本发明专利技术公开了一种检测三聚氰胺的方法，包括以下步骤：（1）制备三聚氰胺的标准溶液，用高效液相色谱仪对其检测，得保留时间，并生成浓度与峰面积之间对应的标准曲线；（2）取样品进行预处理，得到分析试样，利用所述高效液相色谱仪在与步骤（1）相同的条件下对其进行检测，得到所述样品的检测结果；（3）将步骤（2）中获得的检测结果与步骤（1）中得到所述标准曲线进行比对，计算确定样品中三聚氰胺的含量。本发明专利技术提供的三聚氰胺检测方法，预处理简单方便，检测速度快，三聚氰胺分离效果好，检测结果精确度高，适用需要快速分析原料乳中三聚氰胺的场合。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及ー种色谱检测方法，特别涉及一种三聚氰胺的高效液相色谱检测方法。
技术介绍
三聚氰胺，即1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺，是ー种三嗪类含氮杂环有机化合物。几乎无味，微溶于水(3.lg/L常温)，可溶于甲醇、甲醛、こ酸、热こニ醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚类。与甲醛缩合聚合可制得三聚氰胺树脂，ー种热固性树脂，具有良好的耐电弧性、耐热性及耐碱性，被广泛用于塑料及涂料エ业。蛋白质中含有大量氮元素，以常用的凯氏定氮法测定产品中的蛋白质含量吋，不能区分三聚氰胺和蛋白质中的氮元素，因而ー些不良厂家将三聚氰胺添加到饲料和食品中，提高产品中蛋白质的检测数值，降低生产成本，牟取暴利。现有国标检测三聚氰胺的方法是《GB/T22400-2008原料乳三聚氰胺快速检测液相色谱法》(下文简称GB/T22400)和《GB/T22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》(下文简称GB/T22388)。GB/T22388中包含多种检测方法，运用高效液相色谱、液相色谱_质谱/质谱法、气相色谱-质谱联用法进行測定，结果精确度高。但检测时间通常较长，且所需设备要求较高，在一般企业内部质量控制部门进行抽样检测时，容易受到条件限制。一般企业是按照GB/T22388第一法高效液相色谱法进行检测的，GB/T22388第一法的检测条件:流动相为离子对试剂缓冲溶液与こ腈比例为85:15(v/v)或90:10(v/v)的混合溶液，流速为1.0ml/min，仪器正常压カ为1500-1600psi。流动相比例为85:15(v/v)时，保留时间16-18min ;流动相比例为90:10 (v/v),保留时间29_31min。检测的全过程约需2小时，耗时长，效率低，不便于需要快速得到检测结果的情況。其主要原因在于其前处理中用到的固相萃取净化步骤耗时长，通常情况下仅固相萃取一歩就需要约I小吋。若是省略前处理中的固相萃取柱浄化步骤，虽然可以加快检测速度，但很可能会受到杂质峰的干扰，影响定性定量分析。为克服需要快速检测情况下GB/T22388的不足，国家质检部门又推出GB/T22400检测方法。GB/T22400检测速度快，其色谱条件为:强离子交换色谱柱，SCX, 250mmX 4.6mm(1.d.流速为1.5ml/min。其中色谱柱并非常用C8、C18色谱柱,且价格较常用色谱柱高，仪器正常运行情况下，柱压为2500-2600psi ;高柱压下色谱柱使用寿命较短，对于需要长期大量进行原料乳中三聚氰胺检测的乳品企业而言，检测成本较高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中检测速度慢和检测成本高的缺陷，提供ー种快速、结果准确的检测原料乳中三聚氰胺的方法。为了实现上述专利技术目的， 本专利技术提供了以下技术方案:，包括以下步骤:( I)制备三聚氰胺的标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，得三聚氰胺保留时间，并生成浓度与峰面积之间对应的标准曲线；(2)取样品进行预处理，得到分析试样，利用所述高效液相色谱仪在与步骤(I)相同的条件下对其进行检测，得到所述样品的检测结果；(3)将步骤(2)中获得的所述样品的检测结果与步骤(I)中得到的所述标准曲线进行比对，计算确定样品中三聚氰胺的含量；所述步骤(2)中的预处理包括以下步骤:称取样品(若为奶粉制品，加入纯水还原，并记录原始数据，计算稀释倍数)，加入こ腈剧烈震荡混合6min，充分混匀后静置3min，4000-8000r/min转速离心5_10min，吸取上清液过滤，收集滤液，作为高效液相色谱仪分析试样。进ー步的,上述过滤步骤用0.22 ii m有机相滤膜过滤。进ー步的，所述步骤(I)中高效液相色谱使用的流动相为70/30 (体积比)离子对试剂缓冲溶液-こ腈。