本发明专利技术涉及一种老年大鼠脑血管内皮细胞培养液，在每百毫升DMEM培养基的基础上，加入如下组分：血浆来源的血清，青霉素-链霉素溶液，L-谷氨酰胺，硫骏庆大霉素，肝素，碱性纤维生子因子，内皮细胞生长补充因子，维生素C，血管内皮生长因子，胰岛素样生长因子-1，内皮生子因子。本发明专利技术所述内皮细胞培养液采用PDS代替了传统培养液中的FBS、小牛血清或马血清，使培养的脑血管内皮细胞纯度增加30％；并且加入了维生素C和嘌呤霉素，这使脑血管内皮细胞生长更快更纯。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种老年大鼠脑血管内皮细胞培养液，属于生物
技术介绍
现有的大鼠脑血管内皮细胞原代培养，取材来源均为新生鼠(〈10天，35 50g)，幼年鼠(〈3weeks，80 IOOg)或2_3月年轻成年鼠(200g 300g)，而且培养的脑血管内皮细胞只能传代一次，不能冻存，利用大鼠脑血管内皮细胞作为实验材料导致时间长、实验成本高的缺点。如Bowman PD, Betz AL, Ar D, Wolinsky JS, Penney JB, Shivers RR,Goldstein GW. 1981. Primary Culture of Capillary Endothelium From Rat Brain.1NVITR0. 17(4),353-362。老年大鼠(19 22月，900g 1200g)脑血管内皮细胞培养成功的先例至今未见报道；现有的取材对象和培养技术不能满足体外建立老年血脑屏障模型，研究老年血脑屏障的生理特性，以及老年神经系统疾病与血脑屏障相关的退行性病变的要求。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供一种老年大鼠脑血管内皮细胞培养液。本专利技术技术方案如下一种老年大鼠脑血管内皮细胞培养液，在每百毫升DMEM培养基的基础上，加入如下组分20ml-30ml血浆来 源的血清，IOOul青霉素-链霉素溶液，1.0-1. 5ml L-谷氨酰胺，50-150 μ I硫骏庆大霉素，1. 0-1. 5ml肝素，150-300 μ I碱性纤维生子因子，1. 0-1. 5ml内皮细胞生长补充因子，200-400 μ I维生素C，100-200 μ I血管内皮生长因子，100-200 μ I胰岛素样生长因子-1，100-200 μ I内皮生子因子。向DMEM培养基中加入上述组分即可。根据本专利技术优选的，所述在每百毫升DMEM培养基的基础上，加入如下组分20ml血浆来源的血清，IOOul青霉素-链霉素溶液，1. 0ml L-谷氨酰胺，100 μ I硫骏庆大霉素，1. Oml肝素，150 μ I碱性纤维生子因子，1. Oml内皮细胞生长补充因子(ECGS)，300 μ I维生素C，150 μ I血管内皮生长因子(VEGF) ,150 μ I胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)，150 μ I内皮生子因子(EGF)。 上述试剂均为本领域常用市售产品。有益效果1、本专利技术所述内皮细胞培养液采用PDS (血浆来源的血清)代替了传统培养液中的FBS (胎牛血清)、小牛血清(BCS)或马血清(HS)，使培养的脑血管内皮细胞纯度增加30%;主要原因是由于FDS中不含TOGF (血小板源性生长因子)，而I3DGF有利于混入脑血管内皮细胞中的平滑肌细胞，纤维细胞和胶质细胞的分裂和增殖；用PDS消除了这一影响。2、本专利技术在内皮细胞培养液中加入了维生素C和嘌呤霉素，这使脑血管内皮细胞生长更快更纯。3、本专利技术在内皮细胞培养液中还加入了血管内皮生长因子，胰岛素样生长因子-1，内皮生子因子，这些因子可使脑血管内皮细胞生长得更快更健康，尤其是对老年大鼠脑血管内皮细胞的生长更为重要。附图说明图1、本专利技术制得的老年大鼠脑血管内皮细胞经原代培养传3代与传统方法制备的老年大鼠脑血管内皮细胞原代培养传3代的存活率的柱状比较图；图2、本专利技术制得的老年大鼠脑血管内皮细胞经冻存复苏后与传统方法制备的老年大鼠脑血管内皮细胞经冻存复苏后的存活率的柱状比较图；图3:本专利技术制得的老年大鼠脑血管内皮细胞与传统方法制备的老年大鼠脑血管内皮细胞细胞纯度的柱状比较图。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术的技术方案做进一步说明，但本专利技术所保护范围不限于此。