一种可用作免疫佐剂的改良型鞭毛蛋白及其制备与应用制造技术

本发明专利技术提供了一种可用作免疫佐剂的改良型鞭毛蛋白及其制备与应用。本发明专利技术的鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白突变体，具有鞭毛蛋白的生物活性，与野生型鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白相比，含有I411A突变。本发明专利技术的鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白突变体可使TLR5介导的天然免疫应答减弱，且具有显著的佐剂活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及一种可用作免疫佐剂的改良型鞭毛蛋白及其制备与应用。
技术介绍
鞭毛蛋白含有494个氨基酸，具有4个球形结构域(DO，Dl, D2和D3)，其中DO和Dl结构域高度保守。来自各类细菌的鞭毛蛋白的氨基酸序列可在NCBI GenBank数据库中获得。其中，已知来自鼠伤寒沙门菌I (S. Typhimurium I)、幽门螺杆菌(H. Pylori)、霍乱弧菌(V. Cholera)、粘质沙雷氏菌(S. marcesens)、福氏痢疾杆菌(S. flexneri)、梅毒螺旋体(T. Pallidum)、嗜肺军团菌(L. pneumophila)、伯氏疏螺旋体(B. burgdorferei)、艰难梭状芽孢杆菌(C. difficile)、苜猜根瘤菌(R. meliloti)、根癌农杆菌(A. tumefaciens)、羽扇豆根瘤菌(R.1upini)、卡氏巴尔通体(B. clarridgeiae)、奇异变形杆菌(P. Mirabilis)、枯草杆菌(B. subtilus)、单核细胞增生李斯特菌(L. monocytogenes)、铜绿假单胞菌(P. aeruginosa)和大肠杆菌(E. coli)的鞭毛蛋白序列。鞭毛蛋白具有佐剂效应，但 其产生佐剂效应的机制还不清楚。研究表明，鞭毛蛋白通过与宿主细胞的TLR5受体结合，刺激细胞产生大量的促炎性细胞因子从而激发佐剂效应。然而最近的研究发现，鞭毛蛋白与卵清白蛋白(OVA)混合免疫TLRSm小鼠后，其诱导OVA蛋白体液免疫应答的佐剂能力没有发生变化，从而推断TLR5介导的天然应答不是鞭毛蛋白产生佐剂效应的必需条件。另外，鞭毛蛋白作用于TLR5受体后，激发产生的强烈天然免疫应答会导致系统性不良反应，如脓毒症等。鞭毛蛋白对机体的副作用制约了其作为佐剂的应用前景。因此，亟需研究开发出一种改良型鞭毛蛋白，该蛋白既能保留野生型鞭毛蛋白免疫佐剂的特点，同时又能降低其激发的天然免疫应答，减轻其对机体的副作用，这对于新型疫苗研发具有现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种改良型鞭毛蛋白及其制备与应用，该蛋白既能保留野生型鞭毛蛋白免疫佐剂的特点，同时又能降低其激发的天然免疫应答，减轻其对机体的副作用，使鞭毛蛋白作为佐剂具有高度的安全性。本专利技术一方面提供了一种鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白突变体，具有鞭毛蛋白的生物活性，与野生型鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白相比，含有141IA突变(鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白f IiC基因第411位上的异亮氨酸(1411)定点突变成丙氨酸(A))。进一步的，所述鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白突变体具有免疫佐剂活性。相比野生型鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白，对Toll样受体5 (Toll-like5, TLR5)的刺激活性减弱。进一步的，本专利技术所述鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO:本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白突变体，具有鞭毛蛋白的生物活性，与野生型鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白相比，含有I411A突变。

【技术特征摘要】
1.一种鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白突变体，具有鞭毛蛋白的生物活性，与野生型鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白相比，含有I411A突变。2.如权利要求1所述鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白突变体，其特征在于，相比野生型鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白，所述鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白突变体对Toll样受体5的刺激活性减弱。3.如权利要求1所述鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白突变体，其特征在于，所述鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO:5。4.一种多核苷酸，其编码权利要求1-3任一权利要求所述鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白突变体。5.如权利要求4所述多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸序列为SEQID N0:6。6.—种表达载体,其含有权利要求4或5所述多核苷酸。7.—种宿主细胞，其被权利要求6所述表达载体所转化。8.如权利要求7所述宿主细胞，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦新安，潘志明，张磊，孙林，杨芸，康喜龙，王静，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：