一株用于污水处理的好氧反硝化菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术、环境微生物及水处理领域，公开了一种用于污水处理的好氧反硝化菌及其应用。本发明专利技术菌株是从污水处理厂取得的活性污泥中筛选所得，本发明专利技术提供的菌株可以有效的去除污水中的硝态氮和亚硝态氮,去除硝态氮和去除亚硝态氮的能力分别为3.01mgN/(g·L·h)和1.80mgN/(g·L·h)。该菌株的脱氮方法归属于生物脱氮领域，生物脱氮方法不仅高效而且成本较低，该菌株在应用于含氮废水的处理过程中具有很好的前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物技术、环境微生物及水处理领域，尤其涉及了一种用于污水处理的好氧反硝化菌及其应用。
技术介绍
随着水体富营养化的日益严重，去除水中氮素污染已经成为当今水污染防治领域的一个热点问题。氮在污水中主要以分子态氮，有机氮，氨氮，硝态氮，亚硝态氮，硫氰化物及氰化物形式存在，而在未经处理的原废水中主要以有机态氮及氨氮的形式存在；经二级生化处理后主要剩下氨氮及硝态氮。长期以来，脱氮主要强调污水中氨氮的脱除，不对硝态氮进行处理，导致水体中硝酸盐含量不断升高。传统生物脱氮包括硝化和反硝化两个过程，即氨氮由好氧硝化细菌转化为硝态氮，然后再通过厌氧或缺氧的反硝化细菌还原为氮气，排出水体。近年来的国内外研究表明，一些微生物在不同的溶氧条件下，也能表现出一定的反硝化能力。比如已经报道过的 pan to tropha, Alcaligenes faecalis,Pseudomonas aeruginosa, Thaurea mechernichensis, Acinetobacter calcoaceticus，Providencia rettgeri, Pseudomonas stutzeri 取 Bacillus strains 等均可在好氧条件下进行反硝化，而对于红球菌属)则报道较少。好氧反硝化菌的出现为生物脱氮提供了一条全新的途径，使得传统的生物脱氮途径更加完善，也为脱氮工艺研究提供了一定的理论基础。好氧反硝化菌的筛选方法很多，主要包括:1.富集培养法:利用选择性培养基进行筛选，在培养基中添加限制性碳源和氮源，或根据反硝化为碱增加的过程在培养基中添加PH指示剂。2.稀释法，将样品稀释一定倍数后培养，然后将pH值发生变化的再进行稀释，重复操作，将本来不占优势的好氧反硝化菌分离出来。3.间歇曝气法，好氧反硝化菌可同时利用氧分子和硝态 氮，好氧、缺氧的频繁转换有利于其在竞争中取得优势地位。
技术实现思路
本专利技术提供了一株好氧反硝化菌，能够在好氧条件下有效降解水体中的硝态氮及亚硝态氮。为了解决上述技术问题，本专利技术通过下述技术方案得以解决: 用于污水处理的好氧反硝化菌，所述好氧反硝化菌16S rDNA分子鉴定为红平红球菌iRhodococcus erythropolis )，命名为 Rhodococcus erythropolis Sunda 1101，该菌株于2011年6月23日，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏编号为CCTCC M 2011211。本专利技术提供一种筛选好氧反硝化菌的方法。本专利技术的菌种筛选采用多种筛选方法相结合，首先通过添加限制性氮源，间歇曝气来富集好氧反硝化菌，然后再通过在培养基中添加PH指示剂来快速有效地筛选好氧反硝化菌。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是:对污水处理厂的活性污泥进行曝气富集培养，筛选出好氧菌，然后根据反硝化菌产碱的性能，通过在培养基中添加溴甲基芬兰指示剂的方法，来有效地筛选好氧反硝化菌。用模拟好污水复筛高反硝化能力的好养反硝化菌。其步骤依次是取样，曝气富集培养，初筛，复筛，最后得到I株在好氧条件下，能同时降解模拟污水中的硝态氮和亚硝态氮，反硝化能力较高的菌株。本专利技术提供了菌株鉴定的方法。本专利技术的菌株鉴定方法主要是通过16S rDNA鉴定的方法，利用通用引物扩增出进化过程中保守的16S rDNA片段进行测序，然后与基因文库中的数据进行比对，根据菌株同源性比例确定菌株的属性，最后再根据系统进化树进行确认。本专利技术的好氧反硝化菌应用于降解污染的水体中的硝态氮和亚硝态氮。具体为对菌体进行扩大培养后，接种于含硝态氮和亚硝态氮污染的水体。