T细胞受体制造技术

一种T细胞受体(TCR)，其具有EVDPIGHLY?HLA-A1复合体结合特性并包含特定的野生型T细胞受体(TCR)，所述TCR在TCRα可变结构域和/或TCRβ可变结构域具有特定突变以增强亲和力。所述TCR可用于过继治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞受体本专利技术涉及结合EVDPIGHLY肽(源自MAGE-3蛋白)的T细胞受体(TCR)，所述肽以肽-HLA-Al复合体形式存在，所述TCR相对天然MAGE-A3 TCRa和/或0可变结构域进行突变，且对所述复合体所具有的结合亲和力和/或结合半衰期至少两倍于參比MAGE-A3TCR。
技术介绍
所述EVDPIGHLY(SEQ ID No:1)肽对应已知MAGE-3蛋白的氨基酸残基168-176。所述MAGE-3蛋白在多种肿瘤类型中有表达，包括黑色素瘤，以及其他固体肿瘤如头颈部鳞状细胞癌、肺癌、膀胱癌、胃癌和食道癌。所述MAGE-3肽EVDPIGHLY (SEQ ID No:1)是鉴定最充分的MAGE-3表位。它由HLA-Al和HLA-B35限制性T细胞识别。它能诱发细胞毒性抵御肽冲击，HLA-Al阳性靶细胞和MAGE-3-表达型HLA-Al阳性黑色素瘤细胞系。所述肽用作疫苗已表明可在ー些患者中诱导肿瘤消退和诱发CTL反应。因此，所述EVDPIGHLY HLA-Al复合体提供了本专利技术所述TCR可靶向的癌症标志物。比如，本专利技术的TCR可以转入T细胞内使其可以破坏呈递该HLA复合体的肿瘤细胞，用于在称作过继治疗的治疗过程中施于患者。为此，需要所述TCR相比所述肽-HLA复合体的特异性天然TCR而言对该复合体具有更高的亲和カ和/或更低的解离速率。亲和カ显著增加伴有TCR基因修饰的⑶8T细胞丧失抗原特异性，这会导致非特异性激活这些TCR转染的CD8T细胞，因此过继治疗优选的TCR相比所述肽-HLA复合体的特异性天然TCR而言对该复合体的亲和カ稍高和/或解离速率稍低，而非对所述肽-HLA复合体的亲和カ显著高于和/或解离速率显著低于天然TCR (见Zhao等(2007) J Tmmuno1.179:5845-54; Robbins等(2008) J Immunol.180:6116-31 ;也可见已公开的 W02008/038002)。TCR采用国际免疫遗传学(IMGT) TCR命名法进行表述，并与TCR序列的IMGT公开数据库相链接。天然杂ニ聚体TCR 具有a链和0链。宽泛地，每个链包括可变区、连接区和恒定区，P链还通常在可变区和连接区之间含有短的多变区，不过该多变区常被视为连接区的一部分。每个可变区包括嵌于构架序列中的三个CDR(互补决定区)，ー个是名为CDR3的高变区。共有几种类型的a链可变区(Va )和几种类型的P链可变区(V3 )，通过它们的构架，⑶Rl和⑶R2序列，以及部分限定的⑶R3序列进行区分。V a类型在頂GT命名法中通过特有的TRAV数来定名。因此，“TRAV21”限定义的TCR Va区具有独特的构架、⑶Rl和⑶R2序列，以及部分由TCR相互之间保守的氨基酸序列限定但还包括TCR相互之间有变化的氨基酸序列的⑶R3序列。同样地，“TRBV5-1”限定的TCR 区具有独特的构架、⑶Rl和⑶R2序列，以及仅部分限定的⑶R3序列。所述TCR的连接区类似地由特有的頂GT TRAJ和TRBJ命名法限定，而恒定区由IMGT TRAC和TRBC命名法限定。P链多变区在頂GT命名法中由缩略语TRBD定名，并如提到的，连接好的TRBD/TRBJ区常一起被视为连接区。一般认为a P TCR的a和P链各自含有两个“结构域”，即可变和恒定结构域。可变结构域由可变区和连接区的连接体组成。因此，本专利技术说明书和权利要求中，术语“TCRa可变结构域”指TRAV和TRAJ区的连接体，而术语TCR α恒定结构域指胞外TRAC区，或指C端截短的TRAC序列。类似的，术语“TCRβ可变结构域”指TRBV和TRBD/TRBJ区的连接体，而术语TCR β恒定结构域指胞外TRBC区，或指C端截短的TRBC序列。由IMGT命名法限定的特有序列已为TCR领域相关人员熟知并可获取。例如，可在IMGT公共数据库中找到这些序列。“T cell Receptor Factsbook(《T细胞受体丛书》)” (2001)LeFranc 和 LeFranc,学术出版社(Acadamic Press), ISBN0-12-441352-8 也公开了由IMGT命名法定义的序列，不过因为它的发表日期和时间间隔，有时需要通过参考IMGT数据库来确认信息。 