共偶联以控制免疫测定中试剂的反应性制造技术

本发明专利技术提供用于控制免疫测定反应性的方法和组合物。在一个实施方案中，提供一种用于制备免疫测定用基质的方法，其中将含有试剂和中性材料的组合物在适于将所述试剂和所述中性材料偶联至基质的条件下施加至所述基质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般性地涉及分子生物学领域。更具体地，其涉及与免疫测定有关的方法和组合物。在一些特定的实施方案中，本专利技术涉及共偶联试剂以控制免疫测定中的反应性。B.
技术介绍
期望的是，在免疫测定中产生的信号(例如，荧光、化学发光、放射性)的量落在检测装置的可用范围内和/或产生免疫测定的可接受剂量响应曲线。在分析一种分析物的单重(singl印lex)测定中，通常通过调节测定中分析物的量来调节产生的信号的量。然而，在多重(multiplex)测定中，因为为了将一种分析物的可检测信号升高至高于最小可用水平而增加其量可能导致另一种分析物的可检测信号升高至高于最大可用水平，所以可能无法适当地调节所有分析物的量。同样，为了将分析物的可检测水平降低至低于最大可用水平或实现可接受的剂量响应曲线而降低分析物的量可能导致另一种分析物的可检测信号降低至低于最小可用水平。在多重测定中控制免疫测定反应性的方法一般集中在控制用于测定之后续步骤的试剂上。这一般是已连接有生物素基团或另一种功能性基团的“检测”抗体。所述功能性基团可以是酶，例如常用于ELISA和其他单重测定的辣根过氧化物(Horse RadishPeroxide)或碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)。生物素或R-藻红蛋白是其他常用的功能性基团的实例。然而，控制用于测定之后续步骤的试剂在分析物浓度很高时具有提供不可靠信息的风险。在同一生物样品中的不同分析物的浓度可相差多于1，000倍。例如，TSH—般是pg/ml，而LH和FSH是ng/ml。如另一个实例，当对23三体(Trisomy23)、唐氏综合征(Down’ s Syndrome)进行测试时，测量hCG、E3和AFP。hCG以mg/mL计，E3以ng/mL计以及AFP以pg/mL计。这在浓度上是8个log的差异并且构成多重挑战。在一些情况下，对于不同样品之间的同一分析物可以有多于1，000倍的差异(例如，hCG—般是ng/ml，但是在怀孕期间增加至mg/ml)。因此，在最高浓度的分析物存在下和在包含显著不同浓度之分析物的样品中，需要可提供受控的反应性和平衡的测量值的方法和组合物。
技术实现思路
在一个实施方案中，本专利技术提供了制备用于免疫测定之基质的方法，其包括(a)获得包含试剂和中性材料的组合物；和(b)将所述组合物在适于将所述试剂和所述中性材料偶联或包被至基质的条件下施加至所述基质。在另一个实施方案中，本专利技术提供偶联或包被有试剂和中性材料的基质。在本专利技术的某些方面中，将所述试剂和所述中性材料共价偶联至所述基质。在又一个实施方案中，本专利技术提供包含基质、试剂和中性材料的试剂盒。所述基质、试剂和中性材料可分开包装在所述试剂盒中，或所述试剂和中性材料可在组合物中一起提供，或者所述试剂和中性材料可以偶联或包被在所述基底上提供。在一个实施方案中，本专利技术提供了在多重免疫测定中控制试剂之反应性的方法，其包括(a)将高反应性试剂与中性材料合并在组合物中；和(b)将所述组合物在适于将所述高反应性试剂和所述中性材料偶联至基质的条件下施加于所述基质。在某些实施方案中，所述方法还包括确认与所述中性材料共偶联至所述基质的高反应性试剂之测定信号在所述多重免疫测定的可用信号范围内。在另一个实施方案中，本专利技术提供了控制多重免疫测定中试剂之反应性的方法，其包括(a)鉴定多重免疫测定中具有高反应性的试剂，所述试剂产生高于所述多重免疫测定之最大可用信号的测定信号；(b)将所述高反应性试剂与中性材料合并在组合物中；(C)将所述组合物在适于将所述高反应性试剂和所述中性材料偶联至基质的条件下施加至所述基质；以及(d)确认与所述中性材料共偶联至所述基质的高反应性试剂之测定信号在所述多重免疫测定的可用信号范围内。在本专利技术的某些方面中，所述方法包括控制在所述多重免疫测定中具有高反应性的两种或更多种试剂的反应性。在一些实施方案中，所述多重测定包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、50、100、200、500、1000、2000种或更多种试剂，其中这些试剂的一个子集在所述多重免疫测定中具有高反应性。在一些实施方案中，所述多重测定包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、50、100、200、500、1000、2000、5000种(或其中可衍生的任何范围)试剂，其中这些试剂的一个子集在所述多重免疫测定中具有高反应性。