本发明专利技术涉及一种嗜根寡营养单胞菌及其环二肽代谢物的应用，属于微生物农药技术领域。发明专利技术采用的嗜根寡营养单胞菌（Stenotrophomonas?rhizophila）?WQS37菌株已于2012年11月5日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏号：CGMCC?No：6777。将嗜根寡营养单胞菌通过培养及分离获得环二肽代谢物；嗜根寡营养单胞菌及其环二肽代谢物与少孢节丛孢混合，作为诱导少孢节丛孢快速形成大量的捕食器官的应用。本发明专利技术的嗜根寡营养单胞菌和其环二肽代谢物能快速诱导少孢节丛孢在土壤中形成大量的捕食器官，有效的捕食线虫，为开发捕食线虫真菌生物菌剂提供新的思路。
【技术实现步骤摘要】
:本专利技术涉及一种嗜根寡营养单胞菌及其环ニ肽代谢物的应用，属于微生物农药
技术介绍
:植物寄生线虫是植物的重要病害之一，全球每年因植物寄生线虫病害所引起的农作物经济损失达到780亿美元(McCarter，2008)。在我国，植物寄生线虫危害烟草、花卉、蔬菜、棉花、大豆、花生、中药材等几乎所有作物，成为农业生产中重要的限制因子之一。目前对线虫的防治主要依靠化学杀线虫剂，但长期使用化学农药除了造成环境污染、残留、破坏生态平衡等弊端外，同时加剧了害虫的抗药性。利用线虫天敌来进行生物防治具有不污染环境，药效持久，害虫不易产生抗药性等优点，得到了各国政府的重视。捕食线虫真菌作为病原线虫的重要天敌，是自然界中控制、平衡和调节线虫种群数量的重要生物因子,也是研究开发生物杀线虫制剂的主要来源(Siddiqui and Mahmood,1996 ；Nordbring-Hertz et al.,2000)。在土壤中约有200多种真菌利用捕食器官来捕食线虫。通过近距离的接触线虫，真菌 菌丝能在几小时后形成捕食器官黏附、穿透、杀死后消化线虫。这些分化的器官包括三维菌网、粘性分支、粘球和收缩环等。因此形成捕食器官对这些真菌来说非常重要，从而进入了寄生的阶段。对于捕食器官的形成，人们主要关注的是线虫的诱导，从活线虫和死线虫的培养液中分离的被称为“Nemin”的物质能诱导，或者在实验室条件下，当营养缺乏时，一些小肽或氨基酸也能诱导，植物的信息素脱落酸也能诱导，然而这些物质的活性都没有活线虫高(Xu et al.，2011)。在土壌中，捕食线虫真菌竞争力弱且受环境影响较大，生长受到限制，或者即使达到一定数量了，由于不能有效形成捕食器官，导致了捕食线虫真菌在线虫侵染植物根部以前不能捕食线虫，降低了防效(Jaffee，2003)。因此研究食线虫真菌在土壌中快速形成捕食器官的因子对提高它的防效是ー个重要的途径。早在1962年就有文献报道，当把捕食线虫真菌放置于抑真菌作用土壌中，食线虫真菌能直接从孢子上形成捕食器官，近年的研究表明，细菌是影响抑真菌作用土壌的关键因子。根际土壤和土壤的萃取物也被报道能诱导食线虫真菌形成捕食器官。尽管这些研究表明土壌中的细菌与食线虫真菌形成捕食器官相关，但是这些作者认为捕食器官的形成是微生物间竞争营养的结果(Persmark and Nordbring-Hertz, 1997)。到目前为止只有李蕾(Liet al.,2011)报道Chryseobacterium sp.TFB能诱导捕食线虫真菌形成捕食器官。单胞菌属(Stenotrophomonas)通常在土壤中，很多植物的根际中广泛存在，并被认为是ー种潜在的用于防治线虫病害的生防菌。而嗜根寡营养单胞菌(Stenotrophomonas rhizophila)由于没有发现能使人类感染疾病而被认为是ー种具有潜力的生防菌(Hayward et al.,2009)。我们研究发现土壤中的嗜根寡营养单胞菌(Stenotrophomonas rhizophila)在其代谢产物的作用下能诱导食线虫真菌的模式种一少孢节丛孢以及多种食线虫真菌快速形成大量的捕食器官，此类研究，未见公开文献报道。参考文献:I) McCarter JP (2008) Nematology: terra incognita no more.NatureBiotechnology26:882-8842)Siddiqui ZAj Mahmood I(1996)Biological control of plant parasiticnematodes by fung1: a review.Bioresource Technology58:229-239.3)Nordbring-Hertz B, Jansson HB，Tunlid A(2000)Nematophagous fung1.1n:Encyclopedia of Life Science.Macmillam Publishers Ltd.,Basingtoke.4)Xu LLj Lai YPj Wang L，Liu XZ(2011)Effects ofabscisic acid and nitricoxide on trap formation and trapping ofnematodes by the fungus Drechslerellastenobrocha AS6.1.Fungal Biologyll5:97_1015)Jaffee