本发明专利技术涉及一种从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法，其是利用连翘叶中的连翘苷为非极性化合物，易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，难溶于水，连翘酯苷A为极性化合物，易溶于水、甲醇、乙醇等，芦丁易溶于甲醇、热乙醇，不易溶于水的特性，综合考虑，通过乙醇浸提、大孔吸附树脂分离、反相硅胶柱层析连续提取工艺，从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁，能把连翘叶的有效活性成分提取完全，合理利用了连翘叶资源；同时，本发明专利技术使用大孔吸附树脂的吸附和解吸附，可分离连翘苷、连翘酯苷A和芦丁，用反相硅胶纯化连翘酯苷A，分离完全，而且纯度较高，工艺条件简单，适合工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种属于连翘叶分离
，特别是一种从天然植物连翘叶中连续提取有效成分连翘酯苷A、连翘苷和芦丁的方法。
技术介绍
连翘为木犀科连翘属落叶灌木，是常用药材，传统以果实入药，但民间调查显示，连翘叶有消除便秘，预防感冒，降血脂，降血压等作用。国内己有研究者对连翘叶的化学成分进行了初步分析，并利用连翘叶制成茶叶作为滋补调理饮料应用。连翘叶常作为保健茶使用，化学研究证明，连翘叶与常用药材连翘果实的化学成分有较好一致性，主要含有木质素类、苯丙素苷类、三萜酸类、黄酮类和挥发油类等，并且叶子中的有效生物活性成分如连翘苷、连翘酯苷的含量远高于连翘果实。连翘苷和连翘酯苷A是国家药典2010年版规定的连翘质量控制指标成分。连翘苷有较好的抗菌、降血脂和减肥作用；连翘酯苷有较好的抗病毒和抗氧化作用，对金黄色葡萄球菌等多种致病菌具有抑制作用，还能抑制磷酸二酯酶、真菌以及活性氧；芦丁具有抗炎、抗病毒、抗氧化、降低毛细血管脆性和通透性等作用。三者在医药和食品领域作为天然药物、天然防腐剂、天然抗氧化剂均具有很广泛的应用前景。目前各种文献资料中，从连翘果实或连翘叶中只单独提取一种活性成分或者两种，没有合理利用连翘资源，造成资源的严重浪费。如中国专利200610148179.0，200810176773.X, 201010235729.9等都是针对一种活性成分进行工艺研究，中国专利201110209731.3公开了一种从连翘叶提取连翘苷和连翘酯苷A的方法，其先通过热水提取，沉淀分离，再用有机溶剂萃取，乙醇重结晶等制备连翘苷和连翘酯苷A，但耗时太长，得率比较低，而且大量芦丁被丢弃。现有技术采用的方法直接水提或水提后有机溶剂萃取，或碱水提取，或酸水提取，没有综合考虑其他活性物质的活性，而且操作复杂，成本较高。目前尚未见到从连翘叶中同时提取分离连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的相关报道。
技术实现思路
为了解决现有技术中提取分离连翘苷、连翘酯苷A所存在的技术问题，本专利技术提供了一种方法简单，原料利用率高、可从连翘叶中连续提取分离出连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法。解决上述技术问题所采用的技术方案是由以下步骤组成:( 1)提取将连翘叶粉碎至40 60目，60 75°C用体积浓度为55%的乙醇浸提40 60分钟，每Ig连翘叶对应添加15 40mL的乙醇，优选20 30mL，提取2 3次，合并浸提液，静置，过滤，50 60°C减压浓缩回收乙醇，按照每IOOmL浓缩液中添加3 6mL的量向浓缩液中添加无水乙醇，优选4 5mL，室温静置，过滤，得到连翘叶提取液；(2)树脂分离将连翘叶提取液用大孔吸附树脂吸附，连翘叶与大孔吸附树脂的质量比为1:1.6 2，优选1:1.8，水洗杂质，用体积浓度为30%的乙醇洗脱，洗脱流速为I 3BV/h，洗脱体积为5 8BV，得到馏分I，用浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱流速为I 3BV/h，洗脱体积为5 8BV，得到馏分II ；(3)沉淀分离将馏分I减压浓缩回收乙醇，室温静置至沉淀物与水分离，得到沉淀物为芦丁粗品，水层为连翘酯苷A粗提液，用水饱和的正丁醇萃取I 3次，回收正丁醇，余液干燥，得到连翘酯苷A粗品；将馏分II减压浓缩回收乙醇，室温静置，分离沉淀，得到连翘苷粗品；(4)纯化将步骤(3)中所得的连翘苷粗品和芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶2 4次，干燥，分别得到连翘苷和芦丁 ；将连翘酯苷A粗品用体积浓度为30%的甲醇溶解，用C18反相硅胶柱层析分离，体积浓度为30%的甲醇平衡，体积浓度为40%的甲醇洗脱，35 40°C减压浓缩回收甲醇，余液冷冻干燥，得连翘酯苷A。上述大孔吸附树脂的型号是AB-8或DlOl。上述步骤(4)中将连翘苷粗品和芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶2 4次，干燥，分别得到连翘苷和芦丁 ；将连翘酯苷A粗品用体积浓度为30%的甲醇溶解，用C18反相硅胶柱层析分离，3倍柱床体积的浓度为30%的甲醇平衡，体积浓度为40%的甲醇洗脱，35 40 V减压浓缩回收甲醇，冷冻干燥，得连翘酯苷A。