一种悬浮液接种培育夏块菌根苗的方法技术

本发明专利技术公开了一种悬浮液接种培育夏块菌根苗的方法，通过无菌苗培育、菌剂制备、悬浮液接种法、炼苗、菌根苗培育、检测确认步骤，攻克了夏块菌人工接种的难题，与现有培育方法相比较，本发明专利技术以华山松、板栗、云南松为宿主，将夏块菌孢子在相对无菌的条件下，即杜绝真菌的竞争和多数霉菌侵染的条件下，足量与夏块菌宿主树种根部接触，在一定时间内保持夏块菌孢子单一的感染优势，形成稳固和大量的夏块菌菌根。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种菌根苗人工接种培育方法，尤其涉及。
技术介绍
块菌通常与林木根系具有共生关系，是重要的野生食用菌，其子囊果含有较高的营养成分，商业价值为世人所瞩目。法国、意大利的黑孢块菌(Tuber melanosporum)和白块菌(Tuber magnatum)在国际市场上价格贵如白金,并已经成为当地文化的重要组成部分。夏块菌(拉丁学名:tube aestivum vitt.)，子囊果呈不规则球形，基部常有凹陷，直径3-6cm，表面具有5-6边的角形疣凸，疣的直径可达0.5cm，较黑孢块菌和印度块菌子囊要表面特征明显。内部(孢体)苍白色，后呈奶油色或褐黄色，内有相互交连和分枝的脉络。国内目前已经发现了印度块菌、夏块菌、白块菌等20余种块菌种类，主要分布于我国西南各省，出产季节为每年的10月一第2年2月，幼时白色至灰白色，成熟呈黑色或者褐色，具有清晰的乳白色菌脉，食之味美，含有丰富的蛋白质及多种维生素，尤其是维生素A、维生素B2含量极高。由于块菌的生长必需与合适的宿主植物根系营共生生活，否则将无法形成子囊果，这就意味着人工栽培块菌离不开活体宿主植物，因而块菌人工栽培比较困难，技术含量高，要实现块菌的人工栽培必须首先突破菌根南的培育技术。国内虽然对我国的中国块菌和印度块菌在生理生态方面的研究较多，对其块菌菌根首合成培育技术也有初步研究和报道。但是，技术在实验室操作性过多，生产操作性不强，而且夏块菌菌根苗培育技术鲜有见报道。接近的专利专利技术《一种块菌与菌根合成方法》，专利申请号200810058447.9 存在问题一:《一种块菌与菌根合成方法》供试树种单一，块菌菌种单一。方法中只涉及了针叶树种，未涉及阔叶树种；方法中只涉及了中国块菌，即印度块菌，未涉及国际公认价值较高的夏块菌、白块菌。存在的问题二:无菌苗培育。《一种块菌与菌根合成方法》中无菌苗基质采用灭菌I小时的珍珠岩和蛭石(1/1混合)，能够保证苗木培育中的透水性，但不能解决苗木生长的养分营养需求问题，苗木生长缓慢，并且基质灭菌时间不够，容易出现污染。而且无菌苗培育应该在高架相对封闭的温室内进行培育，才能保障无菌苗培育过程中不受其它杂菌尤其是真菌的侵染。存在的问题三:《一种块菌与菌根合成方法》中接种基质配方为腐殖质、水、蛭石1/1/1混合，PH值调整到7.0。实际上不同树种间基质配比差异性较大，就印度块菌的华山松菌根苗而言，过筛红土与蛭石按1/1混合效果好得多，而土壤PH值调整应当在6.5-7.0的区间范围内。存在的问题四:《一种块菌与菌根合成方法》菌剂制备和接种技术苗圃操作性不强，易造成2次污染。一是块菌子囊果取出后，未对其表面灭菌，其子囊果表面可能含有的其它真菌和泥土是不能无菌水洗掉的，可能造成菌根苗的直接污染。二是接种方式采取的是蘸根，接种液的浓度也偏小，蘸取过程中因为根系发育等不一致，将造成接种各苗之间孢子量不对称。存在的问题五:《一种块菌与菌根合成方法》缺乏炼苗过程。《一种块菌与菌根合成方法》中菌根苗培育是直接放置在自然通风的大棚内进行，在苗木培育初始的15-30天，需要相对空间无菌的空间进行炼苗，块菌菌根形成效果会更稳定，杜绝初期受外界杂菌的竞争影响。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于提供一种解决上述问题，针对夏块菌菌根苗的人工接种培育方法。