从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的工艺方法技术

本发明专利技术提供了一种从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的方法，以藏药镰形棘豆为原料，通过乙醇加热提取、乙酸乙酯萃取、石油醚沉淀、普通硅胶和反相硅胶柱层析等步骤同时得到高纯度的乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮。使用本发明专利技术方法制备的乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮纯度均大于98%，而且二者的产率和提取率均较高，乔松素的产率和提取率分别为0.08%和67.5%，2’,4’-二羟基查尔酮的产率和提取率分别可达0.24%和88.9%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药
，具体涉及一种从镰形棘豆中提取黄酮类活性物质的方法。
技术介绍
镰形棘豆(Oxytropis falcata Bunge)系豆科棘豆属的多年生无莖草本植物,藏药称“莪大夏”、“大夏”、“达夏”，广泛分布于西藏、青海、甘肃南部、四川西部及新疆等地。具有抗炎止痛、清热解毒及止血等功效，内服可治流感、扁桃体炎、高烧、喉炎、气管炎、出血、便秘、炭疽等症以及藏医的黄水病，外敷治疗疮疖肿痛、创伤、骨伤疼痛。由于其突出的抗炎疗效，是藏医的“三大抗炎药”，并享有“草药之王”的美誉。在临床上使用广泛，是六味镰形棘豆散、九味青鹏散、十八味欧曲丸、棘豆消氧洗剂、青鹏膏剂、流感丸、奇正藏贴、奇正消痛贴等多种复方或成药的主要药味，是一味非常具有研究和开发价值的天然抗炎药物。黄酮是镰形棘豆的主要活性成分之一，其生物活性主要集中于抗肿瘤、抗炎、抗氧化、镇痛、防治心血管疾病等方面，其中特别突出的是其显著的抗炎活性。通过系统的化学成分研究，目前已从镰形棘豆中发现黄酮类化合物60余种。乔松素(化学名5，7-二羟基二氢黄酮)和2’，4’ - 二羟基查尔酮是镰形棘豆中黄酮类的主要成分，在药材中的含量分别占到0. 12%和0. 27%，同时，这两种化合物也是医药、保健品的重要原料。现有从镰形棘豆中制备黄酮的方法，工业生产上多是针对总黄酮，如采用水提取-盐酸水解工艺制备总黄酮苷元，采用大孔吸附树脂富集镰形棘豆水提取物中的总黄酮，所得产品中黄酮单体的含量低。制备黄酮单体的方法多是实验室方法，步骤繁琐，制备量低，多是毫克级。中国专利申请号NO. 200910264515.1提供了一种制备黄酮单体2’，4’ - 二羟基查尔酮的方法，但该方法需要使用二氯甲烷有毒试剂，柱层析洗脱溶剂系统组成复杂，还需用特殊设备高效液相制备色谱仪进行纯化，且制备量低，难以实现规模化生产。
技术实现思路
为了克服现在技术的不足，本专利技术的目的是提供一种简单易行、安全可靠且适合工业化生产的同步制备高纯度乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮的方法，以特色藏药镰形棘豆为原料，通过乙醇加热提取、乙酸乙酯萃取、石油醚沉淀、普通硅胶和反相硅胶柱层析等步骤同时得到高纯度的乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮。所述方法无需应用二氯甲烷等有毒试剂，无需复杂的柱层析洗脱溶剂系统，也不需要高效液相制备色谱仪等设备。为了达到上述目的，本专利技术的技术方案为一种从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮的方法，其特征在于，包括以下步骤( 1)取镰形棘豆，粉碎，用乙醇回流提取2 4次，各次提取液过滤，滤液经减压浓缩得总浸膏；(2)总浸膏用水混悬，依次用石油醚萃取2 3次，乙酸乙酯萃取5 7次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物；(3)乙酸乙酯萃取物用硅胶柱色谱分离，先用体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，通过薄层层析法检测流出液，收集含有乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，得浓缩物；(4)浓缩物用少量乙酸乙酯溶解，加入4 7倍石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤3 5次，干燥，得乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮混合物；(5)混合物用反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，通过薄层层析法检测流出液，分别收集含有乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，分别获得乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮。进一步地，上述方法中步骤(I)所述的乙醇为浓度为80、5%的乙醇。进一步地，上述方法中步骤(5)所述的反相硅胶为C18反相硅胶，甲醇为70 80%甲醇。使用本专利技术方法制 备的乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮纯度均大于98% (高效液相色谱法测定)，而且二者的产率和提取率均较高，乔松素的产率和提取率分别为0. 08%和67. 5%，2’，4’ - 二羟基查尔酮的产率和提取率分别可达0. 24%和88. 9%。本专利技术提出的方法工艺简单，且稳定可行，适合工业大生产。本专利技术的有益效果在于(I)可同时制备乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮，节省了生产原料，起到了综合利用的作用。(2)制备的产品纯度高，且产率和提取率也较高，适合工业生产应用。(3 )整个制备过程，无需特殊设备，且避免了有毒试剂的使用。具体实施例方式通过以下具体的实施例可以进一步理解本专利技术，所提供的实施例仅是对本专利技术方法的举例说明，而不以任何方式限制本专利技术揭示的其余内容。以下实施例中使用的试剂和仪器，除特别说明以外，均为普通市售。实施例1从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’，4’- 二羟基查尔酮取镰形棘豆6kg，粉碎，用48L90%乙醇回流提取3次，各次提取液过滤，滤液减压浓缩得总浸膏720g。将总浸膏混悬于2000mL水中，依次用IOOOmL石油醚萃取2次，IOOOmL乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物200g。取乙酸乙酯萃取物，用200g200-300目硅胶拌样，挥干溶剂，另取1700g200-300目硅胶，用体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯湿法上普通玻璃层析柱，加样，先用18L(4倍柱体积)体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，通过薄层层析法检测流出液，收集含有乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，得浓缩物24g。将浓缩物用IOOmL乙酸乙酯溶解，加入600mL石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤4次，干燥，得乔松素和2’，4’- 二羟基查尔酮混合物18g。将混合物用IOOmL甲醇溶解，取2500g200-300目的C18反相硅胶，用75%甲醇湿法上普通玻璃层析柱，加样，用75%甲醇洗脱，通过薄层层析法检测流出液，分别收集含有乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮的流分，减压浓缩至干，得乔松素4. 3g和2’，4’ - 二羟基查尔酮12. Sg。实施例2从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’，4’- 二羟基查尔酮取镰形棘豆kg，粉碎，用10L90%乙醇回流提取3次，各次提取液过滤，滤液减压浓缩得总浸骨125g。将总浸骨混悬于500mL水中，依次用500mL石油醚萃取3次，500mL乙酸乙酯萃取7次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物35g。取乙酸乙酯萃取物，用35g200-300目硅胶拌样，挥干溶剂，另取350g200-300目硅胶，用体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯湿法上普通玻璃层析柱,加样,先用4. 8L (5倍柱体积)体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，通过薄层层析法检测流出液，收集含有乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，得浓缩物5g。将浓缩物用20mL乙酸乙酯溶解，加入140mL石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤5次，干燥，得乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮混合物3. Sg。将混合物用15mL甲醇溶解，取570g200-300目的C18反相硅胶，用75%甲醇湿法上普通玻璃层析柱，力口样，用75%甲醇洗脱，通过薄层层析法检测流出液，分别收集含有乔松素和2’本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’?二羟基查尔酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取镰形棘豆，粉碎，用乙醇回流提取2～4次，各次提取液过滤，滤液经减压浓缩得总浸膏；（2）总浸膏用水混悬，依次用石油醚萃取2～3次，乙酸乙酯萃取5～7次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物；（3）乙酸乙酯萃取物用硅胶柱色谱分离，先用体积比20:1的石油醚?乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚?乙酸乙酯洗脱，通过薄层层析法检测流出液，收集含有乔松素和2’,4’?二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，得浓缩物；（4）浓缩物用少量乙酸乙酯溶解，加入4～7倍体积的石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤3～5次，干燥，得乔松素和2’,4’?二羟基查尔酮混合物；（5）混合物用反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，通过薄层层析法检测流出液，分别收集含有乔松素和2’,4’?二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，分别获得乔松素和2’,4’?二羟基查尔酮。

