本发明专利技术公开了一种快速制备羟基酪醇的新方法，属于天然产物有效成分提取分离技术领域。本发明专利技术是以含橄榄苦苷的油橄榄叶提取物为原料，在碱性条件下快速水解制备羟基酪醇的新方法，该方法包括如下步骤：称取一定量的油橄榄叶提取物与碱溶液混合，在一定的温度和时间下反应，冷却至是室温，再加入少量酸中和至pH=7，离心，收集上清液，加入适量的乙酸乙酯萃取，旋蒸去除乙酸乙酯，获得的浓缩液再依次通过大孔树脂和葡聚糖凝胶树脂，最后通过喷雾冷冻干燥或者真空冷冻干燥获得高纯度的羟基酪醇，其纯度最高可达90%以上。本发明专利技术操作简单、时间短、效率高、品质高，适合产业化等特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及天然产物化学有效成分提取纯化
，涉及的是一种制备高纯度的羟基酪醇的工艺方法。
技术介绍
轻基酪醇,又名3，4-二轻基苯乙醇,英文为Hydroxytyrosol,是一种天然小分子多酚化合物。它于1950年在狭叶松果菊中医松果菊苷的形式被发现。油橄榄叶中也存在羟基酪醇但含量甚微，约在0.2%-0.7%之间。由于表现出诸多的生物活性如抗氧化、抗炎、抗癌(前列腺癌和乳腺癌等)、保护心血管疾病、降血糖、修复软骨损伤或抑制肥胖等。尤其是其抗氧化性，羟基酪醇被认为是最具有清除自由基的天然抗氧化剂之一，其对细胞损害的自由基清除率是槲皮素的2倍，表儿茶酸的3倍之多，因其非常有效的生物活性，可以广泛用于食品、药品和化妆品领域，并且广受市场的欢迎。由于天然植物中存在的羟基酪醇含量较低，从大多数文献的报道发现有关羟基酪醇的制备主要是通过橄榄苦苷的水解得到。此夕卜，从国内外研究报道中发现，从油橄榄叶或油橄榄叶提取物水解制备羟基酪醇，主要是通过盐酸和β_葡萄糖苷酶作用制备羟基酪醇，而使用碱液水解尚未报道。而本专利，正是通过强碱水解橄榄苦苷制备羟基酪醇，再中和，乙酸乙酯萃取，萃取液旋蒸浓缩后加适量的水稀释，再通过大孔树脂和葡聚糖凝胶色谱，可得到HPLC纯度大于90%的羟基酪醇。由于前面水解的时间缩短，其效率得到提闻，提闻企业的生广效率，减少了其生广成本。首先，从国内专利看，专利CN101662956A是通过ρΗ=1 3的盐酸水解，反应时间多则7至8h，且最后的羟基酪醇的收率仅约为80%，前期水解的时间过长，不利于企业的生产周期的缩短。专利CN1665764A也是通过酸加入植物液，使橄榄苦苷转化羟基酪醇，其转化时间至少2个月，导致生产周期变长。专利CN101624607A通过多酚氧化酶将酪醇转化成羟基酪醇，所需转化的时间超过 lh。专利CN101973853A油橄榄叶水提液加入浓盐酸pH=l，煮沸时间也达3h。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决高纯度羟基酪醇的生产工艺时间长、效率低的问题，缩短生产周期。本专利技术所采取的技术方案包括如下: (I)碱水解:称取适量的油橄榄叶提取物，加入适量碱浓度，固液比为l:l(Tl:45(w/V),水解温度为25120°C,水解时间为1(T90 mins,进行水解反应,反应后冷却至室温,再加入适量的酸液中和，所述的碱溶液为NaOH和去离子水的混合液，酸液为HCl或者稀H2S04。(2)离心:将上述(I)的酸碱中和后的收集液在300(T6000r/min，5 20mins，进行离心。(3)分离纯化:将(2)离心后分离收集液加入萃取剂收集液体积的1/3，萃取3飞次，旋蒸回收乙酸乙酯，再加入适量的去离子水溶解稀释，先经过大孔树脂吸附，再用5%-95%乙醇-水溶液洗脱，旋蒸回收乙醇，收集的含羟基酪醇的水溶液最后再通过葡聚糖凝胶，再用1-8倍柱体积的1%飞0%乙醇-水溶液洗脱，旋蒸回收乙醇，得到含高纯度的羟基酪醇的水溶液。(4)干燥:将(3)最后收集到的含高纯度的羟基酪醇水溶液，进行真空冷冻干燥或者喷雾冷冻干燥，可得到含羟基酪醇90%以上的浸膏。步骤(I)中所述的碱浓度为0.05飞mol/L的NaOH水溶液。步骤(3)中所述的萃取剂为乙醚、氯仿、正丁醇、乙酸乙酯、正己烷或石油醚中的任意一种。步骤(3)中所述的收集液在30°C 50°C进行旋转蒸发回收溶剂，使用大孔树脂洗脱液物3飞倍柱体积的，乙醇-水溶液为10%飞5%。葡聚糖凝胶的洗脱液为5%-45%的乙醇水溶液；其中，大孔树脂的类型是DM-8、DM130、AB_8、HPD450、HPD100, HPD722和X-5中的一种，葡聚糖凝胶的类型是LH-20或Sephadex G_25中的一种。步骤(4)中所述的真空冷冻干燥的时间为fllh，或喷雾冷冻干燥的时间为f 2h。干燥的温度最大不超过25 45°C。