本专利技术由于采用了以上技术方案，具有显著的技术效果: 本专利技术提供的菌株可以有效的去除污水中的硝态氮和亚硝态氮，去除硝态氮和去除亚硝态氮的能力分别为3.01 mgN/ (g.L.h)和1.80 mgN/ (g.L.h)。该菌株的脱氮方法归属于生物脱氮领域，生物脱氮方法不仅高效而且成本较低，因此该菌株在应用于含氮废水的处理过程中具有很好的前景。生物材料保藏信息 生物材料名称:红平红球菌erythropolis)； 保减单位:中国典型培养物保减中心； 保藏日期:2011年6月23日； 保藏编号:CCTCC M 2011211。 附图说明图1是本专利技术16S rDNA PCR扩增后的结果图。图2是本专利技术的菌株与其它菌株的亲缘关系图。具体实施例方式下面结合附图1至附图2与实施例对本专利技术作进一步详细描述: 实施例1 好氧反硝化菌的筛选1.富集培养:将从芦村污水处理厂取得的活性污泥进行曝气富集培养，装液量2 L/3.6L，每天更换新鲜培养基。更换新鲜培养基时先静置lh，移除600mL体积，然后再补加600mL新鲜培养基，总共富集约40天。2.初筛:将富集好的活性污泥进行稀释，在溴百里酚蓝培养基上进行涂布，然后置于30° C培养箱中培养，培养2-3天。将溴百里酚蓝培养基上出现的蓝色单菌落进行分类，革兰氏染色，然后将每个形态的菌落挑选3-4个进行划线分离，置于30° C培养箱中培养，培养2-3天。对划线分离得到的蓝色单菌落进行分类，挑选有特征的菌落保存到斜面上，供复筛用。3.复筛:将初筛保存的菌株接入菌体扩大培养基，30°C，200 rpm，培养24h，然后按1%的比例分别接入IOOmL检测培养基，培养24 h，30°C，200 rpm,测定接种前后硝态氮和亚硝态氮的变化。选择硝态氮降解率达40%以上且亚硝态氮降解率达25%以上的菌株进行反硝化性能测试，得到一株性能相对较好的菌株。4.检测方法: 4.1硝态氮的测定:紫外分光光度法，参见中华人民共和国环境保护行业标准HJ/T346-2007。4.2亚硝态氮的测定:N-(l-萘基)_乙二胺盐酸分光光度法，参见国标GB7493-87。4.3菌体干重(DCW)的测定:取菌体培养液,在8000 rpm的条件下离心5min,弃去上清液，然后在105° C的恒温干燥箱中干燥至菌体恒重。5.相关培养基 富集培养基(g/L): (NH4)2SO4 0.5 ;丁二酸钠 2.17 ;维氏盐溶液 50ml ；pH 7.2。维氏盐溶液(g/L): K2HPO4 5.0 ；MgS04.7H20 2.5 ；NaCl 2.5 ；FeS04.7H20 0.05 ；MnSO4.4H20 0.05。初筛培养基(g/L):琼脂20 ；ΚΝ03 I ；KH2PO4 I ；FeS04.7H20 0.5 ；CaCl2 0.2 ；MgSO4.7H20 I; 丁二酸钠8.5;溴百里酚蓝(取0.1g溴百里酚蓝溶于IOmL酒精)lmL，pH7.0 7.3。菌体扩大培养基(g/L)=KNO3 I ；KH2PO4 I ；FeS04.7H20 0.05 ；CaCl2 0.02 ；MgSO4.7H20 I ；T二酸钠.6H20 8.5。检测培养基(g/ L)=KH2PO4 I ；MgS04.7H20 I ； 丁二酸钠 2.8 ；NaNO3 0.6 或 NaNO20.50。实施例2 好氧反硝化菌的鉴定1.提取细菌基因组 将目的菌株接入LB培养基，隔夜培养后，取ImL离心得菌体，然后用基因组试剂盒提取细菌基因组，琼脂糖凝胶电泳(1%)验证，紫外分析本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株用于污水处理的好氧反硝化菌，其特征在于：该菌株经16S?rDNA分子鉴定为红平红球菌（Rhodococcus?erythropolis），菌种保藏编号：CCTCC?M?2011211，保藏时间：2011年6月23日，保藏地点：中国典型培养物保藏中心。

【技术特征摘要】
1.一株用于污水处理的好氧反硝化菌，其特征在于:该菌株经16S rDNA分子鉴定为红平红球菌(WAotZococciAs 6 r7iAro/7o7i5.),菌种保藏编号:CCTCC M 2011211,保藏时间:2011年6月23日，保藏地点:中国典型培养物保藏中心。2.根据权利要求1所述的用于污水处理的好氧反硝化菌，其特征在于:所述的好氧反硝化菌应用于降解污染的水体中的硝态氮和亚...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑展望，杨瑾，王斌，
申请(专利权)人：浙江商达环保有限公司，
类型：发明
国别省市：