本发明专利技术提供一种横纹肌肉瘤的检测方法，其特征在于，对于来自体液的样本，评价选自hsa-miR-1、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b和hsa-miR-206中的至少1种miRNA的表达。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及。
技术介绍
本专利技术人等专心致力于使用血清中来自肿瘤的游离DNA的非侵袭性诊断技术的开发(非专利文献1、2)。近年来,证明了不被翻译为蛋白质的叫做microRNA (miRNA)的非编码RNA的存在，并报告其表达谱为组织或肿瘤特异性的(非专利文献3、4)。在儿童癌症中使用细胞株的研究中，有表达谱因肿瘤而异的报告(非专利文献5)。另外，作为在儿童癌症中最多的软组织肉瘤的横纹肌肉瘤中，明确了在肌肉中特异性表达的miRNA的表达上升(非专利文献5、6)。另一方面，明确了血清中存在来自肿瘤的miRNA，这教导了在大肠癌、淋巴瘤、前列腺癌、肝癌等中miRNA作为生物标记是有用(非专利文献7 10)。 现有技术文献非专利文献非专利文献I:Gotoh, et al.J Clin Oncol 23:5205-5210, 2005非专利文献2:Yagyu, et al.Clin Cancer Res 14:7011-7019, 2008非专利文献3:Calin GA, et al.Nat Rev Cancer;6:857-866, 2006非专利文献4:Lu J, et al.Nature; 435:834-838，2005非专利文献5:Wei JS, et al.Clin Cancer Res; 15:5560-5568，2009非专利文献6:Subramanian S, et al.0ncogene; 27:2015-2026, 2008非专利文献7:Ng EKO’et al.Gut; 58:1375-1381，2009非专利文献8 =Mitchell PS, et al.PNAS; 105:10513-10518，2008非专利文献9:Lawrie CH, et al.Br J Haematol; 141:672-675，2008非专利文献10:Yamamoto Y, et al.Biomarkers; 14:529-538, 2009
技术实现思路
专利技术所要解决的问题本专利技术的目的在于提供容易地检测出难以诊断的横纹肌肉瘤的方法。解决问题的方法对于来自儿童肿瘤患者的体液的样本，本专利技术的专利技术人等对作为在肌肉中特异性表达的miRNA群的hsa-miR-1、133a、133b、206进行定量，针对横纹肌肉瘤的非侵袭性诊断是否能够进行了研究。其结果，发现能够通过这些miRNA来检测出横纹肌肉瘤。本专利技术提供以下的横纹肌肉瘤的检测方法。项目1.一种横纹肌肉瘤的检测方法，其特征在于，对于来自体液的样本，评价选自hsa-miR-1、hsa_miR-133a、hsa_miR-133b 和 hsa-miR-206 中的至少 I 种 miRNA 的表达。项目2.项目I中记载的横纹肌肉瘤的检测方法，其中，检测的标准为:在来自体液的样本中，选自 hsa-miR-1、hsa_miR-133a、hsa_miR-133b 和 hsa-miR-206 中的至少 I 种的表达量相比于健康人显著亢进。项目3.项目1中记载的横纹肌肉瘤的检测方法，其特征在于，评价选自hsa-miR-133a, hsa_miR-133b 和 hsa-miR-206 中的至少 I 种 miRNA 的表达。项目4.项目1中记载的横纹肌肉瘤的检测方法，其特征在于，至少评价hsa-miR-206 的表达。项目5.项目1中记载的横纹肌肉瘤的检测方法，其中，通过实时PCR(Real TimePCR )法进行检测。项目6.项目1中记载的横纹肌肉瘤的检测方法，其中，体液为血液，来自体液的样本为血衆或血清。专利技术的效果横纹肌肉瘤为难以诊断的肿瘤之一，但本专利技术使用以往一直认为不可能用于检测的来自体液的样 本就能够检测出横纹肌肉瘤。