与现有技术相比，本专利技术的有益效果:1、本专利技术采用碱性条件作用先水解，再用酸中和，使pH=7，在强碱作用下，橄榄苦苷快速分解，提高了羟基酪醇得率。同时缩短产品的生产周期，提高企业的生产效率。2、对羟基酪醇的纯化采用，大孔树脂和葡聚糖凝胶双重树脂纯化，使羟基酪醇的含量进一步得到提高。3、本专利技术工艺稳定，产品收率高且重现性好，产品品质好，易于工业化生产。附图说明 图1本专利技术提供的工艺流程图 图2大孔树脂纯化后的羟基酪醇HPLC图 图3葡聚糖凝集色谱纯化后的羟基酪醇HPLC图 图4羟基酪醇的质谱图具体实施例方式实施例1 称取50g粗橄榄苦苷的提取物(含橄榄苦苷38.3%)，加入IOOOmL的0.3mol/L NaOH，搅拌下反应30mins，再加入盐酸中和使溶液的pH=7，再加入300mL乙酸乙酯，重复萃取3次，旋蒸去除乙酸乙酯，加入50mL水稀释溶解，再通过AB-8大孔树脂，充分吸附后，再用40%的乙醇水溶液进行洗脱，收集3-5BV的溶液，再通过葡聚糖凝胶树脂LH-20，用60%乙醇水溶液进行洗脱，收集4-6BV的溶液，最后旋蒸回收乙醇，浓缩液通过真空冷冻干燥，获得固体含量7.36g，其中羟基酪醇的HPLC的含量达93.12%。 实施例2 称取30g粗橄榄苦苷的提取物(含橄榄苦苷27.93%)，加入800mL的0.2mol/L NaOH，搅拌下反应45mins，再加入盐酸中和使溶液的pH=7，再加入150mL乙酸乙酯，重复萃取3次，旋蒸去除乙酸乙酯，加入35mL水稀释溶解，再通过AB-8大孔树脂，充分吸附后，再用55%的乙醇水溶液进行洗脱，收集2-4BV的溶液，再通过葡聚糖凝胶树脂LH-20，用50%乙醇水溶液进行洗脱，收集3-4BV的溶液，最后旋蒸回收乙醇，浓缩液通过真空干燥，获得固体含量3.87g，其中羟基酪醇的HPLC的含量达89.58%。 实施例3 称取80g干燥的油橄榄叶(含橄榄苦苷8.21%)，粉碎至40-60目，加入2400mL的.0.3mol/L NaOH,搅拌下反应40mins,再加入稀硫酸中和使溶液的pH=7,再加入500mL乙酸乙酯，重复萃取3次，旋蒸去除乙酸乙酯，加入150mL水稀释溶解，再通过HPD-450大孔树月旨，充分吸附后，再用55%的乙醇水溶液进行洗脱，收集3-5BV的溶液，再通过葡聚糖凝胶树脂LH-20，用65%乙醇水溶液进行洗脱，收集3-5BV的溶液，最后旋蒸回收乙醇，浓缩液通过真空冷冻干燥，获得固体含量5.35g，其中羟基酪醇的HPLC的含量达85.12%。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种快速制备羟基酪醇的新方法，其特征在于该方面包括以下步骤：(1) 碱水解：称取适量的油橄榄叶提取物，加入适量碱浓度，固液比为1:10~1:45(w/v)，水解温度为25~120℃，水解时间为10~90 mins，进行水解反应，反应后冷却至室温，再加入适量的酸液中和，所述的碱溶液为NaOH的去离子水溶液，酸液为HCl或者稀H2SO4。
【技术特征摘要】
1.一种快速制备羟基酪醇的新方法，其特征在于该方面包括以下步骤: (I)碱水解:称取适量的油橄榄叶提取物，加入适量碱浓度，固液比为l:l(Tl:45(w/V),水解温度为25120°C,水解时间为1(T90 mins,进行水解反应,反应后冷却至室温,再加入适量的酸液中和，所述的碱溶液为NaOH的去离子水溶液，酸液为HCl或者稀H2S04。2.(2)离心:将上述(I)的水解液经过酸或碱中和后的溶液进行收集，并在3000 6000r/min, 5 20mins的条件下使用离心机进行离心。3.(3)分离纯化:将(2)离心分离后的收集液转移至分液漏斗中，加入萃取剂，其体积约为收集液的1/3，震荡摇匀，萃取3飞次，静置分层，收集下层液体进行旋蒸并回收乙酸乙酯，再加入适量的去离子水溶解稀释，稀释液先经过大孔树脂吸附，再用5%-95%乙醇-水溶液进行梯度洗脱，收集目标产物溶液，再对收集的溶液旋蒸，同时回收乙醇；收集的溶液最后再通过葡聚糖凝胶，再用1-8倍柱体积的19Γ60%乙醇-水溶液梯度洗脱，其收集液进行旋蒸并回收乙醇，最后得到含高纯度的羟基酪醇的水溶液。4.(4)...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄立新，谢普军，张彩虹，游凤，张耀雷，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林产化学工业研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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