本发明专利技术涉及一种蟾毒灵脂质体，其特征在于该脂质体由脂质体双分子层和蟾毒灵组成，其中脂质体双分子层中包含磷脂、甾醇和PEG修饰物。本发明专利技术所述的蟾毒灵脂质体可通过薄膜法、注入法或冻融法制备得到，较蟾毒灵单体药物具有更强的抗癌作用和更低的毒副作用，可用于癌症包括肝癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、食管癌、胃癌或白血病的治疗。
【技术实现步骤摘要】
:本专利技术属于医药
，涉及ー种蟾毒灵脂质体及其制备方法，用于肿瘤，特别是肝癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌或白血病的治疗。
技术介绍
癌症是全球发病率最高的疾病之一。WHO数据显示，仅2008年癌症病死人数就高达7.6亿，其中60%来自低收入或中等收入国家，且该数字在未来将继续增加。在超过200种癌症中，乳腺癌、肺癌、肠癌及胰腺癌患者数占所有新增病例的54 %。目前，癌症的治疗方法根据癌症的类型及阶段，主要包括手术、放疗、化疗及以上方法联合运用等。其中，临床化疗药物种类较多，作用机制主要为针对肿瘤细胞快速分裂的特性杀死细胞。因此药物在杀死快速分裂的癌细胞时，也能杀死其它正常的快速分裂的细胞，如骨髄、消化道及毛囊中的细胞，产生了严重的副作用，损伤了正常组织。据此，亟需研发毒副作用小、抗肿瘤疗效高的新型治疗药物。提高药物对肿瘤的选择性，减少其在正常组织的分布是抗肿瘤新药研发的主要策略。蟾毒灵(3 3，14_ ニ羟-5 0，20(22)_蟾蜍ニ烯羟基内酷，5 0，20(22)_蟾蜍ニ烯羟基内酯-3 0，14-ニ醇)是中药蟾酥的主要抗肿瘤成分，是中华大蟾蜍或黑框蟾蜍的耳后腺分泌的白色浆液，可从蟾酥中提取。还可根据专利US 3134772和US 3687944进行人工合成。蟾毒灵是ー种类地高辛的免疫活`性成分，显示出各种生物活性，如强心、麻酔和刺激血管等。自1994年蟾毒灵抗肿瘤作用发现至今(Numazawa S, et al.J Cell Physiol,1994,160(1):113-20),已进行了大量研究，发现其具有广谱抗肿瘤作用。此外，蟾毒灵与其他化疗药物联用，如索拉菲尼等，对肿瘤细胞显示出化疗增敏作用(Gao Y，et al.MolBiol Rep.2012,39(2) =1683-9) 0近年来，更多的研究发现蟾毒灵可诱导细胞凋亡从而抑制多种癌细胞的増殖，如肝癌、骨瘤、结肠癌、肺癌、胰腺癌、卵巣癌、胃癌、前列腺癌及白血病细胞等(Han KQ, et al.World J Gastroenterol.2007,13 (24):3374-9 ;Amano Y,et al.J Steroid Biochem Mol Biol.2009,114(3-5):144-51 ;Li D, etal.AnticancerDrugs.2009,20(1):59-64 ；Yu CH, et al.Cancer Sc1.2008，99 (12):2467-76 ;Takai N，etal.1nt J Mol Med.2008,21(5):637-43 ;Yeh JY, et al.Prostate.2003,54(2):112-24;Yin JQ, et al.Acta Pharmacol Sin.2007,28 (5):712-20 ;Zhu Z et al.1nt.J.Mol.Sc1.1nt J Mol Sc1.2012，13(2):2025-35 ;Xie CM, et al.Free Radic Biol Med.2011，51 (7):1365-75)。蟾毒灵可通过激活细胞死亡受体及线粒体通路触发癌细胞凋亡(Sun L,et al.Evid Based Complement AlternatMed.Epub 2011 Jun 18)。这些研究提不蟾毒灵可作为化疗药物用于癌症的治疗。然而，蟾毒灵由于毒性大、水溶性差、半衰期短、治疗窗窄，毒性剂量与治疗剂量接近等问题，严重制约了其临床应用(Gong LL et al.Food andDrug.2007,9(10):51-3)。此外，由于其在体内的广泛分布，更引起了其它临床副作用，如血管刺激性、过敏性休克、高热、窦性心动过缓等(Dasgupta A,et al.Life Sc1.1998,63(9):781-8 ；Bick RJ, et al.Life Sc1.2002，72(6):699-709 ；Kostakis C，Byard RW.ForensicSci Int.2009,188:el_e5)。目前，将蟾酥溶于生理盐水制得的华蟾素注射液已在中国用于临床癌症的治疗。已有报道吉西他滨一奥沙利钼与华蟾素合用可增强晚期胆囊癌病人的化疗作用(Qin TJ,et al.World JGastroenterol.2008,14(33):5210-6)。