就横纹肌肉瘤而言，在化学疗法、放射线疗法之前将肿瘤完全切除对于预后的改善很重要，在术前进行临时诊断以确定初次以完全切除为目标的手术方案很重要的。本专利技术能够更准确且迅速地实现横纹肌肉瘤的诊断，能够期待提高横纹肌肉瘤的治疗效果。附图说明 图1表示在横纹肌肉瘤细胞株中,肌肉特异性microRNA的表达允进。纵轴是肌肉特异性miRNA和hsa-miR-16之比。RMS:横纹肌肉瘤、NB:成神经细胞瘤、EWS:尤文氏肉瘤、MRT:恶性横纹肌样肿瘤。图2表示在横纹肌肉瘤肿瘤样本中，肌肉特异性microRNA的表达亢进。纵轴是肌肉特异性miRNA和hsa-miR-16之比。RMS:横纹肌肉瘤、nonRMS:横纹肌肉瘤以外的肿瘤。图3 表不 hsa-miR-1、hsa-miR-206> hsa_miR-133a、hsa_miR-133b 的横纹肌肉瘤细胞株的培养上清的表达量。纵轴是肌肉特异性miRNA和hsa-miR-16之比。RMS:横纹肌肉瘤、NB:成神经细胞瘤、EWS:尤文氏肉瘤、MRT:恶性横纹肌样肿瘤。图4是健康人、癌症患儿、横纹肌肉瘤(RMS)患儿的血清hsa-miR-1的比较。纵轴是hsa-miR-l/hsa-miR-16比。RMS:横纹肌肉瘤、nonRMS:横纹肌肉瘤以外的肿瘤。图5是健康人、癌症患儿、横纹肌肉瘤(RMS)患儿的血清hsa-miR-133a的比较。纵轴是hsa-miR-133a/hsa_miR-16比。RMS:横纹肌肉瘤、nonRMS:横纹肌肉瘤以外的肿瘤。图6是健康人、癌症患儿、横纹肌肉瘤(RMS)患儿的血清hsa-miR-133b的比较。纵轴是hsa-miR-133b/hsa_miR-16比。RMS:横纹肌肉瘤、nonRMS:横纹肌肉瘤以外的肿瘤。图7是健康人、癌症患儿、横纹肌肉瘤(RMS)患儿的血清hsa-miR-206的比较。纵轴是hsa-miR-206/hsa-miR_16比。RMS:横纹肌肉瘤、nonRMS:横纹肌肉瘤以外的肿瘤。图8表示治疗后的RMS患儿中肌肉特异性miRNA/hsa-miR-16比的降低。纵轴是肌肉特异性miRNA/hsa-miR-16比。图9表示人血清中miRNA的稳定性。在4°C保存下验证了血清microRNA的稳定性。就hsa-miR-16、hsa-miR-133b两者而言，Ct值随着保存期间的延长有渐增趋势，在第30天上升了 3到4 (绝对量降低为1/16到1/8)。另一方面，对于hsa-miR-133b/has-miR-16没有确认到大的变化。图10表示血清肌肉特异性miRNA对横纹肌肉瘤病势的反映。图11表示在横纹肌肉瘤患儿的血清以外的体液(脑脊液、胸腔积液)中也检测到肌肉特异性miRNA。图12表示体液中的肌肉特异性miRNA对横纹肌肉瘤病势的反映。具体实施例方式本专利技术中作为检测对象的hsa-miR-1、hsa_miR-133a、hsa_miR-133b 和hsa-miR-206的序列表示如下。另外，将因表达高、组织间的表达偏差少而能够作为内对照使用的hsa-miR-16的序列一并不于表I。表I权利要求1.一种横纹肌肉瘤的检测方法，该方法包括:对于来自体液的样本，评价选自hsa-miR-1、hsa_miR-133a、hsa_miR-133b 和 hsa-miR-206 中的至少 I 种 miRNA 的表达。2.根据权利要求1所述的横纹肌肉瘤的检测方法，其中，其检测的标准为:与健康人本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种横纹肌肉瘤的检测方法，该方法包括：对于来自体液的样本，评价选自hsa‑miR‑1、hsa‑miR‑133a、hsa‑miR‑133b和hsa‑miR‑206中的至少1种miRNA的表达。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：细井创，宫地充，
申请(专利权)人：京都府公立大学法人， LSIP基金运营联合公司，
类型：发明
国别省市：日本;JP
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。