凝集素及其用途制造技术

本发明专利技术涉及化合物、其发现方法及其治疗和研究用途。具体地，本发明专利技术提供了从香蕉分离的抗病毒和抗微生物的凝集素化合物(BanLec)。这些化合物具有低的促有丝分裂性和促炎活性同时保持抗HIV-1活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及化合物、其发现方法及其治疗和研究用途。具体地，本专利技术提供了抗病毒和抗微生物的凝集素化合物及其使用方法。
技术介绍
获得性免疫缺陷综合征或后天免疫缺陷综合征(AIDS或Aids)是由在人中的人免疫缺陷病毒(HIV)(参见例如，Marx，J. L. (1982) Science 217(4560) :618-621 ;通过引用整体并入本文)以及在其他物种中的类似病毒(SIV、FIV、等)引起的对免疫系统的特定损害所导致的症状和感染的总称。病症晚期使个体容易发生机会感染和肿瘤。尽管存在延缓病毒进展的针对AIDS和HIV的治疗，但是已知没有治愈。HIV通过粘膜或血流与含有HIV的体液直接接触而传播，所述体液例如血液、精液、阴道液、尿道球腺液和乳汁。这种传播可以通过肛交、阴道性交或口交、输血、污染的注射针头、怀孕、分娩或母乳喂养期间的母婴交换或者与上述体液之一的其他接触的形式发生。在没有抗逆转录病毒疗法时，从HIV感染发展成AIDS的中值时间是9至10年，并且发生AIDS之后的中值存活时间只有9. 2个月(参见例如，Morgan等，(2002) AIDS 16(4)597-632 ;通过引用整体并入本文)。高度活性抗逆转录病毒疗法的使用延长了发展成AIDS的中值时间和中值存活时间。目前没有针对HIV或AIDS的疫苗或治愈疗法。唯一已知的预防方法是基于避免与病毒接触，或者如果做不到这点，则在非常明显的接触之后立即进行抗逆转录病毒治疗，称为接触后预防(PEP)。PEP具有非常苛刻的四周剂量方案。它还具有非常令人厌恶的副作用，包括腹泻、不适、恶心和疲劳。需要用于治疗HIV和AIDS的改良方法。专利技术概述本专利技术涉及化合物、其发现方法及其治疗和研究用途。具体地，本专利技术提供了抗病毒和抗微生物的凝集素化合物及其使用方法。在一些实施方案中，本专利技术提供了具有降低的或低的促有丝分裂性的抗病毒凝集素化合物及其使用方法。在一些实施方案中，本专利技术提供了包含BanLec多肽(例如，变体BanLec多肽)(例如，以分离的或纯化的形式)的组合物，其中所述BanLec多肽表现出抗病毒活性但是表现出相对于野生型BanLec降低的促有丝分裂活性(例如，相对于野生型BanLec或其他凝集素，促有丝分裂活性降低至少10%、至少20%、至少50%、至少75%、至少85%、至少90%、至少95%等)。在一些实施方案中，例如，BanLec多肽是SEQ ID NO:1-3所描述的多肽，或者由SEQ ID NO :4-6所描述的核酸或其他适合的核酸序列编码。在一些实施方案中，BanLec多肽在位置84包含从野生型的突变。在一些实施方案中，例如，组氨酸84被突变为苏氨酸(H84T)、丝氨酸(H84S)或甲硫氨酸(H84M)。在一些实施方案中，例如，BanLec多肽是SEQ ID NO 7所描述的多肽，或者由SEQ ID NO 8所描述的核酸或其他适合的核酸序列编码。在一些实施方案中，BanLec多肽在位置83包含从野生型的突变。在一些实施方案中，例如，酪氨酸83被突变为缬氨酸(Y83V)。在一些实施方案中，BanLec多肽包含Y83V突变或H84T、H84S和H84M的一个或多个。在一些实施方案中，本专利技术提供了抗病毒、抗微生物和/或抗菌的组合物。在一些实施方案中，本文提供的组合物是全身的、区域的、局部的等(例如，局部抗病毒组合物)。本专利技术的实施方案提供了包含编码BanLec多肽的核酸的表达载体(例如，包含纯化标签)以及包含所述表达载体的宿主细胞。在一些实施方案中，本专利技术提供了预防病毒(例如，HIV)、细菌(例如，幽门螺杆菌(helobacter pilori))和/或寄生虫(例如，婴儿利什曼原虫(Leshmania infantum))感染的方法,包括使疑似包含病毒、细菌或寄生虫的表面与前述组合物接触。在一些实施方案中，本专利技术提供了治疗被诊断有病毒感染(例如，HIV)、细菌感染(例如，幽门螺杆菌)和/或寄生虫感染(例如，婴儿利什曼原虫)的 受治疗者的方法，包括向受治疗者施用前述组合物。在一些实施方案中，本专利技术提供了治疗或预防病毒感染的组合物和方法，所述病毒包括但不限于HIV、HCV、登革病毒、马堡病毒(Marburg virus)、依波拉病毒(Ebola virus)、西尼罗河病毒(West Nile virus)、巨细胞病毒、疱疹病毒(例如，8型)、冠状病毒(例如，SARS)和麻疹病毒。