本发明专利技术公开了酵母β-D-葡聚糖的制备方法。该方法包括如下步骤：（1）将酿酒酵母加入至水中得到悬浮液a；向悬浮液a中加入NaCl，然后进行诱导自溶，再经灭酶活后进行离心，得到沉淀a；（2）向沉淀a中加入磷酸盐缓冲液a得到悬浮液b，经抽提后进行离心处理，得到沉淀b；（3）向沉淀b中加入水得到悬浮液c；将悬浮液c进行微射流均质处理，然后经离心得到沉淀c；（4）向所述沉淀c中加入磷酸盐缓冲液b得到悬浮液d；向悬浮液d中加入酶进行酶解，然后进行灭酶活处理；（5）对经步骤（4）处理后的酶解液进行微射流均质处理，然后经离心得到沉淀d；（6）沉淀d依次经脱水和干燥后即得。本发明专利技术可实现工业副产物废啤酒酵母的综合利用，增加工业副产物的利用率和附加价值，具有重大的经济效益和环保意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种酵母β -D-葡聚糖的制备方法。
技术介绍
β-D-葡聚糖是一类广泛存在于细菌、真菌、藻类和植物体内的多糖，它的主要来源之一即为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisisae)。酵母β _D_葡聚糖占酵母细胞壁的50%左右，其分子内多羟基相互作用形成致密的三股螺旋结构，直径一般在2(Γ80 μ m。酵母β-D-葡聚糖具有增强免疫力、抗消炎、抗菌、抗感染、抗病毒、抗癌、降低胆固醇、防辐射、治愈伤口等诸多生理功能，是一种良好的生物效应调节剂[BRMs]。我国有着丰富的酿酒酵母资源，如废啤酒酵母。近年来，我国啤酒工业发展迅猛，年产量已经超过4000万吨，而啤酒废酵母作为啤酒工业主要的副产物之一，年产量也已达4(Γ70万吨，但是目前酿酒酵母的开发利用率极低，不仅浪费资源，还容易污染环境，所以亟需利用现代的科学技术加强对酿酒酵母资源的综合利用，这将具有极大的经济效益和社会效益。现有酿酒酵母β -D-葡聚糖的制备方法主要有酸法、碱法、酸碱法、酶法、超声波法和结合法等方法。虽然制备酿酒酵母β-D-葡聚糖的方法众多，但是大多产业化规模生产受限。目前，我国广泛用于工业化生产酿酒酵母β_葡聚糖的方法主要为碱法，虽然碱法制备出的产品纯度高，但是碱法会破坏β-D-葡聚糖的结构而使得率低，且大量使用碱会污染环境和损害人体健康。采用非强酸、强碱等温和条件制备适合产业化生产高纯度酵母β -D-葡聚糖且的方法尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一`种酵母β -D-葡聚糖的制备方法，该方法采用自溶、高温抽提、高压微射流均质和酶解结合由酿酒酵母制备β -D-葡聚糖，制备条件温和，不采用强酸、强碱和有机溶剂等对环境有害的试剂，且可实现产业化规模生产。本专利技术所提供的一种酵母β -D-葡聚糖的制备方法，包括如下步骤(I)将酿酒酵母加入至水中得到悬浮液，记为悬浮液a ;向所述悬浮液a中加入NaCl，然后进行诱导自溶，再经灭酶活后进行离心，得到沉淀，记为沉淀a ；(2)向所述沉淀a中加入磷酸盐缓冲液a得到悬浮液，记为悬浮液b，经抽提后进行离心处理，得到沉淀，记为沉淀b ;(3)向所述沉淀b中加入水得到悬浮液，记为悬浮液c ;将所述悬浮液c进行微射流均质处理，然后经离心得到沉淀，记为沉淀c ;(4)向所述沉淀c中加入磷酸盐缓冲液b得到悬浮液，记为悬浮液d ；向所述悬浮液d中加入酶进行酶解，然后进行灭酶活处理；(5)对经步骤(4)处理后的酶解液进行微射流均质处理，然后经离心得到沉淀，记为沉淀d ；(6)所述沉淀d依次经脱水和干燥后即得到所述酵母β -D-葡聚糖。上述的制备方法中，步骤(I)中，所述悬浮液a中所述酿酒酵母与所述水的体积份数比可为1:2 20，具体可为1:5 20、1 :5或1:20 ；所述悬浮液a中所述NaCl的质量百分含量可为2% 5%，具体可为3% ；所述诱导自溶的温度可为45°C 60°C，时间可为10 30小时，pH值可为4. 5 5. 