本发明专利技术公开了马钱苷（Loganin）的新医药用途，具体地说是涉及马钱苷在制备治疗糖尿病药物中的应用，该马钱苷是从山茱萸中提取获得。其提取步骤为：（1）取山茱萸粗粉，经水提醇沉得山茱萸水提醇沉提取液；（2）将山茱萸水提醇沉提取液，载入大孔吸附树脂柱，富集得山茱萸环烯醚萜苷类；（3）用硅胶柱层析分离得马钱苷流份；（4）纯化的马钱苷单体化合物；经药效学试验结果证实，马钱苷作用为降低血糖、血清AGEs和尿蛋白含量，升高血清胰岛素水平，减轻胰腺、肾脏、肝脏、心脏、睾丸等病理性损害，且对“三多一少”症状有明显改善。因此本发明专利技术提供的马钱苷可作为制备治疗糖尿病的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及马钱苷的新医药用途，具体地说是涉及山茱萸中有效成分马钱苷在制备治疗糖尿病药物中的应用。
技术介绍
糖尿病在中医学上属于“消渴证”范畴。长期糖尿病可引起糖尿病的慢性并发症，其中主要是血管病变。大血管病变性质为动脉粥样硬化，主要累及主动脉、冠状动脉等大血管，而糖尿病的微血管病变主要表现为视网膜、肾等微血管病变。临床统计表明，40% —50%的糖尿病患者在发病10年后发生视网膜病变；约有2%的患者在发病15年后完全失明；5% 10%的患者在发病20年后恶化成终末期肾病。虽然糖尿病慢性并发症的发生发展的确切病理机制目前尚不十分详尽，但主要有非酶糖化学说、多元醇通路学说、蛋白激酶C激活学说、氧化应激等多种假说。非酶糖化学说认为，在长期高血糖状态下，葡萄糖分子可与体内蛋白质发生非酶糖基化反应，形成不可逆的强活性物质一晚期糖基化终产物(AGEs)的结果。AGEs的毒性很大，如肾小球基底膜AGEs经交联后，使其支架结构孔径增大，通透性升高，“捕捉”血液循环中蛋白、免疫球蛋白等，使基底膜增厚以及尿蛋白排出增多。AGEs也具有化学趋向性，促使单核-巨噬细胞向细胞外基质(ECM)迁移，并引起单核-巨噬细胞、内皮细胞和系膜细胞分泌细胞因子，如TNF-a、IL-1 a、IGF-1A、I3DGF等，导致肾小球增殖性病变。此外，AGEs与细胞表面RAGE结合后激活信号转导通路，生成多种损伤因子如TNF- α、IL-6、TGF-13，从而进一步导致和加重糖尿病慢性并发症的发生和发展。目前临床用于治疗糖尿病的化学药物如磺酰脲类、双胍类等，虽然有一定的降血糖作用，但由于副作用较大，且对已生成的AGEs无影响，故不能减缓糖尿病慢性并发症的发生，在治疗糖尿病上具有一定的局限性。因此寻找既有降 血糖作用，又能减缓其慢性并发症的药物具有很重要的意义。
技术实现思路
专利技术目的:本专利技术的目的在于提供马钱苷的新医药用途，具体地说在于提供山茱萸中有效成分马钱苷在制备治疗糖尿病药物中的应用。技术方案:一种治疗糖尿病的单体化合物——马钱苷，该化合物是从山茱萸中提取分离而获得，步骤中包含了水煎醇沉、分离、纯化等具体提取步骤如下:1.水提醇沉提取液的制备:称取山茱萸粗粉，加入2 12倍水浸泡过夜，煎煮2 4次，合并水提液，减压浓缩至原体积的1/2 1/10，加入2 10倍量无水乙醇，搅匀，冷藏过夜，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至无醇味，得山茱萸水提醇沉提取液；2.山茱萸环烯醚萜苷类的制备:取上述所得山茱萸提取液，载入DlOl大孔吸附树脂柱，先用1000 4000mL蒸馏水洗脱，再用20 60%乙醇水溶液1000 5000mL洗脱，收集流出液，将洗脱部分减压浓缩得红棕色浸膏，将浸膏转移至培养皿中，放置于超低温冷冻冰箱内冷冻，干燥后研磨成粉末得山茱萸环烯醚萜苷类；3.马钱苷单体化合物的制备:采用硅胶(100 200目)湿法装柱，取上述所得冻干粉，以适量甲醇溶解，加入等量硅胶拌样，减压回收甲醇至干，得红棕色粉末；上硅胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇(3 8:1)溶剂系统进行等度洗脱，收集流出液，再减压至干，用适量甲醇溶解，硅胶薄层色谱跟踪检测，合并目的物的所有流份，并适当挥去一部分甲醇；4、将以上流份经制备型高效液相色谱进行纯化，每针进样I 5mL样品溶液，分离时间10 40min，洗脱液用去离子水和甲醇的混合溶液，以10 30%甲醇水溶液为弱洗、70 90%甲醇水溶液为强洗，根据色谱中色谱峰的时间收取，然后合并含有马钱苷的流出液，浓缩所得溶液至含有较少水份，冷冻干燥，得到马钱苷单体化合物，纯度为98.5%。山茱萸中有效成分马钱苷在制备治疗糖尿病药物中的应用。