所述离子对试剂缓冲溶液为含1.0g/L十二烷基磺酸钠和20mmol/L磷酸的水溶液。进ー步的，上述流动相超声处理30-40min，经0.22 y m有机相滤膜过滤后使用，效果更佳。超声处理使流动相更加均匀，检测分析得到的结果更加稳定可靠。进ー步的,所述步骤(I)中高效液相色谱条件:流速0.8-1.0ml/min ;柱温40°C;检测波长:240nm ;进样量:20 Uし本专利技术中，取样品前处理为，加入こ腈剧烈震荡混合6min，充分混匀后静置3min，4000-8000r/min转速离心5_10min，吸取上清液过滤，作为高效液相色谱仪分析试样。制得的分析试样杂质少，能够有效延长了色谱柱的使用寿命。同GB/T22388前处理方法相比较，无需固相萃取，简便快速，降低了成本，只需30-40分钟即可得到检测結果，且回收率高。GB/T22388前处理方法若是省略固相萃取步骤，则制得检测到样品中杂质保留时间与三聚氰胺保留时间相邻近，易造成干扰。本专利技术方法与GB/T22388相比，流动相中，用十二烷基磺酸钠代替辛烷磺酸钠，同时增大こ腈的比例，离子对试剂缓冲溶液与こ腈比例调整为70:30。本专利技术方法对流动相进行调整后，检测优势在于:三聚氰胺出峰时间缩短，保留时间在10-llmin。确保在最短的时间内将三聚氰胺和杂质分离开，防止杂质峰对三聚氰胺的检测的干扰，准确的定性定量測定出原料奶中的三聚氰胺含量。既能保证快速出峰，达到迅速检测的目的；又能保证分离效果，完全将杂质和三聚氰胺分离开来，杂质峰不对三聚氰胺检测造成干扰。本专利技术方法，采用上述前处理方法和流动相，检测三聚氰胺时杂质峰和三聚氰胺峰能够完全分离开，不会因为杂质峰与三聚氰胺峰出现重叠而影响检测，有利于进行定性定量分析。本专利技术对色谱流动相和流速进行了调整。本专利技术方法，流速为0.8-1.0ml/min，正常压カ为1200-1400psi。降低流速，有效的保护了泵系统和色谱分析系统，延长色谱柱的使用寿命。且在0.8ml/min流速下,三聚氰胺保留时间为ll_13min,不影响检测速度。本专利技术检测三聚氰胺的方法适用于原料奶，纯牛奶(成品)，奶粉(复原后同纯牛奶)，中性奶(早餐奶，大枣牛奶等)。与现有技术相比，本专利技术的有益效果:使用本专利技术提供的三聚氰胺检测方法，预处理简单方便，检测速度快，三聚氰胺分离效果好，检测结果精确度高，适用于各种需要快速检测分析原料奶中三聚氰胺的场合。本专利技术使用常用的C18色谱柱，价格较低，容易获得。本专利技术方法检测三聚氰胺过程中，柱压较低，有利于保护检测系统，増加色谱柱的使用寿命，有利于控制检测成本。附图说明:见下表I表I附图说明本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测三聚氰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：制备三聚氰胺的标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，得三聚氰胺保留时间，并生成浓度与峰面积之间对应的标准曲线；取样品进行预处理，得到分析试样，利用所述高效液相色谱仪在与步骤（1）相同的条件下对其进行检测，得到所述样品的检测结果；将步骤（2）中获得的所述样品的检测结果与步骤（1）中得到的所述标准曲线进行比对，计算确定样品中三聚氰胺的含量；所述步骤（1）中高效液相色谱使用的流动相为70/30体积比的离子对试剂缓冲溶液?乙腈；所述离子对试剂缓冲溶液为含1.0g/L十二烷基磺酸钠和20mmol/L磷酸的水溶液。
【技术特征摘要】
1.一种检测三聚氰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤: 制备三聚氰胺的标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，得三聚氰胺保留时间，井生成浓度与峰面积之间对应的标准曲线； 取样品进行预处理，得到分析试样，利用所述高效液相色谱仪在与步骤(I)相同的条件下对其进行检测，得到所述样品的检测结果； 将步骤(2)中获得的所述样品的检测结果与步骤(I)中得到的所述标准曲线进行比对，计算确定样品中三聚氰胺的含量； 所述步骤(I)中高效液相色谱使用的流动相为70/30体积比的离子对试剂缓冲溶液-こ腈; 所述离子对试剂缓冲溶液为含1.0g/L十二烷基磺酸钠和20mmol/L磷酸的水溶液。2.根据权利要求1所述检测三聚氰胺的方法，其特征在于，所述高效液相色谱使用的流动相经0.22 m...
【专利技术属性】
技术研发人员：王旭霞，康红彦，刘翠霞，刘海燕，李启明，
申请(专利权)人：新希望乳业控股有限公司，
类型：发明
国别省市：
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