包含cFms胞外片段的融合蛋白质及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种包含巨噬细胞刺激因子受体(cFms)胞外片段的融合蛋白质，它由cFms受体的细胞外片段与人免疫球蛋白Fc通过一连接肽相连构成，命名为cFmsECD-Fc；cFms受体的细胞外片段由5个免疫球蛋白(IgG)样胞外结构域中的至少两个构成。构成的融合蛋白质包括YY-001、YY-002、YY-003、YY-004、YY-005、YY-006和YY-007。本发明专利技术提供的融合蛋白质，具有结合白细胞介素-34(IL-34)和结合巨噬细胞刺激因子(M-CSF)，阻断IL-34/M-CSF配体跟共用受体cFms的结合的作用，适合治疗异常情况下由IL-34/M-CSF所引起的疾病。对自身免疫性疾病、炎症性疾病、骨质疏松症和肿瘤具有潜在的治疗前景。用于制备抑制炎症性疾病的药物、抑制破骨细胞引起的骨质疏松症的药物或抑制肿瘤生长和转移的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药工程技术，尤其涉及一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质及其制备方法和应用。
技术介绍
白细胞介素-34(IL_34)和巨噬细胞刺激因子(M-CSF)属于细胞生长因子。虽然在DNA序列上没有相似性，它们却共用受体cFms。虽然彼此间有许多生物学功能相似，但与受体结合后所利用的细胞内信号传递通路不完全相同，并且彼此在组织中表达也有差异。白细胞介素-34和巨噬细胞刺激因子参与单核细胞/巨噬细胞系细胞的生存、增殖、分化和激活。在免疫反应和炎症中，白细胞介素-34和巨噬细胞刺激因子与其受体(cFms)结合激活单核细胞/巨噬细胞，促进细胞毒性功能，细胞吞噬功能，化学趋向性和细胞因子的产生，调节树突状细胞的功能。IL-34/M-CSF/cFms也在骨骼代谢方面发挥重要作用。IL-34/M-CSF与核因子kappa-B受体配体活化子(RANKL) —道参与人破骨细胞前体的增殖、分化和融合，并参与后期骨质的吸收。致炎因子白细胞介素-1 (IL-1)和肿瘤坏死因子a (TNFa)能刺激人成纤维细胞、软骨细胞、类风湿性关节炎(RA)关节滑膜血管内皮细胞生成IL-34和M-CSF。在自身免疫性疾病患者的血浆和关节滑膜液中，IL-34和M-CSF水平明显增高。M-CSF敲除的小鼠(Csflop/op)不能诱发关节炎。在小鼠关节炎模型，应用抗M-CSF抗体或M-CSF抑制剂能减少小鼠关节中巨噬细胞数目及降低IL-1和TNFa水平，抑制破骨细胞形成和激活，减轻骨骼和软骨的破坏，减弱疾病活动性，降低疾病的整体临床评分。 在骨巨细胞瘤，IL-34表达水平增高，参与RANKL诱导的破骨细胞溶骨作用。给小鼠腹腔内注射外源性IL-34，增加单核细胞/巨噬细胞系分化和增殖，并且诱导破骨细胞分化和骨质吸收，引起骨质疏松。用基因工程方法在M-CSF缺失小鼠(Csflop/op)体内表达IL-34，可以恢复动物由于M-CSF缺失所致的骨质、破骨细胞、组织巨噬细胞、生育等方面缺陷。在RA病人，TNF a促使成纤维样滑膜细胞产生IL-34，参与破骨细胞的形成和激活。除了在自身免疫性炎性疾病中扮演重要角色外，IL-34/M-CSF也在肿瘤生长、发育和转移中起重要作用。M-CSF水平与许多恶性肿瘤的预后相关。在许多恶性肿瘤，血中M-CSF水平增高，肿瘤的预后则差。在肿瘤异种移植模型动物上，抑制cFms则能抑制肿瘤转移导致的溶骨性骨质破坏。用细胞毒性疗法(如化学疗法)治疗乳腺癌时，乳腺上皮细胞增加分泌IL-34和M-CSF，通过与受体cFms结合，促进巨噬细胞浸润。在小鼠乳癌模型，联合细胞毒性疗法和cFms受体阻段剂或酪氨酸激酶抑制剂，减少肿瘤相关巨噬细胞(TAM)数量，延长动物的生存率，减慢原发肿瘤的发展和降低肺脏转移。在原发癌组织中，肿瘤相关巨噬细胞数量减少可增加细胞毒性T细胞的数量。而细胞毒性T细胞能增强癌细胞对化疗的敏感性，加强癌症治疗效果。cFms受体含有554个氨基酸，分为三个主要区域(参见图1) :5个IgG样胞外结构域(分别记作Dl、D2、D3、D4、D5)、一个跨膜区域和一个络氨酸激酶的胞内结构域(UniProtKB/Swiss-Prot entry P07333)。在5个IgG样胞外结构域中，结构域D2和结构域D3与IL-34/M-CSF的结合和功能是必需的，结构域Dl与IL-34和M-CSF的稳定结合是必要的。在一定程度上，结构域D4和结构域D5能提高IL-34与cFms的结合及随后引起的细胞内信号传递。
技术实现思路
本专利技术的目的，就是为了提供一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质。为了达到上述目的，本专利技术采用了以下技术方案一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质，由cFms受体的细胞外片段与人免疫球蛋白Fe通过一连接肽相连构成,命名为cFmsE⑶-Fe ;所述cFms受体的细胞外片段由5个IgG样胞外结构域中的至少两个构成,5个IgG样胞外结构域分别记作Dl、D2、D3、D4和D5 ;所述免疫球蛋白Fe来自于IgGl，其编码氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示；所述连接肽的编码氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示。上述一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质,其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D1-D2-D3，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 5所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 12所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-001，其编码核苷酸序列如SEQ IDNO. 19所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 26所示。上述一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D2-D3-D4，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 6所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 13所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-002，其编码核苷酸序列如SEQ IDNO. 20所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 27所示。 上述一种包含cFm s胞外片段的融合蛋白质，其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D3-D4，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 7所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQID NO. 14所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-003，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 21所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 28所示。上述一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D3-D4-D5，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 8所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 15所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-004，其编码核苷酸序列如SEQ IDNO. 22所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 29所示。