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是:，包括如下步骤， (1)培育宿主植物苗，具体如下， A、采集、遴选宿主植物种子； 所述宿主植物选用云南松、华山松、板栗之一种； B、处理宿主植物种子； 将步骤A收集的种子水选去出空壳，用30%的H2O2浸泡处理40分钟后，用蒸馏水冲洗，直至无H2O2气味为止； C、制备培养基； 将蛭石与泥炭土按体积比1:1混合装入育苗框内，经高温121-126 高压1.5kg/cm2灭菌2小时以上，形成无菌基质育苗框； D、培育宿主植物； 将经步骤B处理后的植物种子及时播入无菌基质育苗框内，然后放置于温室内催芽，出芽后移入大棚育株，直至长出根苗； (2)制备菌剂，具体如下， A、收集和保存菌种； 采集夏块菌子实体，先用刷体轻轻洗净表面泥土，再在75%的酒精中浸泡3min对其表面灭菌，同时再在酒精灯火焰上快速灼烧，继续灭菌，然后置于经高温高压灭菌后的河沙中，于3-5°C的温度下冷藏保存备用，所述河沙采用高温121-126°C高压1.5kg/cm2灭菌2小时以上； B、制备菌剂；其配制方法如下， 第一步，先称取一定量的块菌，用75%的酒精中浸泡1-3分钟对其表面灭菌，然后再在酒精灯火焰上快速灼烧，继续灭菌，置于灭菌后的操作台上，用酒精灭菌后的打浆机将其粉碎成粒径小于Imm悬浮液，使菌种的孢子出壳，悬浮液中块菌与蒸馏水体积比为1:5 ；第二步，将高吸水性丙烯酸树脂与块菌悬浮液按体积比1:400配制； 第三步，将吲哚乙酸速溶后配制60PPM浓度的蒸馏水溶液； 第四步，将第二步制作的悬浮液与第三步制作的蒸馏水溶液按体积比1:1配制成块菌接种剂； (3)接种，采用悬浮液接种法，具体如下，A、整理育好的宿主植物苗，减去多余的根、叶； B、在接种杯内填入经消毒杀菌的无菌土，无菌土填装量约占接种杯容积的1/3，再将宿主植物苗放入杯中央； C、向宿主植物苗根部撒上块菌悬浮液菌剂，使之附着在根系上； D、装填接种培育基质，将根系覆盖； (4)炼苗； 刚接种块菌的植株先放置于温度在15_25°C之间，基质的湿度保持在50-80%的炼苗室内育苗架上培育15-30天，使菌种在宿主上寄生成功； (5)培育菌根苗； 将已经寄生成功的植株移出到玻璃大棚的育苗架上培育6-24个月，成为可供大田栽培的商品苗。作为优选，所述无菌苗培育的步骤C中，所述云南松、华山松种子均匀撒播在育苗框内，上覆Icm灭菌基质，而板栗种子采用点播在育苗框内，上覆2-3cm灭菌基质，用清水将基质浇透后放置于温度25°C的温室中进行催芽，待80%以上的种子发芽后再移入温度为10-35°C的大棚中进行植株培育，同时将基质的湿度保持在50 - 80%。 作为优选，所述菌剂制备步骤中，菌种的一般保存期为1-3个月；若长期保存，要置于-18°C的冷冻室内真空保存。作为优选，所述接种步骤D中，所述接种培育基质使用高温121_126°C高压1.5kg/cm2灭菌2小时以上的无菌基质，根据树种的差异，云南松宜采用的泥炭土与蛭石比例按体积比1:1混合；华山松和板栗宜采用的自然土与蛭石比例按体积比1:1混合；基质的PH值用生石灰调节，维持在7.5。作为优选，所述遴选宿主植物种子的方法是，云南松和华山松用水选去除空壳后晾干后常温储藏备用；板栗种子水选去除霉烂和不饱满的种子，晾干表面水分，再与湿度为25 - 35%的洁净河沙按体积比1:2的比例混合，并置于5°C的冰箱中保存备用。作为优选，所述人工接种的步骤C中，所述接种量2_5g /株。与现有技术相比，本专利技术的优点在于:本专利技术解决了夏块菌人工接种的难题，以华山松、板栗、云南松为宿主，将夏块菌孢子在相对无菌的条件下，即杜绝真菌的竞争和多数霉菌侵染的条件下，足量与夏块菌宿主树种根部接触，在一定时间内保持夏块菌孢子单一的感染优势，形成稳固和大量的夏块菌菌根。