本发明专利技术属于基因工程和神经损伤技术领域，视神经损伤是许多眼部疾病和外伤，严重时会造成患者视神经的萎缩和失明，目前临床实际疗效不尽人意。本发明专利技术研究发现Neuritin基因与修复视神经损伤相关，本发明专利技术提供了一种携带Neuritin基因的慢病毒载体及其构建方法，本发明专利技术还进一步地提供了携带Neuritin基因的慢病毒载体在制备治疗修复视神经损伤药物中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程和神经损伤
，具体涉及一种携带Neuritin基因的慢病毒及其在修复视神经损伤中的应用。
技术介绍
视神经损伤是许多眼部疾病和外伤，如青光眼、视神经缺血、钝挫伤、视神经管骨折等，导致视功能损害共同的作用环节，严重时会造成患者视神经的萎缩和失明。尽管对视神经损伤的治疗开展了大量研究工作，但其临床实际疗效不尽人意，按照目前的医疗技术水平难以让患者恢复视力。视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells, RGCs)的内在再生能力低下，是视神经损伤后再生失败导致视神经萎缩和失明的关键因素，如何进行有效的逆转治疗一直是眼科界面临的难题之一。近期的研究表明，找准靶点增强受损RGC内在再生能力，能促进视神经长期、活跃的再生并到达上丘和外侧膝状体(参见文献[l]SunF，Park KK, BelinS，et al.Sustained axon regeneration induced by co-deletion of PTENand S0CS3.Nature.2011;480 (7377):372-5.； [2]Kurimoto T, YinY, Omura K，etal.Long-distanceaxon regeneration in the mature optic nerve: contributions ofoncomodulin，cAMP，and pten gene deletion.J Neurosc1.2010; 30 (46): 15654-63.)，并有一定程度的功能恢复(参见文献[3] de Lima S, KoriyamaY,Kurimoto T, et al.Full-lengthaxonregeneration in the adult mouse optic nerve and partial recovery of simplevisualbehaviors.Proc Natl Acad Sci U S A.2012; 109(23):9149-54.)，但应用于临床尚远，仍需寻找可应用于临床的关键性因子。Neuritin又名可塑性相关候选基因 15(candidate plasticity-related genel5，CPG15)，是神经营养因子家族中的新成员。Neuritin主要表达于神经系统中，Neuritin具有独特的神经营养作用，能维持神经元细胞的存活(参见文献[4]PutzU，Harwell Cand Nedivi E.Soluble CPG15expressed during early developmentrescues corticalprogenitors from apoptosis.Nat Neurosc1.2005; 8 (3): 322-31.)、促进神经突起的生长(参见文献[5]Cappelletti G，Galbiati M，Ronchi C，et al.Neuritin (cpgl5)enhances the differentiating effect of NGF on neuronal PC12cells.JNeurosciRes.2007:85 (12):2702-13.； [6]Nedivi E，Wu GY and Cline HT.Promotionofdendritic growth by CPG15，an activity-1nduced signaling molecule.Science.1998; 281 (5384): 1863-6.)和突触成熟(参见文献[7]Cantallops IjHaas Kand ClineHT.Postsynaptic CPG15promotes synaptic maturation and presynapticaxon arbore laborat io n in viv0.Nat Neurosc1.2000; 3 (10): 1004-11.)，调节突触可塑性(参见文献[8]Wibrand K, Messaoudi E, Havik B，et al.1dentification of genesco-upregulatedwith Arc during BDNF—induced long-term potentiation in adultrat dentate gyrus inviv0.Eur J Neurosc1.2006; 23 (6): 1501-11.)，并且是神经营养因子(参见文献[9]Naeve GSj Ramakrishnan M, Kramer R, et al.Neuritin: a geneinduced by neuralactivity and neurotrophins thatpromotes neuritogenesis.Proc Natl Acad Sci U S A.1997; 94 (6):2648-53.；[10]Lee KHj Ryu CJ，Hong HJj etal.CDNA microarrayanalysis of nerve growthfactor-regulated gene expressionprofile in rat PC12cells.Neurochem Res.2005; 30 (4): 533-40.)和神经活动(参见文献[ll]Nedivi E，FieldustS，Theill LEj et al.A set of genes expressed in responseto light in the adult cerebralcortex and regulated during development.ProcN at I Acad Sci U S A.1996;93 (5):2048-53.; [12]Lee WC and Nedivi E.Extendedplasticity ofvisual cortexin dark-reared animals may result from prolongedexpression of cpgl5_like genes.JNeurosc1.2002;22 (5):1807-15.； [13]HarwelIC，Burbach B, Svoboda K，et al.Regulation of cpgl5expression during single whiskerexperience in the barrel cortexof adult mice.J Neurobiol.2005;65 (I):85-96.)发挥作用的共同下游因子，介导雄激素和电剌激促进神经再生的必须和关键分子(参见文献[14]Sharma N, MarzoSJj Jones KJj et al.Electrical stimulation andtestosterone differentially enhanceexpression of regeneration-associatedgenes.Exp Neurol.2010;223(本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种携带Neuritin基因的慢病毒载体，其特征在于，该慢病毒载体是携带如SEQ?ID?NO:1所示的Neuritin基因的DNA序列。
【技术特征摘要】
1.一种携带Neuritin基因的慢病毒载体,其特征在于,该慢病毒载体是携带如SEQ IDNO:1所示的Neuritin基因的DNA序列。2.根据权利要求1所述的一种携带Neuritin基因的慢病毒载体，其特征在于，所述的慢病毒载体选用Tronolab系统为，为四质粒系统由pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G和目的穿梭质粒；其中pRsv-REV，pMDlg-pRRE和pMD2G含有病毒包装所必须的元件，目的穿梭质粒含有目的基因以及标记基因红色荧光蛋白。3.—种如权利要求2所述的携带Neuritin基因的慢病毒载体的构建方法，其特征在于，具体步骤如下: A)Neuritin基因慢病毒表达载体的构建 设计并合成PCR引物如下: NRNl-正向引物如SEQ ID NO:2所示;NRNl-反向引物中SEQ ID NO:3所示; 使用PCR方法从含有NRNl基因cDNA克隆模板中扩增NRNl基因CDS区；将慢病毒载体和目的基因分别双酶切，纯化酶切产物后与NRN...
【专利技术属性】
技术研发人员：许家军，曹文珞，刘芳，蔺海燕，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：
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