另有研究显示，对肝癌及胰腺癌病人使用8倍于标准剂量(20ml/m2/或20 25ml/人/天，含蟾毒灵14.3±0.03ng/ml)的华蟾素注射液未产生明显毒性(Meng Z.et al.Cancer.2009，115 (22):5309-18)，这意味着成年病人每天耐受的蟾毒灵有效治疗剂量可高达2.g。但是，华蟾素注射液是蟾酥中生物碱的混合物溶液，并且因为蟾毒灵水溶性较差，含有的蟾毒灵含量很低。因此，研发延长蟾毒灵在肿瘤病灶内持续时间、提高肿瘤靶向性、减少毒副作用的新剂型十分必要。脂质体是一种内水相的封闭的磷脂双分子结构，我们使用脂质体作为蟾毒灵的药物载体，可通过磷脂膜装载蟾毒灵解决其水溶性差的问题。此外，用PEG修饰的脂质体可将蟾毒灵被动靶向至肿瘤部位，减小其毒副作用。近20年来，脂质体已经被广泛用于包载抗肿瘤药物。已有多种用于临床或即将用于临床的抗肿瘤脂质体药物，如阿霉素脂质体(Doxil/Caelyx分别由Alza/Johnsonand Johnson在美国或Schering-Plough在其他国家销售)、柔红霉素脂质体(DaunoXome,Gilead)、阿糖胞苷脂质体(DepoCyte, Skye Pharma/Enzon/Mundipharma 出品)、顺钼脂质体(Lipoplatin，Regulon出品)，其中阿糖胞苷脂质体可用于治疗脑膜淋巴瘤。脂质体可通过磷脂膜结构提高水溶性差的抗癌药物的溶解度，通过PEG修饰实现肿瘤的被动靶向及通过结合载体实现肿瘤的主动靶向。传统的脂质体，是通过磷脂分散在水相中形成的，因此两亲性及脂溶性药物可插入脂质体的磷脂膜结构中，而亲水性药物则是直接包入脂质体的内部水相。脂质体载体对所包含药物的药代动力学、组织分布及毒副作用都产生较大的影响。如，临床实验证明在保持抗肿瘤活性的同时使用阿霉素脂质体比阿霉素单体的毒性作用明显减小(SafraT.0ncologist.2003,8Suppl 2:17-24)。但由于脂质体可被巨噬细胞快速捕获，给药后其在体内的停留时间只有几小吋。为了提高脂质体在体内循环的半衰期，可将糖脂或亲水性聚合物如PEG应用于脂质体。将生物相容性的聚合物PEG结合在脂质体上，使其具有保护性的亲水的表面，被称为“ニ代脂质体”或“隐形脂质体”。PEG在脂质体表面形成了位阻效应，可阻碍调理素及血浆蛋白的吸附，減少巨噬细胞受体与磷脂膜上磷酸基团的结合，从而延迟其在血液循环中的保留时间。此外，通过化学修饰磷脂基团或者结合蛋白、多肽或其他大分子在脂质体表面，可改变脂质体的药代动力学属性。PEG脂质体结合载体如小分子、肽类或单克隆抗体已广泛的用于肿瘤治疗，如结合叶酸的柔红霉素和阿霉素脂质体(Pan XQ, Lee RJ.AnticancerRe本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种蟾毒灵脂质体，其特征在于：由脂质体双分子层和蟾毒灵组成，其中脂质体双分子层中包含磷脂、甾醇和PEG修饰物。
【技术特征摘要】
1.一种蟾毒灵脂质体，其特征在干:由脂质体双分子层和蟾毒灵组成，其中脂质体双分子层中包含磷脂、留醇和PEG修饰物。2.根据权利要求1所述的蟾毒灵脂质体，其特征在于:所用的磷脂选自卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰こ醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、鞘磷脂、ニ棕榈酰磷脂酰胆碱、ニ棕榈酰磷脂酰こ醇胺、ニ硬脂酰磷脂酰胆碱或上述ー种或多种的混合物，且其含量占脂质体双分子层总重量的20 80%。3.根据权利要求2所述的蟾毒灵脂质体，其特征在于:磷脂选自卵磷脂、磷脂酰胆碱或ニ硬脂酰磷脂酰胆碱。4.根据权利要求1所述的蟾毒灵脂质体，其特征在于:所用的留醇选自胆固醇、表胆甾醇、麦角固醇，豆留醇或胆固醇的PEG修饰物，且其含量占脂质体双分子层总重量的10 30%。5.根据权利要求1所述的蟾毒灵脂质体，其特征在于:所用的PEG修饰物选自PEG-磷脂酰こ醇胺、mPEG-磷脂酰こ醇胺，DSPE-PEG或上述ー种或多种的混合物，且其含量占脂质体双分子层总重量的2 50%。6.根据权利要求1所述的蟾毒灵脂质体，其特征在于:脂质体双分子层和蟾毒灵的重量比为(5 20): I。7.根据权利要求1所述的蟾毒灵脂质体，其特征在干:由薄膜法、注入法、冻融法中任ー种方法制备。8.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹蔚，王四旺，李瑛，谢艳华，杨倩，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：
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