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种悬浮液接种培育夏块菌根苗的方法，其特征在于：包括如下步骤，（1）培育宿主植物苗，具体如下，A、采集、遴选宿主植物种子；所述宿主植物选用云南松、华山松、板栗之一种；B、处理宿主植物种子；将步骤A收集的种子水选去出空壳，用30％的H2O2浸泡处理40分钟后，用蒸馏水冲洗，直至无H2O2气味为止；C、制备培养基；将蛭石与泥炭土按体积比1：1混合装入育苗框内，经高温121?126℃高压1.5kg/cm2灭菌2小时以上，形成无菌基质育苗框；D、培育宿主植物；将经步骤B处理后的植物种子及时播入无菌基质育苗框内，然后放置于温室内催芽，出芽后移入大棚育株，直至长出根苗；（2）制备菌剂，具体如下，A、收集和保存菌种；采集夏块菌子实体，先用刷体轻轻洗净表面泥土，再在?75％的酒精中浸泡?3min对其表面灭菌，同时再在酒精灯火焰上快速灼烧，继续灭菌，然后置于经高温高压灭菌后的河沙中，于3?5℃的温度下冷藏保存备用，所述河沙采用高温121?126℃高压1.5kg/cm2灭菌2小时以上；B、制备菌剂；其配制方法如下，第一步，先称取一定量的块菌，用75％的酒精中浸泡?1?3分钟对其表面灭菌，然后再在酒精灯火焰上快速灼烧，继续灭菌，置于灭菌后的操作台上，用酒精灭菌后的打浆机将其粉碎成粒径小于lmm悬浮液，使菌种的孢子出壳，悬浮液中块菌与蒸馏水体积比为1：5；第二步，将高吸水性丙烯酸树脂与块菌悬浮液按体积比1：400配制；第三步，将吲哚乙酸速溶后配制60PPM浓度的蒸馏水溶液；第四步，将第二步制作的悬浮液与第三步制作的蒸馏水溶液按体积比1:1配制成块菌接种剂；（3）接种，采用悬浮液接种法，具体如下，A、整理育好的宿主植物苗，减去多余的根、叶；B、在接种杯内填入经消毒杀菌的无菌土，无菌土填装量约占接种杯容积的1/3，再将宿主植物苗放入杯中央；C、向宿主植物苗根部撒上块菌悬浮液菌剂，使之附着在根系上；D、装填接种培育基质，将根系覆盖；（4）炼苗；刚接种块菌的植株先放置于温度在15?25℃之间，基质的湿度保持在50?80％的炼苗室内育苗架上培育15?30天，使菌种在宿主上寄生成功；（5）培育菌根苗；将已经寄生成功的植株移出到玻璃大棚的育苗架上培育6?24个月，成为可供大田栽培的商品苗。...

【技术特征摘要】
1.一种悬浮液接种培育夏块菌根苗的方法，其特征在于:包括如下步骤， (1)培育宿主植物苗，具体如下， A、采集、遴选宿主植物种子； 所述宿主植物选用云南松、华山松、板栗之一种； B、处理宿主植物种子； 将步骤A收集的种子水选去出空壳，用30%的H2O2浸泡处理40分钟后，用蒸馏水冲洗，直至无H2O2气味为止； C、制备培养基； 将蛭石与泥炭土按体积比1:1混合装入育苗框内，经高温121-126 高压1.5kg/cm2灭菌2小时以上，形成无菌基质育苗框； D、培育宿主植物； 将经步骤B处理后的植物种子及时播入无菌基质育苗框内，然后放置于温室内催芽，出芽后移入大棚育株，直至长出根苗； (2)制备菌剂，具体如下， A、收集和保存菌种； 采集夏块菌子实体，先用刷体轻轻洗净表面泥土，再在75%的酒精中浸泡3min对其表面灭菌，同时再在酒精灯火焰上快速灼烧，继续灭菌，然后置于经高温高压灭菌后的河沙中，于3-5°C的温度下冷藏保存备用，所述河沙采用高温121-126°C高压1.5kg/cm2灭菌2小时以上； B、制备菌剂；其配制方法如下， 第一步，先称取一定量的块菌，用75%的酒精中浸泡1-3分钟对其表面灭菌，然后再在酒精灯火焰上快速灼烧，继续灭菌，置于灭菌后的操作台上，用酒精灭菌后的打浆机将其粉碎成粒径小于1mm悬浮液，使菌种的孢子出壳，悬浮液中块菌与蒸馏水体积比为1:5 ； 第二步，将高吸水性丙烯酸树脂与块菌悬浮液按体积比1:400配制； 第三步，将吲哚乙酸速溶后配制60PPM浓度的蒸馏水溶液； 第四步，将第二步制作的悬浮液与第三步制作的蒸馏水溶液按体积比1:1配制成块菌接种剂； (3)接种，采用悬浮液接种法，具体如下， A、整理育好的宿主植物苗，减去多余的根、叶； B、在接种杯内填入经消毒杀菌的无菌土，无菌土填装量约占接种杯容积的1/3，再将宿主植物苗放入杯中央； C、向宿主植物苗根部...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩灯，林强，雷彻虹，柳成益，李荣伟，陈宾，唐平，叶光志，
申请(专利权)人：攀枝花市林业科学技术推广站攀枝花市林业工作总站，
类型：发明
国别省市：