一种雪菊总黄酮的制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种雪菊总黄酮的制备方法和用途，该方法采用膜分离技术联合双水相分离技术对天然产物雪菊进行了提取分离，得到雪菊总黄酮，通过该方法获得的雪菊总黄酮经试验证实雪菊总黄酮具有清除氧自由基抗氧化延缓衰老和美白的功效，开拓了雪菊新的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然产物有效成分提取
，特别涉及一种从天然产物雪菊中提取分离总黄酮的提取方法，同时还涉及该总黄酮作为抗氧化剂在医药和化妆品行业中的应用。
技术介绍
雪菊不是一个独立的物种，其实是生长在新疆的蛇目菊的商品名称，其学名是:蛇目菊、双色金鸡菊。在新疆人们称之为:雪菊、昆仑雪菊、昆仑血菊、天山雪菊、高寒雪菊、高寒香菊等。它是维吾尔族世代传承集养生、保健和维药材一身的天然植物，可治疗燥热烦渴、高血压、心慌、胃肠不适、食欲不振及疮疖肿毒等症。雪菊由于生长环境较少污染、富含多种对人体有益成分，故现今已经逐渐作为一种茶饮普及开来。目前，已从雪菊中分离鉴定出20余类，300多种天然成分，包括30多种黄酮类物质，30多种人体必需的矿物元素，20多种氨基酸，数十种芳香族化合物，还有丰富的有机酸、萜烯类、维生素、木脂体、酶类、多糖等具有生物活性的天然成分。其中，总黄酮含量可达12%左右，远远超过了其他各种菊类。现代药理研究表明，雪菊中的黄酮类物质，是一种很强的抗氧化剂，可有效地清除体内的氧自由基。自由基生物学研究表明，氧自由基可以导致生物分子如蛋白质、脂质以及DNA的氧化损伤，能引起心脑血管疾病、糖尿病、癌症等多种的疾病。而雪菊总黄酮这种阻止氧自由基氧化的能力是维生素E的10倍以上，可以有效的阻止细胞的退化、衰老及癌变的发生。该总黄酮作为抗氧化剂在医药和化妆品行业中的应用目前尚未见报道。因此，该总黄酮在医药和化妆品行业中的具有广阔的应用前景和研究价值。有关雪菊总黄酮的提取分离目前已有报道，主要有①水提醇沉，树脂分离纯化；②有机溶剂萃取，大孔树脂分离纯化。 这些方法均不同程度地存在提取率较低，有机溶剂用量大、处理时间长、环境污染严重、不利于人体健康等缺点。因此研究绿色环保、简单方便的中药成分提取分离方法已成为当今生物医药的前沿课题之一。膜分离技术是一种使用半透膜分离方法，其分离原理是依据物质分子尺度的大小，借助膜的选择渗透作用，在外界能量或化学位差的推动作用下对混合物中双组分或多组分溶质和溶剂进行分离、分级提纯和富集，从而达到分离、提纯和浓缩的目的。双水相分离技术是指某些有机物之间或有机物与无机盐之间，在水中以适当的浓度溶解后，形成互不相溶的两相或多相体系即双水相体系。利用不同物质在双水相体系中有不同的分配系数，当物质进入双水相体系后，在上相和下相间进行选择性分配，表现出一定的分配系数，从而达到分离纯化的目的。膜分离技术联合双水相分离技术对天然产物的提取分离有极大的优势，通过对体系中的不同组分实现选择性的分离，可以达到分子水平上的分离和纯化。该技术属于物理分离方法，具有活性损失小、分离步骤少、操作条件温和，易于工艺放大和连续操作等优点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种雪菊总黄酮的制备方法和用途，该方法采用膜分离技术联合双水相分离技术对天然产物雪菊进行了提取分离，得到雪菊总黄酮，通过该方法获得的雪菊总黄酮经试验证实雪菊总黄酮具有清除氧自由基抗氧化延缓衰老和美白的功效，开拓了雪菊新的应用价值。本专利技术所述的一种雪菊总黄酮的制备方法，按下列步骤进行: 一种雪菊总黄酮的制备方法，其特征在于按下列步骤进行: a、将干燥的雪菊粉碎过20-60目筛成药粉，用8-10倍量的浓度为60-80%的乙醇加热回流1-2小时，提取2-3次，合并提取液，滤过，回收乙醇，并浓缩至在温度50°C时测定相对密度为1.10-1.20，得到浓缩液； b、将步骤a浓缩液用水按体积比1:1稀释，静置，过滤，滤液以15000转/分离心分离，取离心后所得上清液，再用孔径0.02-0.1 μ m的微滤膜除沉过滤，跨膜压力为0.5Mpa-l.0Mpa，料液温度25_35°C，得到透过液； C、将步骤b的透过液进行中空纤维超滤膜分离，跨膜压力微0.5Mpa-l.0Mpa，料液温度为25-35°C，得到超滤液； d、将步骤c的超滤液再进行中空纤维纳滤膜分离，跨膜压力为1.0Mpa-2.0Mpa，料液温度为25-35°C，得浓缩液； e、将步骤d所得浓缩液减压浓缩，干燥得固状物； f、将步骤e的固状物采用双水相萃取，在室温2000-4000转/分离心，双水相体系分为上下两相，取上相减压浓缩，干燥，即可得到雪菊总黄酮。步骤c中空纤维超滤膜的截留分子量为2000-8000。步骤d中空纤维纳滤膜的截留分子量为200-600。步骤f双水相萃取的体系为按3-5mL乙醇+5_7mL水+2_4g硫酸铵+0.15g固状物混合均匀。所述的方法获得的雪菊总黄酮在制备抗氧化剂的药物中的用途。所述的方法获得的雪菊总黄酮在制备妆品行业中的用途。