BA (2003)Correlations between most probable number and activityof nematode-trapping fung1.Phytopathology93:1599-1605.6)Persmark L, Nordbring-Hertz B(1997)Cornidial trap formationof nematode-trapping fungi in soil and soil extracts.FEMS MicrobiologyEcology22:313-3237)Li L, Ma MCj Liu YJ，Zhou JWj Qu Q, Lu KPj Fu DG，Zhang KQ(2011) Inductionof trap formation in nematode-trapping fungi by a bacterium.FEMS MicrobiologyLetter322:157-1658) Hayward A.C.，Fegan N.，Fegan M.，Stirling G.R.(2009) Stenotrophomonasand Lysobacter: ubiquitous plant-associated gamma-proteobacteria ofdeveloping significa nce in applied microbiology.Journal ofAppiiedMicrobiology.108:756-770
技术实现思路
:本专利技术的目的在于提供一种嗜根寡营养单胞菌及其环ニ肽代谢物的应用，它们能诱导少孢节丛孢快速形成大量的捕食器官从而捕食线虫，为开发生物农药制剂提供新的方法。本专利技术是这样实现的:生产菌株为嗜根寡营养单胞菌(S.rhizophila WQS3)，该菌株已于2012年11月5日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所；保藏号:CGMCCNo:6777 ；将嗜根寡营养单胞菌用液体培养基常规发酵，发酵液离心除去菌体后用含有0.lmL/L三氟こ酸的こ酸こ酯萃取三次，こ酸こ酯部位用旋转蒸发仪在50度下浓缩至膏状，将膏状物质用Sephadex LH-20分离得到含有四个环ニ肽的活性馏分，活性馏分用SephadexLH-20反复分离后，再用硅胶分离得到四个环ニ肽单体。嗜根寡营养单胞菌的四个环ニ肽化合物用核磁共振和高分辨质谱鉴定其结构其结构如下:这四个化合物分别为(I)Cyclo (L-leucyl-trans-4-hydr本文档来自技高网...
【技术保护点】
嗜根寡营养单胞菌及其环二肽代谢物的应用，其特征在于：（1）将保藏号为CGMCC?No：6777的嗜根寡营养单胞菌（S.??rhizophila?WQS37），用液体培养基发酵，发酵液离心除去菌体后用含有0.1?mL/L三氟乙酸的乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯部位用旋转蒸发仪在50度下浓缩至膏状，将膏状物质用Sephadex?LH?20分离得到含有四个环二肽的活性馏分，活性馏分用Sephadex?LH?20反复分离后,再用硅胶分离得到四个环二肽单体；（2）制备菌丝表面带嗜根寡营养单胞菌的少孢节丛孢：a.少孢节丛孢接种于液体CMB中，在28℃下培养7天，CMB培养基配方为：玉米粉：20克，水1000毫升，pH自然；b.?嗜根寡营养单胞菌用液体培养基在28℃下培养48小时，液体培养基的配方为：蛋白胨?5?g?、牛肉膏?3?g?、NaCl?5?g?、蒸馏水?1000ml?、pH?7.2；c.取0.1?2.0?ml嗜根寡营养单胞菌的发酵液放入已经培养了7天的少孢节丛孢中，混合均匀后再培养1?7天；然后将表面带有嗜根寡营养单胞菌的少孢节丛孢菌丝用纱布将发酵液过滤后得到带嗜根寡营养单胞菌的菌丝；(3)?将（2）步骤得到的带嗜根寡营养单胞菌的少孢节丛孢菌丝与（1）步骤得到的环二肽代谢物，按每克菌丝中放0.2?3.0毫克环二肽代谢物混合后置于土壤中，作为诱导少孢节丛孢快速形成大量的捕食器官的应用。...
【技术特征摘要】
1.根寡营养单胞菌及其环ニ肽代谢物的应用，其特征在于: (1)将保藏号为CGMCCNo:6777的嗜根寡营养单胞菌(S.rhizophila WQS37)，用液体培养基发酵，发酵液离心除去菌体后用含有0.1 mL/L三氟こ酸的こ酸こ酯萃取三次，こ酸こ酯部位用旋转蒸发仪在50度下浓缩至膏状，将膏状物质用S印hadex LH-20分离得到含有四个环ニ肽的活性馏分，活性馏分用Sephadex LH-20反复分离后，再用硅胶分离得到四个环ニ肽单体； (2)制备菌丝表面带嗜根寡营养单胞菌的少孢节丛孢: a.少孢节丛孢接种于液体CMB中，在28°C下培养7天，CMB培养基配方为:玉米粉:20克，水100...
【专利技术属性】
技术研发人员：李蕾，罗俊，张克勤，马明川，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：
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