我们已证实天然的MAGE-3 TCR(来源于比利时布鲁塞尔B-1200，希波克拉底斯大道74号UCL7459，鲁汶大学细胞遗传学部门Pierre G.Coulie博士的克隆EB81-103 ;另见Karanikas 等(2003)Monoclonal ant1-MAGE-3 CTL responses in me Ianoma patientsdisplaying tumor regression after vaccination with a recombinant canarypoxvirus.(黑色素瘤患者中单克隆抗MAGE-3 CTL响应接种重组金丝雀痘病毒后显示肿瘤消退)〃J.1mmunol.171(9):4898-904))具有如下α链和β链可变、连接和恒定基因用法:α 链-TRAV21*01/TRAJ28/TRAC(SEQ ID No: 2 给出天然 MAGE-A3 TCRa 链的胞外序列)。β 链-TRBV5-1*01/TRBD1/TRBJ2-7*01/TRBC2(SEQ ID No: 3 给出天然 MAGE-A3TCR^链的胞外序列)。(需注意，TRBV5-1序列有两个等位基因变体，IMGT命名法中分别称作TRBV5-1*01和*02，上面所指的天然MAGE-A3TCR克隆具有*01变异。同样地，TRBJ2-7序列有两个已知变体，上面所指的TCR克隆中存在*01序列。另注意，没有限定符意味着相关序列只有一个已知等位基因。)术语“野生型TCR”、“天然TCR”、“野生型MAGE-A3 TCR”和“天然MAGE-A3 TCR”在本文中同义使用，指天然产生的含有胞外α和β链SEQ ID Νο:2和3的TCR。
技术实现思路
本专利技术提供一种T细胞受体(TCR)，其具有EVDPIGHLY(SEQ ID No:1)HLA-Al复合体结合特性且包含TCR α可变结构域和TCRP可变结构域，其特征在于:所述TCR α可变结构域具有SEQ ID No:2从Kl到Pl 14的氨基酸序列，但存在至少一种以下突变:501 突变为 50V;51Q 突变为 51R;52S 突变为 52P;53S突变为53Y ;和/或所述TCRP可变结构域具有SEQ ID No:3从Kl到Tl 12的氨基酸序列，但存在至少一种以下突变:50F 突变为 50T;51S 突变为 51D;52E 突变为 52M;53T 突变为 53L ；54Q 突变为 54L。本专利技术的TCR优选对EVDPIGHLY HLA-Al复合体的结合亲和力和/或结合半衰期至少两倍于參比MAGE-A3 TCR，所述參比MAGE-A3 TCR具有胞外a链序列SEQ ID No:6和胞外^链序列SEQ ID No:7。需注意，SEQ ID No:6是天然a链胞外序列ID No:2但用C162替换后者的T162(即TRAC的T48)。同样，SEQ ID No:7是天然P链胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种T细胞受体(TCR)，其具有结合EVDPIGHLY(SEQ ID No:1) HLA-Al复合体的特性且包括TCR a可变结构域和TCRP可变结构域，其特征在于: 所述TCRa可变结构域具有SEQ ID No:2从Kl到Pl 14的氨基酸序列，但存在至少一种以下突变: 501突变为50V ； 51Q突变为51R ； 52S突变为52P ； 53S突变为53Y ;和/或 所述TCRP可变结构域具有SEQ ID No:3从Kl到Tl 12的氨基酸序列，但存在至少一种以下突变: 50F突变为50T ； 51S突变为51D ； 52E突变为52M ； 53T突变为53L ； 54Q突变为54L。2.按权利要求1所述的TCR，其特征在于，所述TCR包含a链可变结构域氨基酸序列SEQ ID No:8和9中 的一个。3.按权利要求1或2所述的TCR，其特征在于，所述TCR包含P链可变结构域氨基酸序列SEQ ID No: 10和11中的一个。前述权利要求中任一项所述的TCR，其特征在于，所述TCR还具有a链TRAC恒定结构域和P链TRBCl或TRBC2恒定结构域，或具有经截短或替换修饰的a链TRAC和3链TRBCl或TRBC2恒定结构域，所述修饰用以去除TRAC外显子2的Cys4和TRBCl或TRBC2外显子2的Cys2之间的天然二硫键。4.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·K·雅各布森，N·R·利迪，
申请(专利权)人：英美偌科有限公司，
类型：
国别省市：