原料来源19-22月的老年大鼠购自北京维通利华实验动物技术中心；配制老年大鼠脑血管内皮细胞培养基各种试剂的来源 DMEM培养基，购自Gibico公司，商品号11995-065 ；血衆来源的血清(PDS, Plasma-Derived Serum),购自Bioquote公司，商品号BT-214-10 ；青霉素-链霉素溶液，购自sigma公司，商品号p0718 ;L-谷氨酰胺,购自Sigma公司，商品号G7513 ;硫骏庆大霉素，购自sigma公司，商品号G1397 ；肝素,购自Sigma公司，商品号H3149 ;碱性纤维生子因子(bFGF)，购自Sigma公司，商品号F9786 ；内皮细胞生长补充因子(ECGS)，购自Sigma公司，商品号E2759 ;维生素C，购自Sigma公司，商品号C1768 ;血管内皮生长因子(VEGF),购自Lonza公司，商品号cc4176 ；胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)购自Lonza公司，商品号cc4176 ;内皮生子因子(EGF)购自Lonza公司，商品号cc4176 ；嘌呤霉素(Puromycin),购自Sigma公司，商品号p8833。各种酶及其他相关试剂的来源胎牛血清(FBS)购自Invitrogen公司，商品号10437-028 ；胶原酶(Collagenase)购自Invitrogen 公司，商品号 17101 ；DNA 酶(DNase)购自 Sigma-Aldrich 公司，商品号 D4263 ;胰酶(Typsin)购自Sigma-Aldrich 公司，商品号 T3053 ;牛血清白蛋白(BSA)购自Sigma-Aldrich公司，商品号a3059 ;胶原IV (Collagen IV)购自 Sigma-Aldrich 公司，商品号 C5533 :纤连蛋白(Fibronectin)购自Sigma-Aldrich 公司，商品号 F1141 ；Percoll 购自 Sigma-Aldrich 公司，商品号 4937 ；腰椎穿刺针(Lumbarpuncture needle)购自 BD 公司，商品号 405182。实施例1一种老年大鼠脑血管内皮细胞培养液，在每百毫升DMEM培养基的基础上，加入如下组分30ml血浆来源的血清，100 μ I青霉素-链霉素溶液，1. Oml L-谷氨酰胺，100 μ I硫骏庆大霉素，1. 5ml肝素，150 μ I碱性纤维生子因子，1. Oml内皮细胞生长补充因子，400 μ I维生素C，200 μ I血管内皮生长因子，200 μ I胰岛素样生长因子-1，200 μ I内皮生子因子；向DMEM培养基中加入上述组分即可。·实施例2 一种老年大鼠脑血管内皮细胞培养液，在每百毫升DMEM培养基的基础上，加入如下组分20ml血浆来源的血清，100 μ I青霉素-链霉素溶液，1. Oml L-谷氨酰胺，100 μ I硫骏庆大霉素，1. Oml肝素，100 μ I碱性纤维生子因子，1. Oml内皮细胞生长补充因子，200 μ I维生素C，100 μ I血管内皮生长因子，100 μ I胰岛素样生长因子-1，100 μ I内皮生子因子；向DMEM培养基中加入上述组分即可。对比例传统脑血管内皮细胞培养液为在每100ml F12培养基(Ham’ s_F12培养基)的基础上加入如下成分10_20ml小牛血清(BCS), 100 μ I青霉素-链霉素溶。(该配方记载于Bowman PD, etal. Primary Culture of Capill本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种老年大鼠脑血管内皮细胞培养液，其特征在于，在每百毫升DMEM培养基的基础上，加入如下组分：20ml?30ml血浆来源的血清，100ul青霉素?链霉素溶液，1.0?1.5ml?L?谷氨酰胺，50?150μl硫骏庆大霉素，1.0?1.5ml肝素，150?300μl碱性纤维生子因子，1.0?1.5ml内皮细胞生长补充因子，200?400μl维生素C，100?200μl血管内皮生长因子，100?200μl胰岛素样生长因子?1，100?200μl内皮生子因子。
【技术特征摘要】
1.一种老年大鼠脑血管内皮细胞培养液，其特征在于，在每百毫升DMEM培养基的基础上，加入如下组分20ml-30ml血浆来源的血清，IOOul青霉素-链霉素溶液，1. 0-1. 5ml L-谷氨酰胺， 50-150 μ I硫骏庆大霉素，1. 0-1. 5ml肝素，150-300 μ I碱性纤维生子因子，1. 0-1. 5ml内皮细胞生长补充因子，200-400 μ I维生素C，100-200 μ I血管内皮生长因子，100-200 μ I胰岛素样生...
【专利技术属性】
技术研发人员：王丽梅，崔敏，王越，陈哲宇，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：
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