5，具体可在PH值为5. O、温度为55°C下诱导自溶24小时；所述灭酶活的温度可为85°C ^lOO0C，具体可为85°C或100°C，时间可为l(T20min，具体可为 10 15min、IOmin 或 15min ；所述方法还包括用水洗涤所述沉淀a的步骤。上述的制备方法中，步骤(2)中，所述悬浮液b中所述沉淀a与所述磷酸盐缓冲液a的质量份数比可为1:3 20，具体可为1:5 20、1 5或1:20 ;所述抽提的温度可为80°C ^120°C，时间可为小时，如在95°C的条件下抽提4小时；所述方法还包括用水洗涤所述沉淀b的步骤；所述磷酸盐缓冲液a的浓度可为O. 02mol/L, pH值可为7. 5。上述的制备方法中，步骤(3)中，所述悬浮液c中所述沉淀b与所述水的质量份数比可为1:3 20，具体可为1:4 20、1 :4或1:20 ；所述微射流均质处理的压力可为7(T250MPa，具体可为200MPa，处理流量可为25 200mL/min，具体可为 200mL/min ； 所述微射流均质处理的处理次数可为f 8次；所述方法还包括用水洗涤所述沉淀c的步骤。上述的制备方法中，步骤(4)中，所述悬浮液d中所述沉淀c与所述磷酸盐缓冲液b的质量份数比可为1:3 20，具体可为1:3或1:20 ;所述磷酸盐缓冲液b的浓度可为O. 02mol/L, pH值可为6. 0^8. O,如 . O。上述的制备方法中，步骤(4)中，所述酶的添加量可为所述悬浮液d的质量的O.1% 2. 5%,具体可为 O. 5% 1· 5%、0· 5% 或1. 5% ；所述酶解的温度可为45 65°C，具体可为50 55°C、50°C或55°C，时间可为O. Γ24小时，具体可为O. 4^0. 5小时、O. 4小时或O. 5小时；所述灭酶活处理的温度可为80°C ^lOO0C，时间可为l(T20min，具体可为80°C的条件下处理15min。上述的制备方法中，步骤(4)中，所述酶可为木瓜蛋白酶、酵母抽提酶、中性蛋白酶和甘露聚糖酶中至少一种；所述酶具体可选择酵母抽提酶和甘露聚糖酶，所述酵母抽提酶和甘露聚糖酶的用量均可为所述悬浮液的质量的O. 5%或1. 5%。上述的制备方法中，步骤(5)中，所述微射流均质处理的压力可为7(T250MPa，具体可为200MPa，处理流量可为15 200mL/min，具体可为200mL/min ；所述微射流均质处理的处理次数可为f 15次；所述方法还包括用水洗涤所述沉淀d的步骤。上述的制备方法中，步骤(6)中，采用质量百分含量可为50°/Γ95%的乙醇水溶液进行脱水，如采用70%的乙醇水溶液；所述干燥的温度可为40°C 65°C，时间可为6(Tl80min，具体可在60°C的条件下进行干燥120min。本专利技术提供的方法制备的酵母β -D-葡聚糖为乳白色粉末，其纯度可达80%，得率可达13%。本专利技术提供的酵母β -D-葡聚糖的制备方法具有如下优点1、制备条件温和，不采用强酸、强碱、有机溶剂等对环境有害的试剂，清洁高效，环保安全；2、采用仪器均有对应适合产业化生产的设备，可完全实现产业化规模生产；3、本专利技术可实现工业副产物废啤酒酵母的综合利用，增加工业副产物的利用率和附加价值，具有重大的经济效益和环保意义。附图说明图1为实施例1中所用原料和各步骤所得产品的扫描电镜照片，其中工业废啤酒酵母、自溶后的酵母细胞、高温抽提后的酵母细胞、步骤(3 )高压微射流处理后的物质、复合酶解后的物质和所制备的酵母β-D-葡聚糖的电镜照片分别为图1 (a)、图1(b)、图1(c)、图1 (d)、图1 (e)和图1 (f)。具体实施例方式下述实施例中所 使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例每步骤的数据处理都是采用DPS软件完成。酵母抽提酶购自广西南宁生物技术有限公司，其商品目录号为YC-3，酶活为5. 5万u/g，其中酶活的测定方法为福林-酚法。甘露聚糖酶复合酶购自北京索莱宝科技有限公司，其商品目录号为110318，酶活为50. O万u/g，其中酶活的测定方法为福林-酚法。实施例1、酵母β -D-葡聚糖本文档来自技高网...
