【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学和遗传育种领域，具体涉及基于小麦表达序列标签(expressed sequence tag, EST)序列设计的分子标记，以及这些分子标记在跟踪检测黑麦染色体方面的应用。
技术介绍
小麦的近缘种黑麦cereale L.)具有许多优良的性状，如根系发达、分蘖强、抗旱、耐瘠薄、耐寒、耐盐碱和酸性土壤，尤其是抗多种病害，如小麦白粉病iBlumeriagraminis f. sp. triiici)、条镑病graminis f. sp. triiici )、口十镑病(/*·triticina Eriks.)、杆镑病(/*· graminis Pers. f. sp. triiici )、月星黑糖病(TilletiaControversa Kuhn, TCK)和大麦黄矮病(Barley yellow dwarf virus, BYDV)等。因此，黑麦是对小麦进行遗传改良，拓宽小麦遗传基础，增加小麦栽培品种遗传变异的重要基因源。 黑麦中优异基因向小麦中转移的途径主要是创制一系列小麦/黑麦双二倍体、附加系、代换系和易位系。通过远缘杂交和染色体工程等手段将黑麦染色体导入到小麦背景中，之后，还需要对其进行准确的鉴定，才能有效地加以利用。与细胞学技术和生化标记法相比，分子标记法简单、快速和准确的特点使其广泛地用于检测、跟踪导入小麦背景中的黑麦染色体。然而，目前开发的黑麦染色体的特异标记，多集中在黑麦的IRS染色体上，如SSR 标记 Bmac0213 (参考文献Schneider A and Molnar-Lang Μ. 2008. Polymorph...
【技术保护点】
应用基于小麦EST序列的黑麦染色体特异分子标记对黑麦5R染色体进行鉴定的方法，其特征步骤包括：A、分子标记的选定和制备：合成标记引物“11?MAG1242”，其正向引物序列见SEQ?ID?NO：21，其反向引物序列见SEQ?ID?NO：22；B、标记引物的稀释：将上步合成的标记引物，先用1×TE缓冲液溶解成100mmol?L?1的母液放入?20℃的冰箱中保存，使用前吸取母液用超纯水稀释成10mmol?L?1的工作液待用；其中1×TE缓冲液的配方为，10mmol?L?1?Tris?HCl与1mmol?L?1?EDTA，pH=8.0；C、黑麦染色体的特异标记：C?1、模板DNA的提取：取待测物——小麦与黑麦的远缘杂交后代材料，对照物0——不包含待测黑麦染色体的样品，对照物1——包含待测黑麦染色体的样品，然后利用常规DNA提取方法分别提取三者的DNA；C?2、PCR扩增：以C?1所得DNA样品为模板，利用步骤B所得工作液在PCR扩增仪中分别对待测物、对照物0及对照物1进行扩增；C?3、扩增产物的检测：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测步骤C?2所得的扩增产物，用银染法进行染色，并在凝胶成像仪上照相...
【技术特征摘要】
1.应用基于小麦EST序列的黒麦染色体特异分子标记对黒麦5R染色体进行鉴定的方法，其特征步骤包括 A、分子标记的选定和制备合成标记引物“11-MAG1242”，其正向引物序列见SEQ IDNO :21，其反向引物序列见SEQ ID NO 22 ； B、标记引物的稀释将上步合成的标记引物，先用IXTE缓冲液溶解成IOOmmolじ1的母液放入-20°C的冰箱中保存，使用前吸取母液用超纯水稀释成IOmmolじ1的工作液待用；其中 IXTE 缓冲液的配方为，IOmmol じ1 Tris-HCl 与 Immol じ1 EDTA, pH=8. 0 ； C、黒麦染色体的特异标记 C-1、模板DNA的提取取待测物——小麦与黒麦的远缘杂交后代材料，对照物0——不包含待测黑麦染色体的样品，对照物I——包含待测黑麦染色体的样品，然后利用常规DNA提取方法分别提取三者的DNA ； C-2、PCR扩增以C-1所得DNA样品为模板，利用步骤B所得工作液在PCR扩增仪中分别对待测物、对照物0及对照物I进行扩增； C-3、扩增产物的检测非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测步骤C-2所得的扩增产物，用银染法进行染色，并在凝胶成像仪上照相； C-4、结果比对将待测远缘杂交后代材料的电泳图谱分别与对照物O、对照物I的电泳图谱进行比对，如果待测远缘杂交后代材料和对照物I的电泳图谱均有...
【专利技术属性】
技术研发人员：许红星，尹冬冬，安调过，李立会，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：
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