一种防治自然流产的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术属于医药领域，公开了一种防治自然流产的单克隆抗体及其应用。该单克隆抗体为gC1qR单克隆抗体。该单克隆抗体具有抗自然流产功能，可用于制备防治自然流产药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药领域，涉及一种防治自然流产的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
自然流产是妊娠早期常见的并发症，发生率约占全部妊娠的15-20%。近年来，自然流产率在全球呈现了逐年上升的变化趋势，引起国内外学者的深切关注。由于我国的人口基数大，其中育龄夫妇的数量尤为可观，以2007年的统计数据为例，育龄妇女的人数约为3.61亿，而在妊娠早期发生自然流产者远远超过100万。因此深入研究女性自然流产发生的机制开始成为预防医学领域疾病早期防治的一个热点研究内容。近年来研究显示细胞凋亡在胚胎着床、胎盘的发育老化以及胎儿的生长发育中具有重要作用。各种原因所致的自然流产最终是以细胞凋亡实现的。目前，细胞凋亡在妊娠中的作用日益受到重视，越来越多的研究表明正常妊娠过程中胎盘、蜕膜的凋亡和增殖处于一种平衡状态，一旦发生异常凋亡，平衡状态被打破就可能导致病理妊娠，引发自然流产的发生。`gClqR是补体Clq受体，由于日本学者发现gClqR可介导单核细胞的凋亡，且能够锚定在线粒体上影响单核细胞的功能，在多种细胞凋亡中发挥关键作用。Clq-gClqR复合体在哺乳动物细胞的正常通讯中起抑制作用的观点是近年来提出的新理论。近年来，单克隆抗体在疾病的诊断和治疗预防方面特异性强，灵敏度高，显示了非常明显的优越特性。但是，目前尚没有gClqR单克隆抗体对自然流产有何种影响的报道，也没有利用gClqR单克隆抗体制备防治自然流产的药物上市。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述技术问题提供一种防治自然流产的单克隆抗体。本专利技术还有一个目的是提供上述单克隆抗体在制备防治自然流产的药物中的应用。本专利技术的目的是通过下列技术措施实现的—种抗自然流产的单克隆抗体,该单克隆抗体为gClqR单克隆抗体。优选该gClqR单克隆抗体为美国Millipore公司货号为AB2991的产品。gClqR单克隆抗体在制备防治自然流产药物中的应用。gClqR单克隆抗体在制备抑制滋养层细胞凋亡的药物中的应用。本专利技术证明了 gClqR单克隆抗体具有防治自然流产的功能，可用于制备防治自然流产的药物。以下是更为详细的说明。在我们实验结果中显示自然流产患者其蜕膜组织中滋养层细胞凋亡明显，且电镜下有凋亡小体形成，而细胞膜、细胞器却相对完整，呈现细胞凋亡的典型特征(见图1、2)。我们采用Western blot技术对自然流产者蜕膜组织中gClqR蛋白表达进行检测，结果发现其gClqR蛋白表达水平显著上调(见图3)。据此，我们提出科学问题自然流产的机制由Clq-gClqR复合体致线粒体功能损伤的机制介导，gClqR基因在自然流产患者体内表达显著上调可通过线粒体功能障碍的机制，导致滋养层细胞凋亡，最终引发流产。应用gClqR 单克隆抗体(gClqR monoclonal antibody, gClqR mAb)封闭 gClqR,使 Clq 和 gClqR 的结合受阻，从而抑制了 Clq-gClqR复合体致线粒体功能损伤，减少了滋养层细胞的凋亡，有效降低自然流产的发生率。我们以体外培养的胎盘滋养层细胞株HTR-8/SVneo为研究工具，探索gClqR mAb对滋养层细胞凋亡的影响。结果发现①gClqR mAb干预滋养层细胞后，滋养层细胞凋亡显著减少(见图4)-’②GFP-gClqR vector干预滋养层细胞后，电子显微镜下观察发现细胞中线粒体数量减少，嵴断裂、减少、消失，部分线粒体肿胀，甚至呈空泡状；荧光定量PCR检测发现细胞中线粒体拷贝数显著减少，突光探针H2DCFDA (2’，7’ -Dichlorofluoresceindiacetate, 2'，7’ - 二氯荧光黄双乙酸盐)检测发现细胞内活性氧ROS含量显著升高(见图5A-5C)，而gClqR mAb组，上述滋养层细胞线粒体形态、数量、功能无显著改变。