本专利技术从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法是利用连翘叶中的连翘苷为非极性化合物，易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，难溶于水，连翘酯苷A为极性化合物，易溶于水、甲醇、乙醇等，芦丁易溶于甲醇、热乙醇，不易溶于水的特性，综合考虑，通过乙醇浸提、大孔吸附树脂分离、反相硅胶柱层析连续提取工艺，从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁，能把连翘叶的有效活性成分提取完全，合理利用了连翘叶资源；同时，本专利技术使用大孔吸附树脂的吸附和解吸附，可分离连翘苷、连翘酯苷A和芦丁，用反相硅胶纯化连翘酯苷A，分离完全，而且纯度较高，工艺条件简单，适合工业化生产。附图说明图1为连翘酯苷A、芦丁和连翘苷的标准品混合样与实施例1提取的连翘酯苷A、芦丁和连翘苷制品的高效液相色谱图。图2为实施例1提取的连翘酯苷A与标准品的紫外扫描对比图。图3为实施例1提取的芦丁与标准品的紫外扫描对比图。图4为实施例1提取的连翘苷与标准品的紫外扫描对比图。具体实施例方式现结合具体的实施例对本专利技术进行进一步的说明，但本专利技术的不仅限于下属的实施例。实施例1 以原料连翘叶40g为例，从连翘叶中连续提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法，由以下步骤组成:(1)提取将40g连翘叶粉碎至50目，用IOOOmL体积浓度为55%的乙醇70°C浸提50分钟，连翘叶与乙醇的料液比为1:25g/mL，过滤，滤渣再加入800mL体积浓度为55%的乙醇70°C浸提50分钟，合并2次的浸提液，静置12小时，过滤，55°C减压浓缩回收乙醇，得浓缩液665mL,按照每IOOmL浓缩液中添加5mL无水乙醇的量向浓缩液中加入33.25mL无水乙醇，室温静置12小时，过滤，得到连翘叶提取液。(2)树脂分离将连翘叶提取液通过72g体积为2.6cm (直径)X 25cm (柱高)的AB_8大孔吸附树脂柱吸附，连翘叶与AB-8大孔吸附树脂的质量比为1: 1.8，用10001^水洗杂质，用7251^体积浓度为30%的乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，得到馏分I，用700mL体积浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，得到馏分II。(3)沉淀分离将馏分I 50°C减压浓缩回收乙醇，得馏分I浓缩液70mL，室温静置至沉淀物与水层分离，沉淀物为0.282g芦丁粗品，水层为70mL连翘酯苷A粗提液，用水饱和的正丁醇萃取2次，回收正丁醇，余液在50°C烘箱干燥，得到4.76g连翘酯苷A粗品；将馏分II 50°C减压浓缩回收乙醇，得馏分II浓缩液70mL，室温静置，分离沉淀得到0.735g连翘苷粗品。(4)纯化将0.735g连翘苷粗品和0.282g芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶3次，干燥，得到纯度95%的0.128g连翘苷和94%的0.149g芦丁 ；将4.76g连翘酯苷A粗品用8cm (直径)X50cm (柱高)的C18反相硅胶柱层析分离，用体积浓度为30%的甲醇溶解粗品，用3倍反相硅胶柱柱床体积的浓度为30%的甲醇平衡，用体积浓度为40%的甲醇洗脱，经薄层层析法确定，当洗脱到7000mL时开始收集连翘酯苷A洗脱峰，收集体积为3360mL，38°C减压浓缩回收甲醇，余液冷冻干燥，得2.557g纯度为93%的连翘酯苷A。实施例2以本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法，其特征在于该方法由以下步骤组成：（1）提取将连翘叶粉碎至40～60目，60～75℃用体积浓度为55%的乙醇浸提40～60分钟，每1g连翘叶对应添加15～40mL的乙醇，提取2～3次，合并浸提液，静置，过滤，50～60℃减压浓缩回收乙醇，按照每100mL浓缩液中添加3～6mL的量向浓缩液中添加无水乙醇，室温静置，过滤，得到连翘叶提取液；（2）树脂分离将连翘叶提取液用大孔吸附树脂吸附，连翘叶与大孔吸附树脂的质量比为1：1.6～2，水洗杂质，用体积浓度为30%的乙醇洗脱，洗脱流速为1～3BV/h，洗脱体积为5～8BV，得到馏分Ⅰ，用浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱流速为1～3BV/h，洗脱体积为5～8BV，得到馏分Ⅱ；（3）沉淀分离将馏分Ⅰ减压浓缩回收乙醇，室温静置至沉淀物与水分离，得到沉淀物为芦丁粗品，水层为连翘酯苷A粗提液，用水饱和的正丁醇萃取1～3次，回收正丁醇，余液干燥，得到连翘酯苷A粗品；将馏分Ⅱ减压浓缩回收乙醇，室温静置，分离沉淀，得到连翘苷粗品；（4）纯化将步骤（3）中所得的连翘苷粗品和芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶2～4次，干燥，分别得到连翘苷和芦丁；将连翘酯苷A粗品用体积浓度为30%的甲醇溶解，用C18反相硅胶柱层析分离，体积浓度为30%的甲醇平衡，体积浓度为40%的甲醇洗脱，35～40℃减压浓缩回收甲醇，余液冷冻干燥，得连翘酯苷A。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨建雄，李忠岐，刘伟霞，颜礼有，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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