调整禽畜肠道菌群益生菌微生物菌剂及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种调整禽畜肠道菌群结构的益生菌及其制备方法，是由产朊假丝酵母、粪链球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌等6种菌组成，经过三级液体发酵，再将扩大培养发酵菌液与饲料麦麸均匀混合，进行固体发酵，低温干燥而制备的调整禽畜肠道菌群结构的益生菌菌剂。该菌剂能调整禽畜肠道菌群结构，促进益生菌生长，抑制有害菌生长，可以取代抗生素，提高饲料利用率，明显降低禽畜排泄物的臭味，改善养殖生态环境和周边环境，高效、无毒、无残留。可广泛应用于禽畜饲料添加剂，预防禽畜肠道疾病和呼吸道疾病。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种，具体说，是一种调整禽畜肠道菌群结构、取代抗生素预防禽畜肠道疾病及呼吸道疾病的益生菌菌剂及其制备方法。
技术介绍
现在已有不少关于养殖业为了防止禽畜发病滥用抗生素、滥用兽药的报道，不仅养殖成本增加，而且导致牛奶、鸡蛋和各种肉产品品质下降，不健康风险增加、严重影响养殖业的持续发展。但是，在养殖业中由于多是集约式养殖，养殖环境和周边环境质量差，禽畜容易产生呼吸道、肠道疾病，市场迫切需要一种无残留、无毒性、成本低的饲料添加剂，取代抗生素、有害兽药，以保证养殖禽畜健康生长，从而提高禽畜产品的品质和质量。益生菌菌剂正是无残留、无毒性，以调整禽畜肠道菌群结构为目标，而达到预防肠道疾病和呼吸道疾病的目的。在养殖周期内，除了必要的免疫外，可以不用抗生素和兽药。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种，该菌剂能调整禽畜肠道菌群结构，促进益生菌生长，抑制有害菌生长，可以提高饲料利用率，能明显降低禽畜排泄物的臭味，改善养殖生态环境和周边环境，高效、无毒、无残留，能广泛应用于禽畜饲料添加剂，预防禽畜肠道疾病和呼吸道疾病。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是这种调整禽畜肠道菌群益生菌微生物菌剂，由产朊假丝酵母Wi/is)、粪链球菌(Stre/ (ococcys feacalis)、枯草芽孢杆菌iBaciIlus sub (i7i5■入纳豆芽孢杆菌iBaciIlus)、植物乳杆菌{Lactobacillus 和沼泽红假单胞菌palustris) 6 种菌组成，经过三级液体发酵， 再将扩大培养发酵菌液与麦麸均匀混合，经固体发酵，低温干燥而制备的调整禽畜肠道菌群结构的益生菌菌剂。这种调整禽畜肠道菌群益生菌菌剂的制备方法包括以下步骤 (1)按微生物发酵工程工艺，先将斜面保存产朊假丝酵母菌种用马铃薯培养基PDA活化，经三级逐级扩大培养，制备成产朊假丝酵母的一级种子菌液；同理，粪链球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌5种细菌分别用牛肉膏蛋白胨培养基活化，经过三级逐级扩大培养，制备成粪链球菌等5种细菌的一级种子菌液； (2)将产朊假丝酵母和粪链球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌5种细菌的一级种子菌液用玉米粉-豆柏-马铃薯-蔗糖培养基进行二级、三级扩大培养； 所述二级扩大培养条件将热带假丝酵母和粪链球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌5种细菌的一级种子液等体积混合，按接种量质量比1:10的6种菌的一级种子混合菌液，温度30°C，转速100-200r/min，，压力0. 05MPa，发酵20-24h，在无菌条件下抽取IOmL发酵液，稀释100倍，检查波长660nm吸光值OD，OD达到0.6-0. 8后，再转入三级扩大培养阶段； 所述三级扩大培养条件按接种量质量比1:10 二级扩大培养液，温度28-30°C，转速200-300r/min，压力0. 05MPa,发酵20_24h，抽取IOmL发酵液，稀释100倍，检查波长660nm0D值，OD达到0. 6-0. 8后，停止培养，有效菌菌落数用平板稀释法在l*101(lcfu. mL—1以上，cfu-菌落数。这种调整禽畜肠道菌群益生菌菌剂的制备方法，所述玉米粉-豆柏-马铃薯-蔗糖培养基组成按质量份数为玉米粉20-30份，豆柏1-2份，马铃薯10-20份，蔗糖2份，氯化钠0. 5份，磷酸氢二钾0. 5份，硝酸钾10份，硫酸镁0. 5份，硫酸亚铁0. 002份，自来水1000份，用过饱和氢氧化钙调节pH值7. 4-7. 6。这种调整禽畜肠道菌群益生菌菌剂的制备方法，所述菌剂所用菌种安全、可靠，购买于中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心，都是农业部饲料添加剂允许使用菌种。发酵生产过程中全部用不锈钢发酵罐完成，无废气、废物、废水产生，无重金属污染。产品作为饲料添加剂，符合农业部有关饲料添加剂的标准要求。本专利技术的有益效果是这种微生物菌剂高效、无毒、无残留，能广泛应用于禽畜饲料添加剂，预防禽畜肠道疾病和呼吸道疾病。实验发现，该益生菌菌剂中，产朊假丝酵母与粪链球菌配合，还有降解饲料中黄曲霉毒素、烟曲霉毒素、呕吐毒素和玉米霉烯酮等霉菌毒素的效果。该菌剂能调整禽畜肠道菌群结构，促进益生菌生长，抑制有害菌生长，所以，可以提高饲料利用率，能明显降低禽畜排泄物的臭味，改善养殖生态环境和周边环境。