分析上述结果可见①GFP-gClqR vector干预下发现滋养层细胞株HTR-8/SVneo中gClqR蛋白表达量明显上调的同时也获得了线粒体形态、数量、功能变化的实验结果；②gClqR单克隆抗体干预不·但抑制了滋养层细胞株HTR-8/SVneo的凋亡，而且线粒体功能受损显著减少，进一步为gClqR单克隆抗体防治自然流产发生的机制提供了支持依据。因此我们得出结论gClqR引发自然流产，主要由Clq-gClqR复合体致线粒体功能损伤的机制介导，通过线粒体功能障碍的机制，导致滋养层细胞凋亡，最终引发自然流产。故由gClqR蛋白引发自然流产防治的环节可立于线粒体功能改善的层面,而且也可在gClqR作为干预靶标的层面。本专利技术有益效果本专利技术研究证明了 gClqR单克隆抗体具有防治自然流产的作用，可用于制备防治自然流产的药物，为防治自然流产提供了更多选择。附图说明图1为流产患者蜕膜组织滋养层细胞凋亡情况。图2为流产患者蜕膜组织滋养层细胞凋亡小体。图3为蜕膜组织中gClqR蛋白的表达水平。图1、2、3中A :人工流产蜕膜组织，B 自然流产蜕膜组织。图4滋养层细胞HTR-8/SVneo的凋亡情况。图5A滋养层细胞HTR-8/SVneo的线粒体形态。图5B滋养层细胞HTR-8/SVneo中线粒体拷贝数。图5C滋养层细胞HTR-8/SVneo内活性氧ROS的影响。图 4、5A、5B、5C 中 A:GFP_gClqR vector 组，B gClqR mAb 组。具体实施方法以下通过实施例对本专利技术作进一步的阐述。实施例1一、实验材料与方法(一)材料1、研究对象收集2008年I月2010年12月在南京医科大学附属南京市妇幼保健院行自然流产患者50例，以频数匹配法选择正常妊娠行人工流产50例作为对照，且患者和其家属知情同意。手术取材后立即置于_80°C冻存备用。2、细胞株滋养层细胞株HTR-8/SVneo购自山东大学齐鲁医院中心实验室。3、仪器与试剂MEM (minimal essential medium,最低必须培养基)培养基购自Gibco公司。小牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司。青霉素、链霉素来源于上海生工生物技术公司。抗小鼠二抗及ECL化学发光试剂盒购自北京达科为生物技术有限公司(货号610_4312)。Annexin V-FITC (fluorescein isothiocyanate,异硫氰酸突光素)/PI (propidiu-m iodide,碘化丙碇)流式细胞仪检测试剂盒购自Invitrogen公司。小鼠抗大鼠 gClqR单克隆抗体(gClqR monoclonal antibody, gClqR mAb)购自 Millipore 公司(货号AB2991)，小鼠抗actin 单克隆抗体，购自Millipore公司(货号AB3265)。胰蛋白酶、DMSO (二甲基亚讽)购自美国Sigma公司。Trizol来源于Invitrogen公司。Oligo (dT) 15、RNA酶抑制剂、逆转录酶M_MLV、Taq DNA酶及dNTPs购自美国Promega公司。DEPC(二乙基焦碳酸乙酯)来源于上海森雄科技实业有限公司提供。Western blot试剂高分子量蛋白质Marker (KD)购于武汉博士德公司。硝酸纤维素膜来源于上海博亚生物技术有限公司。乙腈(分析纯)，氯化钠(分析纯)，丙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗自然流产的单克隆抗体，其特征在于该单克隆抗体为gC1qR单克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种抗自然流产的单克隆抗体，其特征在于该单克隆抗体为gClqR单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于该gClqR单克隆抗体为美国Mill...

【专利技术属性】
技术研发人员：高玲娟，顾平清，宫辉，吕康泰，李秀玲，
申请(专利权)人：南京市妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：