由豆类种子工业生产凝集素制剂的方法，其中在包含乙酸、抗氧化剂及高挥发性有机酸或其盐的提取系统中从豆类种子中提取凝集素部分，所述提取处于低温下且基本上无需混合，随后，在浓缩之后，优选在薄膜上浓缩之后，向所得到的PHA部分添加低挥发性防腐剂并通过喷雾干燥进行干燥，得到凝集素制剂，其具有不低于128HU/100mg制剂的凝集素活性和较低水平的碎渣物质。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】从普通豆类提取凝集素的方法以及凝集素制剂本专利技术的主旨是生产用作猪饲料添加剂的凝集素制剂的方法。从波兰申请说明书P. 375476 “生产凝集素制剂的方法，凝集素制剂以及给予哺乳动物凝集素制剂的方法”中已知的专利技术，采取应用防腐剂以保护粉末形式的产品，并未指出在提取和提取浓缩过程中，尤其是在提取物和浓缩提取物的贮存期以进行必要的活性分析期间，以及开始进一步生产阶段之前的中间期间，需要应用防腐剂。在某些情况下，已知的上述说明书P. 375476允许将确定的生物活性的提取物直接分装至计量容器中，避开干燥阶段。然而，这需要在分装之前引入防腐剂的标准方法，并且既不会影响提取方法也不会影响其结果。文献中已知的其他凝集素生产方法利用多级提取工序，改变提取物PH和多次过滤，盐沉淀，渗析和冷冻干燥作为生产固体产品的方法的基础。上述方法利于生产的凝集素制剂，其预定活性受限于提取原料中碎渣物质的存在。因而存在对实现这样的提取方法的需要，所述方法使得产生具有增强活性的产品成为可能。本专利技术的目的是实现由豆类种子生产用作猪饲料添加剂的粉末形式的高活性终产品的方法。出乎意料地，本专利技术解决了上述问题。本专利技术的主题是由豆类种子工业生产凝集素制剂的方法，基于将豆类种子粉碎，在酸性环境中，在抗氧化剂和防腐剂存在下，提取豆柏，其特征在于所述提取在低温下进行，优选4° C至8° C，其中仅在所述提取的开始阶段进行相混合，接着浓缩提取物，优选在薄膜上浓缩，然后向由此产生的PHA部分添加低挥发性防腐并干燥，优选通过喷雾干燥，得到凝集素制剂，其具有的活性凝集素含量不低于128HU/100mg制剂。优选地，根据本专利技术的方法，其特征在于所述提取利用含有乙酸、抗氧化剂及高挥发性短链有机酸或其盐的提取系统，于低温下进行。同样优选地，根据本专利技术的方法，其特征在于仅在提取的第一阶段混合提取的固相和液相，优选在60分钟之内。优选地，根据本专利技术的方法，其特征在于进行提取工序的第二部分时无需相混合，优选在7小时之内。本专利技术的第二主题是由普通豆类种子生产的猪饲料添加剂，其特征在于凝集素活性不低于128HU/100mg制剂和降低水平的碎渣物质。优选地，根据本专利技术的饲料添加剂，其特征在于根据权利要求1至4中任一项的方法获得。出乎意料地，证明明显减少提取过程中的混合时间，改变温度范围(及由此改变该工序的动力学和特征)，明显提高了 PHA提取物(拉丁语植物血凝素(phytohaemagglutinin))的效率和分离性,相对于文献所描述的已知的生产PHA凝集素的方法，这实际上促进和保证了具有更高的生物活性和更低水平的碎渣物质的产品的生产。生产粉末形式的凝集素制剂的新方法的本质，是形成新的提取系统，其中引入提取系统中的变化，即省略混合并相应降低工序温度，显著地影响提取工序的分离性，表现为降低提取物中的碎渣物质含量而并未改变凝集素水平，由此未改变提取物和由其制备的凝集素制剂的活性水平。本专利技术解决了由豆类种子(在此是普通豆类)提取PHA的效率问题，保证了生产凝集素制剂的单独阶段中碎渣物质的水平降低。生产凝集素制剂的新方法特别涉及由豆类种子提取全部形式的凝集素的阶段，并且利于粉末形式的高活性凝集素制剂的生产。因此，最终粉末产品的活性可以由128HU/100mg提高至256HU/100mg，并且同样地，显著降低每IOOOHU的生产成本。相对于利用名称为“生产凝集素制剂的方法，凝集素制剂以及给予哺乳动物凝集素制剂的方法”的专利申请P. 375476，以及专利技术申请号PL384706 ( “凝集素饲料添加剂以及生产其的工业方法”)中的专利技术的方法提取的含有并分离的剩余有机物质，所述方法致使生产新的、不同的凝集素制剂，其具有增加的全部5种形式凝集素的质量含量。