一种自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法，其特征在于：A、自体富血小板因子血浆PFRP的制备，采集自体全血，利用离心加冻融的方式制备得到自体富血小板因子血浆PFRP；B、自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备，将得到的自体富血小板因子血浆PFRP与生物支架/自体成体细胞按体积比3:1-1:1混合得到PFRP制剂。通过对自体全血的特殊处理得到的自体富血小板因子血浆PFRP，减少了因添加激活剂可能导致的污染风险，避免了异体使用时膜抗原存在的免疫风险。通过该方法制备的自体富血小板因子血浆PFRP制剂，不仅对半月板等组织损伤具有很好的修复作用；还具有很好的抗皱、填充及提升效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药
，涉及一种自体富血因子血浆PFRP制剂，具体涉及一种自体富血因子血衆PFRP (Platele-factor-rich plasma)制剂的制备方法。
技术介绍
临床研究中有报道用富血小板血衆PRP (Plate-rich plasma)凝胶治疗半月板损伤,制备富血小板血浆PRP凝胶需要在富血小板血浆PRP中添加凝血酶和钙离子。凝血酶是血小板活化剂中最有效的成分。动物原性凝血酶以及钙离子的使用，有可能导致外源性的污染，使用剂量不当时也有可能导致组织的损伤。此外，使用富血小板血浆PRP凝胶皮下注射，疼痛明显且充填效果不持久
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种创新型的自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法，制备出疗效好、无明显副作用的自体富血小板因子血浆PFRP制剂。本专利技术的另一个目的是提供一种多用途的自体富血小板因子血浆PFRP制剂，异体使用时也不存在免疫风险。不仅能够加速半月板损伤、外伤组织的修复愈合，还能满足医疗美容等多方面的需求。为达到上述目的，本专利技术采取的技术方案是:提供一种自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法，其特征在于:包括以下步骤:A、自体富血小板因子血浆PFRP的制备，采集自体全血，利用离心+冻融的方式制备得到自体富血小板因子血浆PFRP ；B、自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备，将得到的自体富血小板因子血浆PFRP与生物支架/自体成体细胞按体积比3:1-1:1混合得到自体富血小板因子血浆PFRP制剂；步骤A包括以下分步骤:Al、自体富血小板血浆PRP的制备，采集自体全血，离心后，弃去上段贫血小板血浆和下段红细胞，留取中段自体富血小板血浆PRP并深低温(低于_20°C)冻存；A2、自体富血小板因子血浆PFRP的制备，将自体富血小板血浆PRP冻融后离心，取富血小板因子血浆PFRP备用，弃去底部膜碎片。步骤Al中利用抗凝管采集自体外周血。步骤Al，离心过程中的离心力小于2000g，离心时间为8-10min。步骤A2，离心过程中的离心力为4000g，离心时间为8_10min。步骤A2制备的自体富血小板因子血浆PFRP包含的细胞活性分子包括自体全血血浆中的所有非细胞成分，例如细胞因子、生长因子、趋化因子、免疫调节因子、酶、激素等；其中，生长因子包括胰岛素样生长因子IGF-1、转录生长因子TGF-β1、碱性成纤维细胞生长因子FGF-b和血管内皮细胞生长因子VEGF等。步骤A2制得的自体富血小板因子血浆PFRP中各种生长因子的浓度为自体全血中相应生长因子浓度的2飞倍。步骤B中的生物支架为商品化的胶原蛋白、透明质酸钠、纳米羟基磷灰石、聚乳酸等可应用于组织修复的生物支架。步骤B中的自体成体细胞为自体脂肪细胞、自体成纤维细胞、自体间充质干细胞及其它可应用于修复作用的细胞。所述透明质酸钠包括交联透明质酸钠和不交联透明质酸钠。一种通过自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法制备的自体富血小板因子血浆PFRP制剂。 一种含有自体富血小板因子血浆PFRP制剂的敷料，由敷布浸在自体富血小板因子血浆PFRP制剂中制得。本专利技术采用的生物支架为生物体可吸收、可降解的材料；生物支架起到载体、填充和缓释的作用。本专利技术采用的胶原蛋白(collagen)是一种生物性高分子物质，是一种白色、不透明、无支链的纤维性蛋白质。它可以补充皮肤各层所需的营养，使皮肤中胶原活性增强，有滋润皮肤，延缓衰老、美容、消皱、养发等功效；本专利技术中采用的是双美(Sunmax)胶原蛋白植入剂，注册证号为国食药监械(许)字2009第3460037号，由台湾双美生物科技有限公司研制。本专利技术采用的透明质酸钠本身是人体皮肤的构成成分之一，是人体内分布最广的一种酸性黏糖，存在于结缔组织的基质中，具有良好的保湿作用，促进伤口愈合的作用。本专利技术采用的注射级透明质酸钠，生产厂家为西安力邦制药有限公司，国药准字H20054738。本专利技术采用的纳米羟基磷灰石，是一种典型的生物材料，具有优良的生物相容性和生物活性，可作为骨替代材料、整形和整容外科、齿科、层析纯化、补钙剂等。本专利技术采用的是医用纳米羟基磷灰石/聚酰胺66复合骨充填材料，生产厂家为四川国纳科技有限公司，国食药监械(准)字2007第3460598号。