【技术保护点】
酵母β?D?葡聚糖的制备方法，包括如下步骤：（1）将酿酒酵母加入至水中得到悬浮液，记为悬浮液a；向所述悬浮液a中加入NaCl，然后进行诱导自溶，再经灭酶活后进行离心，得到沉淀，记为沉淀a；（2）向所述沉淀a中加入磷酸盐缓冲液a得到悬浮液，记为悬浮液b，经抽提后进行离心处理，得到沉淀，记为沉淀b；（3）向所述沉淀b中加入水得到悬浮液，记为悬浮液c；将所述悬浮液c进行微射流均质处理，然后经离心得到沉淀，记为沉淀c；（4）向所述沉淀c中加入磷酸盐缓冲液b得到悬浮液，记为悬浮液d；向所述悬浮液d中加入酶进行酶解，然后进行灭酶活处理；（5）对经步骤（4）处理后的酶解液进行微射流均质处理，然后经离心得到沉淀，记为沉淀d；（6）所述沉淀d依次经脱水和干燥后即得到所述酵母β?D?葡聚糖。
【技术特征摘要】
1.酵母β-D-葡聚糖的制备方法，包括如下步骤 (1)将酿酒酵母加入至水中得到悬浮液，记为悬浮液a;向所述悬浮液a中加入NaCl，然后进行诱导自溶，再经灭酶活后进行离心，得到沉淀，记为沉淀a; (2)向所述沉淀a中加入磷酸盐缓冲液a得到悬浮液，记为悬浮液b，经抽提后进行离心处理，得到沉淀，记为沉淀b ; (3)向所述沉淀b中加入水得到悬浮液，记为悬浮液c;将所述悬浮液c进行微射流均质处理，然后经离心得到沉淀，记为沉淀c ; (4)向所述沉淀c中加入磷酸盐缓冲液b得到悬浮液，记为悬浮液d;向所述悬浮液d中加入酶进行酶解，然后进行灭酶活处理； (5)对经步骤(4)处理后的酶解液进行微射流均质处理，然后经离心得到沉淀，记为沉淀d ； (6)所述沉淀d依次经脱水和干燥后即得到所述酵母β-D-葡聚糖。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(I)中，所述悬浮液a中所述酿酒酵母与所述水的体积比为1:2 20 ； 所述悬浮液a中所述NaCl的质量百分含量为2°/Γ5% ； 所述诱导自溶的温度为45°C 60°C，时间为2 5小时，pH值为4. 5 5. 5 ； 所述灭酶活的温度为85°C 100°C，时间为l(T20min ； 所述方法还包括用水洗涤所述沉淀a的步骤。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述悬浮液b中所述沉淀a与所述磷酸盐缓冲液a的质量份数比为1:3 20 ； 所述抽提的温度为80°C 120°C，时间为2 小时； 所述方法还包括用水洗涤所述沉淀b的步骤； 所述磷酸盐缓冲液a的浓度为O. 02mol...
【专利技术属性】
技术研发人员：王强，刘红芝，刘丽，胡晖，高洁，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。