在一些实施方案中，本专利技术提供了治疗或预防细菌感染的组合物和方法，所述细菌包括但不限于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、牛分支杆菌(Mycobacteriumbovis)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)(例如，血清型 3 和14)、幽门螺杆菌和乳酸杆菌(Lactobacillus spp)。在一些实施方案中，本专利技术提供了治疗或预防寄生虫感染的组合物和方法，所述寄生虫包括但不限于婴儿利什曼原虫、皮氏利什曼原虫(Leshmania pifanoi)、墨西哥利什曼原虫(Leshmania mexicana)和曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)寄生虫。在一些实施方案中，本专利技术提供了治疗或预防真菌感染的组合物和方法，所述真菌包括但不限于烟曲霉(Aspergillus fumigatus)和白色念珠菌(Candida albicans)。在一些实施方案中,本专利技术提供了治疗或预防其表面具有甘露糖的任何微生物的感染的组合物和方法。在一些实施方案中,本专利技术的组合物(例如，BanLec和/或BanLec突变体)与微生物表面上的甘露结合糖。在一些实施方案中，本专利技术提供了治疗或预防与DC-SIGN受体相互作用的微生物的感染的组合物和方法。附图简述附图说明图1显示了 H84T的促有丝分裂活性。图2显示了突变体H84S、H84M、H84Y和H84A的促有丝分裂活性。图3显示了天然BanLec和重组BanLec的抗HIV-1活性的比较。在HIV-1分离株YU2 (A)或90CF402(B)感染之前30分钟，向TZM_bl细胞添加从香蕉果实分离的天然BanLec或从大肠杆菌分离的重组BanLec。病毒孵育后48小时，通过测量荧光素酶活性来定量感染。(C)BanLec与其他凝集素的促有丝分裂活性比较。图4显示H84T的性质。(A)H84T与rBanLec的促有丝分裂活性比较。(B)如通过流式细胞术测量的，在BanLec或H84T BanLec存在下⑶4T细胞上活化标记⑶69的诱导。(C)通过Banlec和H84TBanlec诱导细胞因子/趋化因子。(D)H84T保留抗HIV-1活性。图5显示重组BanLec的表达。重组BanLec的纯化的考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE凝胶。凝胶泳道如下加样1 :分子量标准，2 :含有重组BanLec的裂解物，3 :柱负载穿流，4 :25mM咪唑洗涤，5 :第一次250mM咪唑洗脱，6 :第二次250mM咪唑洗脱，7 :香蕉来源的BanLec,8 :用于细胞裂解步骤的溶菌酶蛋白。图6显示BanLec抑制含有共有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.04.14 US 61/324,1071.一种包含变体BanLec多肽的组合物，其中所述变体BanLec多肽表现出抗病毒或抗微生物活性，并且其中所述BanLec多肽表现出相对于野生型BanLec多肽降低的促有丝分裂活性。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述变体BanLec多肽选自由SEQID N0:l_3组成的组。3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述变体BanLec多肽由选自由SEQID NO :4_6组成的组的核酸编码。4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述变体BanLec多肽具有SEQID NO 7的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述变体BanLec多肽由SEQID NO :8的核酸编码。6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物是抗病毒、抗微生物、抗真菌和/或抗寄生虫的药物组合物。7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物治疗或预防呈递表面甘露糖的微生物的...

【专利技术属性】
技术研发人员：D马科维奇，M斯万森，I戈德斯坦，H温特，
申请(专利权)人：密执安大学评议会，
类型：
国别省市：