤(I)制备的标准品混合溶液分别加入抗CA724、CEA、CA 199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板的不同孔中，然后再向孔中加入能分别与CA724、CEA、CA 199结合的标记有稀土离子螯合物的第二株单克隆抗体混合抗体，之后加入共用荧光增强剂，进行时间分辨荧光免疫检测，得到发光值；(3)根据测定的具有系列浓度梯度的包含CA724、CEA、CA199标准品的混合溶液的发光值做标准曲线；(4)以测定的待测样品中的CA724、CEA、CA 199发光值和标准品中CA724、CEA、CA 199各自的标准曲线的发光值做比较，得出待测样品中CA724、CEA、CA 199各自的含量。所述待测样品为人体血清。进一步的，所述包被缓冲液的制备方法为:取浓度为0.07mol/L、pH值为9.3的碳酸盐缓冲液，然后用质量百分比浓度为0.2%的NaN3溶液防腐处理，制得包被缓冲液。所述封板液的制备方法为:向浓度为0.05mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入BSA,配制成BSA质量百分比浓度为1%的BSA的PBS缓冲液，然后用质量百分比浓度为0.2%的NaN3溶液防腐处理，制得封板液。本专利技术提供的试剂盒，采用时间分辨荧光免疫检测方法，实现同时综合检测三项胃癌肿瘤标志物CA724、CEA、CA199的目的。时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)是一种以稀土离子为标记物，根据稀土离子螯合物的发光特点，用时间分辨技术测定特异性荧光的技术方法。TRFIA利用稀土离子的激发光和发射光的波长不同，同时发射光具有长的衰减时间，这样可以有效的排除非特异性荧光的干扰，具有线性范围宽、灵敏度高和稳定性好本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，把三种胃癌肿瘤标志物CA724、CEA、CA199综合在同一微孔的同一反应体系内，采用时间分辨荧光免疫法检测，其特征在于：该试剂盒包括：分别抗CA724、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板；用Eu3+标记的抗CA724、Tb3+标记的抗CA199、Sm3+标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；质控品。
【技术特征摘要】
2012.09.20 CN 201210349612.21.一种时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，把三种胃癌肿瘤标志物CA724、CEA、CA 199综合在同一微孔的同一反应体系内，米用时间分辨突光免疫法检测,其特征在于:该试剂盒包括:分别抗CA724、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板；用Eu3+标记的抗CA724、Tb3+标记的抗CA199、Sm3+标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；质控品。2.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，其特征在于:所述的第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板的制备方法为:把分别抗CA724、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体用包被缓冲液稀释，制得抗体包被液，然后向微孔板的每个孔中分别加入100 μ I的所述抗体包被液，于37°C包被2小时，然后用生理盐水冲洗微孔板三次，然后再向微孔板的每个孔中分别加入200 μ I的封板液,于室温封闭2小时或于4°C封闭过夜，然后用生理盐水冲洗微孔板两次，冷冻干燥，制得混合抗体包被的微孔板。3.根据权利要求2所述的时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，其特征在于:所述抗体包被液中，分别抗CA724、CEA、CA 199的第一株单克隆抗体的浓度均为0.010 0.019g/L04.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，其特征在于:所述用Eu3+标记的抗CA724、Tb3+标记的抗CA199、Sm3+标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体中，用Eu3+标记的抗CA724抗体、Tb3+标记的抗CA199抗体、Sm3+标记的抗CEA抗体的质量配比为:Eu3+标记的抗CA724抗体:Tb3+标记的抗CA199抗体:Sm3+标记的抗CEA抗体=(3 6): (3 7): (5 9)。5.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，其特征在于:所述共用荧光增强剂的制备方法为:解离部分:将70 200 μ mo I的PTA、2 7 ...
【专利技术属性】
技术研发人员：王嘎，程自卿，
申请(专利权)人：河南生生医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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