本专利技术山茱萸药材为山茱萸科植物山茱萸CornusoficinalisSieb.etZucc.的干燥成熟果肉。现代化学研究表明山茱萸药效成分主要有环烯醚萜苷、三萜酸和多糖。环烯醚萜苷类的主要成分是莫诺苷、马钱苷、獐牙菜苷等，其中环烯醚萜苷具有降血糖、抗血小板聚集和抗血栓等作用；多糖具有抗氧化、抗衰老等作用；三萜酸具有抗炎、降脂、降血糖和抗癌作用。山茱萸乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位、乙醇提取液具有降低血糖和升高胰岛素的水平。山茱萸，味酸涩微温，归肝，肾经，补益肝肾，涩精固脱。前期的整体动物实验研究也发现，山茱萸环烯醚萜类能改善糖尿病大鼠血糖水平、抑制蛋白尿、减少尿糖代谢，恢复NO-ET与TXA2-PGI2平衡，抑制AGEs的生成，减轻肾病变、心肌病变、视网膜病变和胸主动脉病变，表明环烯醚萜类具有改善糖尿病的血糖水平及慢性并发症的作用。马钱苷的纯度测定米用HPLC 法测定。条件为色谱柱:ThermoODSHypersil (4.6mmX 150mm, 5 μ m);流动相:7jC -乙腈(88:12);流速ImL -min-l ;进样量:20 μ L ;柱温35°C ;检测波长240nm。图1o本专利技术提供的马钱苷经AGEs饲料复合STZ致糖尿病小鼠模型的研究表明，该化合物可改善糖尿病小鼠“三多一少”症状，降糖作用明显，保护胰岛、肾脏、心脏、睾丸效果良好。因此本专利技术提供的马钱苷可以作`为制备治疗糖尿病的药物。附图说明图1、样品中马钱苷HPLC色谱图。图2、样品中马钱苷HPLC氢谱图。图3、样品中马钱苷HPLC碳谱图。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐明本专利技术，应理解这些实施例仅用于说明本专利技术，而不用于限制本专利技术的范围，在阅读了本专利技术之后，本领域技术人员对本专利技术的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。实施例1山茱萸中有效成分马钱苷单体化合物的提取方法，其提取方法步骤如下:( I)山茱萸水提醇沉提取液的提取: 称取山茱萸粗粉(过10目筛)约5kg，加入6倍水浸泡过夜，然后煎煮2次，每次lh，滤过，合并水提液，减压浓缩至原体积的1/5，加入4倍量无水乙醇，搅匀，冷藏过夜，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至无醇味，得山茱萸水提醇沉提取液；(2)大孔树脂富集山茱萸提取液中的环烯醚萜苷类:取步骤I中所得山茱萸提取液，载入DlOl大孔吸附树脂柱，先用2000mL蒸馏水洗脱，以除去部分杂质，再用30%乙醇水溶液约2500mL洗脱，收集流出液，将30%乙醇水溶液洗脱部分减压浓缩，得红棕色浸膏，将浸膏转移至培养皿中，放置于_86oC超低温冷冻冰箱内冷冻约3h，取出，冷冻干燥，得红棕色固体物质，小心研磨成粉末，放入干燥器内储存，待用；(3)硅胶柱层析分离得马钱苷流份:硅胶(100 200目)湿法装柱，取步骤(2)中所得冻干粉，以适量甲醇溶解，加入等量硅胶拌样，减压回收甲醇至干，得红棕色粉末；上硅胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇(6:1)溶剂系统进行等度洗脱，每小时收集一份约500mL的流出液，再减压至干，用适量甲醇溶解，硅胶薄层色谱跟踪检测，根据薄层色谱检查结果，初步判定流份中是否含有目的物马钱苷，再以高效液相色谱法分析确认，根据色谱图判断含有马钱苷的流份，合并含有相似纯度的目的物的所有流份，并挥去一部分甲醇，以达到浓缩的目的；(4)制备HPLC纯化马钱苷单体化合物将步骤(3)中所得的流份经制备型高效液相色谱进行纯化，每针进样I 5mL样品溶液，分离时间20min，每小时约进样三针，洗脱液用去离子水和甲醇本文档来自技高网...
【技术保护点】
山茱萸中有效成分马钱苷在制备治疗糖尿病药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.山茱萸中有效成分马钱苷在...
【专利技术属性】
技术研发人员：许惠琴，吕高虹，杨欢，赵腾斐，狄留庆，刘斌，李伟，吴佳蕾，陶玉菡，刘凯，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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