该产品是有效菌的活性菌剂。有效菌菌落数达到l*101(lcfu. g_\符合农业部有关饲料添加剂的标准要求。下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明。具体实施例方式菌剂的制备1、按微生物发酵工程常规工艺，先将斜面保存产朊假丝酵母菌种用马铃薯培养基活化，经试管(约IOmL)-三角瓶(约IOOmL)-大三角瓶(约IOOOmL)逐级扩大培养，制备成产朊假丝酵母的一级种子菌液；同理粪链球菌等5种细菌分别用牛肉膏蛋白胨培养基活化，经过试管-三角瓶-大三角瓶逐级扩大培养，制备成粪链球菌等5种细菌的一级种子菌液。2、将产朊假丝酵母和粪链球菌等5种细菌的一级种子菌液用玉米粉-豆柏-马铃薯-蔗糖培养液进行二级、三级扩大培养。3、二级扩大培养条件(30L发酵罐)将产朊假丝酵母和粪链球菌等6种的一级种子液等体积混合(1:1:1: 1:1:1),接种量质量比1:10的6种菌的一级种子混合菌液，温度300C，转速100-200r/min，压力0. 05Mpa,发酵20_24h，在无菌条件下，抽取IOmL发酵液，稀释100倍，检查波长660nm吸光值(0D)，OD达到0. 6-0. 8后，再转入三级扩大培养阶段。4、三级扩大培养条件(300L发酵罐)接种量质量比1:10 二级扩大培养液，温度300C，转速200-300r/min，压力0. 05Mpa,发酵20_24h，在无菌条件下，抽取IOmL发酵液，稀释100倍，检查波长660nm吸光值，达到0. 6-0. 8后，停止培养。有效菌菌落数l*101(lcfu.mL-1以上(平板稀释法)。所述牛肉膏蛋白胨培养基配方牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水IOOOmL, pH 值 7. 2-7. 4. 所述马铃薯培养基(PDA)配方马铃薯200g，去皮、去残，切成碎片或丝，加水IOOOmL,小火煮20-30min,过滤,滤液补足IOOOmL,加入20g鹿糖，自然pH值。所述玉米粉-豆柏-马铃薯-蔗糖培养基配方玉米粉20_30g，豆柏l_2g，马铃薯10-20g(去皮、去残)，蔗糖2g，氯化钠0. 5g,磷酸氢二钾0. 5g,硝酸钾10g，硫酸镁0. 5g,硫酸亚铁0. 002g,自来水IOOOmL,用过饱和氢氧化钙调节pH值7. 4-7. 6. 5、固体发酵 将上述三级液体扩大培养的菌液，以质量比为1:20加于饲料麦麸上，在转筒内边搅拌边混合，混合均匀后，在28-30°C，转筒l-2r/min条件下，发酵24_48h，取样检查菌落数达到l*101Qcfu. mr1以上要求后，在40-45°C下，低温干燥20-24h.测定含水率达20%，合格后，分装于具聚乙烯内衬的包装袋内，防潮、防暴晒，室温保存。有效期暂定I年。所述幾链球菌{Streptococcus/eacWis, ACCC1018本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种调整禽畜肠道菌群益生菌微生物菌剂，其特征在于：由产朊假丝酵母（Candida?utilis）、粪链球菌（Streptococcus?feacalis）、枯草芽孢杆菌（Bacillus?subtilis）、纳豆芽孢杆菌（Bacillus?natto）、植物乳杆菌（Lactobacillus?plantarum）和沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonaspalustris）6种菌组成，经过三级液体发酵，再将扩大培养发酵菌液与麦麸均匀混合，经固体发酵，低温干燥而制备的调整禽畜肠道菌群结构的益生菌菌剂。

【技术特征摘要】
1.一种调整禽畜肠道菌群益生菌微生物菌剂，其特征在于由产朊假丝酵母(G/^i山 ■入幾链球菌{Streptococcus /eacaJis)、枯草芽抱杆菌{Bacillus subtiIis')、规互芽抱杆菌CfeciBw1S flaMo入植物乳杆菌(ZacteAaciBtts plantarum)和沼泽红假单胞菌(.Rhodopseudomonaspalustris ) 6种菌组成,经过三级液体发酵，再将扩大培养发酵菌液与麦麸均匀混合，经固体发酵，低温干燥而制备的调整禽畜肠道菌群结构的益生菌菌剂。2.根据权利要求1所述的调整禽畜肠道菌群益生菌菌剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤 (1)按微生物发酵工程工艺，先将斜面保存产朊假丝酵母菌种用马铃薯培养基(PDA)活化，经三级逐级扩大培养，制备成产朊假丝酵母的一级种子菌液；同理，粪链球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌5种细菌分别用牛肉膏蛋白胨培养基活化，经过三级逐级扩大培养，制备成粪链球菌等5种细菌的一级种子菌液； (2)将产朊假丝酵母和粪链球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌5种细菌的一级种子菌液用玉米粉-豆柏-马铃薯-蔗糖培养基进行二级、三级扩大培养； 所述二级扩大培养条件将热带假丝酵母和粪链球菌、枯草芽孢杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：张清敏，赵颖，
申请(专利权)人：赵颖，昆明华曦饲料有限公司，
类型：发明
国别省市：