本专利技术所述的一种雪菊总黄酮的制备方法，通过该方法获得的雪菊总黄酮含量测定方法: 利用黄酮类化合物与三氯化铝作用后生成黄酮的铝盐络合物而黄色深浅与黄酮的含量成一定的比例关系的原理，对雪菊总黄酮进行定量测定。1、供试品溶液的制备:精密称取温度105°C干燥至恒重的雪菊总黄酮适量，加甲醇溶解，定量转移到IOmL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液； 2、对照品溶液的制备:精密称取温度105°C干燥至恒重的芦丁对照品适量10.05mg，力口入甲醇使其溶解，转移至25mL容量瓶中，定容，摇匀即得芦丁标准液(0.402mg/mL)； 3、标准曲线的制备:精密吸取对照品溶液液0.5，1.0,2.0,3.0, 4.0, 5.0mL,分别置于25mL容量瓶中，加水至6mL，按顺序依次分别加入5% NaNO2溶液1.0mL混匀，放置6min，加10% AL (NO2) 3溶液1.0mL放置6min，再加入4% NaOH溶液10mL，并加蒸馏水稀释至刻度摇匀放置15min;以不加芦丁为空白，在波长510nm下分别测定其吸光度值(A);以浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标，得回归方程:A=12.02C-0.0110，r=0.9997，浓度C与吸光度A在8.04-80.4 μ g/mL范围内线性良好； 4、含量测定:精密吸取样品溶液1.0mL，加蒸馏水至6mL，按“3项”下的条件测定吸光度，平行测定3次，按回归方程计算雪菊中总黄酮的含量。本专利技术所述的一种雪菊中总黄酮的制备方法和用途，其优点是:本专利技术克服了现有提取分离技术的不足，采用膜分离技术联合双水相分离技术对雪菊提取物进行了提取分离，膜分离技术和双水相分离技术属于物理分离方法，既不破坏物质成分，又有选择性，是一种低能耗，低污染的分离方法。该方法提高了目标成分-总黄酮的含量，去除了大部分无效成分，产品的活性成分得到了有效富集。本专利技术因为对分离目标有较高的选择性，所以可根据实际对产品的需要，改变微滤膜、超滤膜和纳滤膜规格和操作条件，从而方便的控制所得目标产物的组成。用本专利技术提供的方法从雪菊中分离纯化总黄酮，有效成分富集率高，损失少，产物中总黄酮含量达到90%以上，在不改变有效成分结构的前提下，缩短了生产周期，降低了能耗，产品质量得到了大幅提高。本专利技术所提供的方法具有分离步骤少、操作条件温和易于工艺放大和连续操作等优点，是一种绿色环保型萃取技术。附图说明图1为本专利技术不同质量分数雪菊总黄酮的抗氧化能力图，其中一 一为雪菊总黄酮，一■一为Vc ； 图2为本专利技术不同质量分数雪菊总黄酮本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种雪菊总黄酮的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：a、将干燥的雪菊粉碎过20?60目筛成药粉，用8?10倍量的浓度为60?80%的乙醇加热回流1?2小时，提取2?3次，合并提取液，滤过，回收乙醇，并浓缩至在温度50℃时测定相对密度为1.10?1.20，得到浓缩液；b、将步骤a浓缩液用水按体积比1:1稀释，静置，过滤，滤液以15000转/分离心分离，取离心后所得上清液，再用孔径0.02?0.1μm的微滤膜除沉过滤，跨膜压力为0.5Mpa?1.0Mpa，料液温度25?35℃，得到透过液；c、将步骤b的透过液进行中空纤维超滤膜分离，跨膜压力微0.5Mpa?1.0Mpa，料液温度为25?35℃，得到超滤液；d、将步骤c的超滤液再进行中空纤维纳滤膜分离，跨膜压力为1.0Mpa?2.0Mpa，料液温度为25?35℃，得浓缩液；e、将步骤d所得浓缩液减压浓缩，干燥得固状物；f、将步骤e的固状物采用双水相萃取，在室温2000?4000转/分离心，双水相体系分为上下两相，取上相减压浓缩，干燥，即可得到雪菊总黄酮。

【技术特征摘要】
1.一种雪菊总黄酮的制备方法，其特征在于按下列步骤进行: a、将干燥的雪菊粉碎过20-60目筛成药粉，用8-10倍量的浓度为60-80%的乙醇加热回流1-2小时，提取2-3次，合并提取液，滤过，回收乙醇，并浓缩至在温度50°C时测定相对密度为1.10-1.20，得到浓缩液； b、将步骤a浓缩液用水按体积比1:1稀释，静置，过滤，滤液以15000转/分离心分离，取离心后所得上清液，再用孔径0.02-0.1 μ m的微滤膜除沉过滤，跨膜压力为0.5Mpa-l.0Mpa，料液温度25_35°C，得到透过液； C、将步骤b的透过液进行中空纤维超滤膜分离，跨膜压力微0.5Mpa-1.0Mpa，料液温度为25-35°C，得到超 滤液； d、将步骤c的超滤液再进行中空纤维纳滤膜分离，跨膜压力为1.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：周军，张琼，孙江兵，曾平，雷权，卢静，陈召晖，
申请(专利权)人：中国人民解放军兰州军区乌鲁木齐总医院，
类型：发明
国别省市：