在本专利技术的某些方面中，所述方法包括控制在所述多种免疫测定中具有高反应性的3、4、5、6、7、8、9、10、20、50、100种或更多种试剂的反应性。在一些方面中，所述方法包括控制在多重免疫测定中具有高反应性的2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、50、100、200、500、1000、2000、5000 种(或其中可衍生的任何范围)试剂的反应性。在本领域中已知多种检测技术并且其可用于产生所述测定信号。在一些实施方案中，所述测定信号是化学发光信号或荧光信号。在另一些实施方案中，所述信号是色度信号或放射性信号。可用的范围指对于误差在指定的限度内使得结果或信号可靠的值的集口 ο本文中使用的词组“多重”或语法上等同的表述指平行检测、分析或扩增每个样品中的多于一种感兴趣的目标分析物。分析多种不同的分析物(多重)可同时进行。检测在多种平台上进行，所述平台包括但不限于孔板(well plate)和珠阵列(bead array)。所述基质可以是任何可用于免疫检测方法的基质。此类基质的非限制性实例包括聚苯乙烯微量滴定板中的孔或者微球。所述基质可例如由以下物质制得硝酸纤维素、尼龙膜、玻璃、活化石英、活化玻璃、二氧化硅、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜、聚苯乙烯基质、聚丙烯酰胺基基质、其他聚合物、共聚物或交联聚合物(例如聚(氯乙烯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(二甲基硅氧烷)、光聚合物(其包含能够与目标分子形成共价连接的光反应性物质例如氮烯、碳烯和羰自由基))。在平面固体支持物上固定的分子通常通过它们在所述载体上的空间位置来鉴定。在非平面固体载体(例如微球(“珠(bead)”))上固定的分子常常由所述载体的一些编码形式所鉴定，如下述。可对珠进行编码，使得珠的一个亚群可与另一亚群区分开。可通过多种技术进行编码。例如，所述珠可用具有不同发射光谱和/或不同信号强度的荧光染料进行荧光标记。在某些实施方案中，所述珠是Luminex MagPlex 微球、Luminex xTAG 微球、Luminex SeroMap 微球或Luminex MicroPlex⑩微球。另一些编码技术使用全息编码(holographiccoded)或条形码编码(barcoded)珠。亚群体中珠的尺寸也可用于将一个亚群体与另一个区分开。修饰珠的另一种方法是将磁性响应物质(例如Fe3O4)并入结构中。顺磁性和超顺磁性微球在无磁场时磁性可忽略，但是施加磁场诱导微球中磁畴的排列，从而导致微球被吸引至磁源。将荧光染料、珠尺寸和/或磁性响应物质合并到珠中可进一步增加可创建的珠之不同亚群体的数目。试剂指用于测试其他物质或与其他物质反应的物质。与试剂反应的物质可被称为分析物。分析物可以是待检测和/或定量的任何物质。分析物可存在于样品中，例如体液(包括但不限于全血、血清、唾液、尿液、精液)或环本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.23 US 61/367,2811.一种用于制备用于免疫测定之基质的方法，其包括 (a)获得包含试剂和中性材料的组合物； (b)将所述组合物在适于将所述试剂和所述中性材料偶联至基质的条件下施加至所述基质。2.权利要求1的方法，其中所述试剂是抗体或抗原。3.权利要求1的方法，其中所述中性材料是非相关物种抗体或血清白蛋白。4.权利要求1的方法，其中所述基质是颗粒或者孔表面。5.权利要求4的方法，其中所述颗粒是微球。6.权利要求1的方法，其中所述组合物中试剂与中性材料的比是约1: 120至6 :1。7.权利要求1的方法，其中将所述试剂和所述中性材料共价偶联至所述基质。8.—种微球，其具有共价偶联至其表面的试剂和中性材料。9.权利要求8的微球，其中所述试剂是抗体或抗原。10.权利要求8的微球，其中所述中性材料是非相关物种抗体或血清白蛋白。11.权利要求8的微球，其中试剂与中性材料的比是约1: 120至6 :1。12.权利要求8的微球，其中所述微球是磁性响应的。13.权利要求8的微球,其中所述微球包含一种或更多种突光染料。14.一种包含孔的板，所述板具有共价偶联至所述孔之表面的试剂和中性材料。15.权利要求14的孔，其中所述试剂是抗体或抗原。16.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：哈罗德·贝克，米夏埃拉·奥夫梅耶，谢里·邓巴，
申请(专利权)人：卢米耐克斯公司，
类型：
国别省市：