产品和中间阶段都通过测定血凝素活性(HU)来控制，所述血凝素活性(HU)定义为根据改进的Pusztai and Watt (1974)方法，在+25° C的温度下，导致最终稀释物中2%红细胞悬浮液凝集50%的物质的量，表示为mg/ml。间接控制提取和浓缩工序的另一种方法，尤其是为了工艺技术的目的，是测定干物质。在致力于提高生产凝集素制剂的效率以及用于不同条件提取的技术时，出乎意料地证明替换现有技术的提取技术方案的应用，不仅改进了由豆科植物种子(在此是普通豆类)物质中提取PHA的条件，这通过提取物和由其在随后工序中制备的粉末的凝集素活性相对于干物质测定的增强来证实，由此证实提取物和产品中碎渣物质含量的降低，并且利于具有活性大于128HU/100mg的凝集素产品的生产。生产粉末的生物活性超过128HU/100mg的可能性，不仅降低了生产相同量的粉末的成本，而且利于设计新的凝集素产品制剂。实施例1利用本专利技术的方法由豆类种子提取PHA并生产终产品_7] 普通豆类种子的制备在碾磨机中，于内部冷却和碾磨的温度控制下，碾磨普通豆类的种子。碾磨工序的温度在+34° C至40° C之间变化。将碾磨的粒径设定为具有Imm直径的颗粒，其实际上产生98%的部分具有0. 98至1. 02mm的粒径。提取溶液的制备利用慢速搅拌器制备用于提取的乙酸溶液，其中将冰乙酸以IOOOml溶液中1.1g乙酸的比率混合到水中。向该溶液中添加每升溶液0.1g抗坏血酸和每升溶液0.1g丙酸。制备的提取溶液的量取决于所碾磨的豆类种子的质量。推荐的比率是10:1。提取工序为了提取，将测定量的粉碎的普通豆类种子添加至提取溶液中并开始混合。10分钟之后，开始控制提取工序的pH。所推荐的用于提取工序的pH是5. 0±0. 07的范围。提取30min之后进行任何可能的pH校正，因为该点之后开始值得一提的是该提取系统的pH稳定。如果需要PH校正的话，20分钟之后应当检查校正结果。提取温度应当为+4° C至+8° C。混合应当持续总共I小时，随后的另外7小时无需混合所述混合物。提取物的离心沉淀在设计用于分离蛋白沉淀的高-RPM转子离心机上进行固体的分离。转子直径为200mm，转速为18000RPM。该工序是周期性的，并且周期由转子体积决定。为了将其制备用作动物饲料，分别处理所分离的提取后的残余物和富含蛋白的产物。讲一步的提取工序利用反渗透浓缩澄清的提取物。提取物的初始参数为干物质1. 242%，活性64HU/100ml。分析所浓缩溶液的血凝素活性和干物质含量。即将喷雾干燥之前，向所浓缩的提取物添加适当的、计算量的麦芽糖糊精以及N-丙基对羟基苯甲酸钠或N-乙基对羟基苯甲酸钠二者之一。喷雾干燥工序以不高于+180° C的进气温度进行。分析产品的生物活性，并配制部分原料，这根据EU的饲料添加剂要求进行分析。所得到的产品是灰白色(白色至淡黄色)粉末，高度可流动，倾向于凝结成块且易于在水中形成悬浮液。该粉末与常用的机械浇注机完全兼容。血凝素活性不低于128HU/100mg ;Hg、As、Pb和Cd含量比EU标准更低；符合微生物纯度，并且具有由生产起3年的保质期。实施例2测定制剂活性的血凝试验红细朐的制各将从Wistar大鼠采集的Iml血液(和I滴肝素)以1:20稀释于生理盐水(0. 9%NaCl)中并离心(2000RPM，15min，4° C)。将上清液连同中间相一起倒出。将红细胞重悬于生理盐水中本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.由豆类种子生产凝集素制剂的工业方法，其中将豆类种子碾碎，在酸性环境中，在抗氧化剂和防腐剂的存在下，提取豆柏，其特征在于，所述提取在低温下进行，优选4° C至8° C，其中仅在提取的开始阶段进行相混合，接着浓缩提取物，优选在薄膜上浓缩，然后向由此产生的PHA部分添加低挥发性防腐剂并进行干燥，优选通过喷雾进行干燥，得到凝集素制剂，其包含不低于128HU/100mg制剂的凝集素活性。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取利用包含乙酸、抗氧化剂及高挥发性短链有机酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：帕维尔·米沙洛斯基，
申请(专利权)人：百奥莱克有限公司，
类型：
国别省市：
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