本专利技术采用的聚乳酸具有优异的生物相容性和生物可降解性，以及良好的抗拉强度及延展度，可作为优良的组织工程材料。本专利技术采用的是美国NatureWorks LLC聚乳酸PLA Ingeo3251D0本专利技术采用的自体成体细胞包括自体脂肪细胞、自体成纤维细胞、自体间充质干细胞及其它可应用于组织修复的细胞，上述细胞从自体获得，如手术等，可以预存。本专利技术提供的自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法具有以下有益效果:1、通过对自体全血的特殊处理得到自体富血小板因子血浆PFRP，避免引入污染源，减少了污染风险；2、由于采用的自体富血小板因子血浆PFRP不含膜抗原，即使异体使用也不存在免疫风险；3、通过该方法制备的自体富血小板因子血浆PFRP制剂，对半月板损伤等具有很好的组织修复作用，无疼痛且疗效持久；4、通过该方法制备的自体富血小板因子血浆PFRP制剂，具有很好的抗皱、填充和提升效果；5、制备方法简便、成本低，适于普通人群，具有很好的经济效益和社会效益。附图说明图1为患者脸部凹陷部位图片；图2为经治疗后患者脸部凹陷部分图片；图3为患者手部黑斑图片；图4为经治疗后患者手部黑斑图片。具体实施例方式下面 结合附图和实施例对本专利技术进行详细的描述，但它们不是对本专利技术的进一步限制。实施例1、材料:自体外周抗凝血，注射级透明酸钠溶液(透明质酸钠分子量为30万 300万，质量浓度范围为0.0广2%，质检合格)，一次性离心管、吸管等；2、设备:生物安全柜、低速离心机、低温冰箱等；3、操作地点:无菌实验室实施例11、自体富血小板血浆PRP的制备，采集自体外周抗凝血20ml，采血后2h内离心，离心力1800g，离心时间为Smin ;离心后弃去上段贫血小板血浆和下段红细胞，留取中段自体富血小板血浆PRP (上段贫血小板血浆、中段富血小板血浆PRP、下段红细胞的颜色各不相同，因此可以以颜色区分)，制备得到的自体富血小板血浆PRP放入_80°C冻存备用，全程无菌操作；2、自体富血小板因子血浆PFRP的制备，将_80°C保存的自体富血小板血浆PRP取出，在37°C溶化后离心取富血小板因子血浆PFRP备用，弃去底部膜碎片；离心过程中的离心力为4000g,离心时间为IOmin,全程无菌操作；3、自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备，将得到的自体富血小板因子血浆PFRP与透明质酸钠按1:1体积比混合得到自体富血小板因子血浆PFRP制剂。本实施例采用的是含有透明质酸钠的注射级透明质酸钠溶液，透明质酸钠分子量为100万，质量浓度为0.5% ;全程无菌操作。实施例21、自体富血小板因子血浆PRP的制备，采集自体抗凝血20ml，采血后此内离心，离心力1600g，离心时间为IOmin ;离心后弃去上段贫血小板血浆和下段红细胞，留取中段自体富血小板血浆PRP低温冻存，全程无菌操作；2、自体富血小板因子血浆PFRP的制备，将制备的自体富血小板血浆PRP本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、自体富血小板因子血浆PFRP的制备，采集自体全血，利用离心加冻融方式制备得到自体富血小板因子血浆PFRP；B、自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备，将得到的自体富血小板因子血浆PFRP与生物支架/自体成体细胞按体积比3:1?1:1混合得到自体富血小板因子血浆PFRP制剂。

【技术特征摘要】
1.一种自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: A、自体富血小板因子血浆PFRP的制备，采集自体全血，利用离心加冻融方式制备得到自体富血小板因子血浆PFRP ； B、自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备，将得到的自体富血小板因子血浆PFRP与生物支架/自体成体细胞按体积比3:1-1:1混合得到自体富血小板因子血浆PFRP制剂。2.根据权利要求1所述的自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法，其特征在于:步骤A包括以下分步骤: Al、自体富血小板血浆PRP的制备，采集自体全血，离心分层后，弃去上段贫血小板血浆和下段红细胞，留取中段自体富血小板血浆PRP，立即深低温冻存； A2、自体富血小板因子血浆PFRP的制备，将自体富血小板血浆PRP冻融后，离心取上层富血小板因子血浆PFRP备用，弃去底部膜碎片。3.根据权利要求2所述的自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法，其特征在于:步骤Al中利用抗凝管采集自体外周血。4.根据权利要求2所述的自体富血小板因子血浆PFRP制剂的制备方法，其特征在于:步骤Al,离心过程中的离心...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈静娴，申重阳，海泉，胡忠国，赵令卉，王翔，王小燕，郑榆坤，赵峻，
申请(专利权)人：成都清科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：