上述一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D1-D2-D3-D4，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 9所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 16所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-005，其编码核苷酸序列如SEQ IDNO. 23所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 30所示。上述一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D2-D3-D4-D5，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 10所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 17所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-006，其编码核苷酸序列如SEQID NO. 24所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 31所示。上述一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质,其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D1-D3-D5，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 11所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 18所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-007，其编码核苷酸序列如S本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于：由cFms受体的细胞外片段与人免疫球蛋白Fc通过一连接肽相连构成，命名为cFmsECD?Fc；所述cFms受体的细胞外片段由5个IgG样胞外结构域中的至少两个构成，5个IgG样胞外结构域分别记作D1、D2、D3、D4和D5；所述免疫球蛋白Fc来自于IgG1，其编码氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，其编码核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；所述连接肽的编码氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，其编码核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。

【技术特征摘要】
1.一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质,其特征在于由cFms受体的细胞外片段与人免疫球蛋白Fe通过一连接肽相连构成，命名为cFmsE⑶-Fe ;所述cFms受体的细胞外片段由5个IgG样胞外结构域中的至少两个构成，5个IgG样胞外结构域分别记作D1、D2、D3、D4和D5;所述免疫球蛋白Fe来自于IgGl，其编码氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示；所述连接肽的编码氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示。2.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片段为D1-D2-D3，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 5所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 12所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-001，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 19所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 26所示。3.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片段为D2-D3-D4，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 6所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 13所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-002，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 20所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 27所示。4.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片段为D3-D4，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 7所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 14所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-003，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 21所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 28所示。5.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片段为D3-D4-D5，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 8所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 15所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-004，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 22所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 29所示。6.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片段为D1-D2-D3-D4，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 9所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 16所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-005，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 23所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 30所示。7.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷勇，郑学初，
申请(专利权)人：雷克塞德苏州生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：