【技术特征摘要】
1.一种从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’，4’-二羟基查尔酮的方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)取镰形棘豆，粉碎，用乙醇回流提取2 4次，各次提取液过滤，滤液经减压浓缩得总浸膏； (2)总浸膏用水混悬，依次用石油醚萃取2 3次，乙酸乙酯萃取5 I次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物； (3)乙酸乙酯萃取物用硅胶柱色谱分离，先用体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，通过薄层层析法检测流出液，收集含有乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，得浓缩物； (4)浓缩物用少量乙酸乙酯溶解，加入4 7倍体积的石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤3 5次，干燥，得乔松素和2’，4’ - 二羟基查尔酮混合物； (5)混合物用反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，通过薄层层析法检测流出液，分别收集含有乔松素和2 ’，4 ’ - 二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，分别获得乔松素和2 ’，4 ’ - 二羟基查尔酮。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(I)所述乙醇为浓度为80、5%的乙醇。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)所述反相硅胶为C18反相硅胶，甲醇为70 80%甲醇。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)取镰形棘豆I重量份，用6-10倍体积份的80、5%乙醇回流提取2-4次，各次提取液过滤，滤液减压浓缩得总浸膏； (2)将总浸膏混悬于2-4倍体积份的水中，依次用0.5-2倍水体积量的石油醚萃取2-3次，0. 5-2倍水体积量的乙酸乙酯萃取5-7次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物； (3)取乙酸乙酯萃取物，用等重量的200-300目硅胶拌样，挥干溶剂，另取6-10倍乙酸乙酯重量的200-300目硅胶，用体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯湿法上普通玻璃层析柱，加样，先用3-6倍柱体积的体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，通过...

【专利技术属性】
技术研发人员：师彦平，陈娟，李波，
申请(专利权)人：甘肃奇正藏药有限公司，
类型：发明
国别省市：