【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及的是。
技术介绍
赤潮是指由于海洋浮游生物，包括藻类(主要原因种)、原生动物和细菌的过度繁殖或聚集造成海水变色的现象。近年来，由于人类活动的加剧，海洋日趋富营养化，导致赤潮频发，并已成为一种全球性的生态灾害，给水产养殖业、捕捞业和滨海旅游业造成了巨大损失，同时也给海洋生态环境带来负面影响，甚至直接威胁人类健康。有害赤潮在我国呈现出爆发次数增多、面积扩大、持续时间延长和危害加剧的趋势。如在2004年我国爆发赤潮的次数就达120次，特别是1998— 2000年连续3年我国的黄海、渤海和南海就发生面积达上千平方公里的特大赤潮，为世界罕见，因此，赤潮引起了公众和政府的高度重视。对赤潮原因种 进行正确鉴定是研究、认识和防治其引起的赤潮的前提和基础，同时更应建立简单、快速和特异性强的检测方法，监测赤潮高发区的水环境，对可能爆发的有害赤潮进行预警，特别是指导渔业生产者及时采取应对措施，以减少经济损失。特别是由于赤潮藻多种多样，在全世界的4000多种浮游生物中，能形成赤潮的达260多种。因此，在自然水域中多种赤潮藻常常同时存在，在水环境的日常监测中，就有必要建立一种能同时对自然水样中的多种赤潮藻进行检测的技术。当前，对自然水样中的赤潮藻的检测的传统方法，主要是以其分类学特征为基础，借助光镜和电镜对其细胞形态特征进行观察，并最终对其进行鉴定。形态鉴定法的缺点(I)赤潮藻一般个体较小，识别困难，光镜有时只能鉴定到属，而要进一步确定其具体种类，可能需要进行电镜观察，特别是当要对自然样品中的多种赤潮藻进行鉴定时，其工作繁锁且检测成本较高，难以...
【技术保护点】
一种可同时检测多种赤潮藻的膜分类芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种特异性探针的合成，按下表所示的序列信息合成检测探针：探针信息（2）探针溶液的配制：将合成的探针干粉溶解于0.1M?Tris?HCl(pH7.5)，配制成浓度为10μM的溶液；（3）探针阵列的设计：探针阵列共8条探针，包括6条检测探针、1条阳性探针和1条阴性探针，每条探针各2个重复；（4）尼龙膜处理：在尼龙膜上划小格,每样为5×5mm2小格，共400mm2，将所用的尼龙膜剪下，在尼龙膜第一格的左上角用软铅笔点上点标记；将尼龙膜飘浮于双蒸水表面,让其吸水后沉入水中，再捞出浸泡于20×SSC中5min，再将膜放置于滤纸上晾干；（5）探针点样及膜处理：将配制的探针溶液用毛细吸管或移液器在上述制备的尼龙膜上点样0.5~1μl，自然晾干；将点样后的尼龙膜夹于两层滤纸中间,在80°C烘箱内处理2h。
【技术特征摘要】
1.一种可同时检测多种赤潮藻的膜分类芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(I)种特异性探针的合成，按下表所示的序列信息合成检测探针探针信息2.根据权利要求1所述的可同时检测多种赤潮藻的膜分类芯片的应用方法，其特征在于，包括以下步骤(1)水样的采集及藻细胞的过滤采集自然水样，混匀，用5ml—次性灭菌针头吸取检测样品，将滤膜安置于过滤器上，手推过滤；(2)洗膜及膜的剪切处理用针头吸取去离子水，将含有藻细胞的滤膜洗涤2次，将滤膜从过滤器取下，用灭菌的剪刀将其剪成碎屑，并用镊子将膜碎屑放入1. 5mL离心管中；(3)DNA粗提液的制备用枪头吸取50 - 100 μ I核酸粗提液加入到所述离心管中，IOOOrpm离心30s后，于润旋振荡器上剧烈振荡至少5min, IOOOrpm离心30s后，上清液即为 DNA 粗提液；核酸粗提液2%(m/v) CTAB, O. 5%(ν/ν) β -mercaptoethanol,1. 4MNaCl, 20mM EDTA, IOOmM Tris-Cl ；(4)多重PCR扩增反应用通用引物进行多重PCR反应制备靶核酸，PCR反应体系含 I μ I DNA 粗提液，2. 5 μ 110 XPCR buffer,1. 5μ I MgCl2 (1. 5mM)，I μ I of dNTP (0. 4mM dATP/dTTP/dCTP, 0. 38mM dCTP，0. 02mM DIG-dUTP), I μ I 正向引物 fp :5，-ACCCGCTGAATTTA AGCATA-3 ’ (O. 4mM)和 I μ I 反向引物 rp: 5 ’ -CCTTGGTCCGTCTTTCAAGA-3 ’ (O. 4mM)，16. 8 μ I PCR级水，O. 2μ I (IU)Taq聚合酶；PCR反应条件为:DNA变性，94° C4min ;94。C变性 lmin， 50或55。C退火50s，72。C延伸50s，29个循环；一个末循环，72° C7min ；(5)核酸杂交将膜分类芯片放入...
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