本发明专利技术涉及基因工程技术领域，是一种双峰驼H-FABP蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法。本发明专利技术参考其它物种H-FABP基因序列，克隆测序获得双峰驼H-FABP基因的cDNA序列，并对不同物种H-FABP基因的CDS序列进行同源性比较，旨在了解和验证H-FABP基因的结构特点，为今后研究H-FABP基因与双峰驼脂类代谢的关系提供基础资料。H-FABP如与传统的标记物cTnI、CK-MB结合起来一起检测，早期检测H-FABP，恢复期检测cTnI。有利于筛选出有心脏事件高风险的患者，不仅便于采取积极的治疗策略，还可节约患者开支和实验室资源，H-FABP与cTnI合理互补监测是将来一种临床诊治缺血性心脏病的理想选择。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程
，是一种双峰驼H-FABP蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法。
技术介绍
心型脂肪酸结合蛋白(heartfatty acid-binding protein, H-FABP)，又称 FABP3,编码该蛋白的基因是目前FABPs家族中研究较多的一种类型，主要在心肌、骨骼肌和乳腺中表达。不同物种的H-FABP基因编码区具有较高的同源性，这不仅表现在所编码的氨基酸上，还表现在DNA序列上，其外显子和内含子个数以及相应外显子的大小相同，但物种间相应内含子大小差异较大。当前，已有多个物种的H- FABP基因被克隆和定位，其中人类的H-FABP基因被定位在I号染色体p32 p33，小鼠的H- FABP基因被定位于4号染色体上，1999年，Gerbens等通过与人H-FABP基因的cDNA噬菌斑杂交，分离出了含猪H-FABP基因的Y 2噬菌体，确定了猪H-FABP基因的结构特征， 并初步将其定位在猪6号染色体上。Zhang等对大鼠H- FABP基因进行了克隆和序列结构分析，表明大鼠H- FABP基因由4个外显子和3个内含子组成，共编码133个氨基酸 ，通过荧光原位杂交(FISH)技术将其定位于5q36。H-FABP较特异地存在于心肌组织中，红骨骼肌、主动脉壁的平滑肌细胞、内皮细胞、胃腺体的壁细胞和睾丸间质细胞中亦有，少量存在于肾脏、白骨骼肌、肾上腺、脑，但肝脏、脂肪组织内无H-FABP分布。心脏型脂肪酸结合蛋白约占心脏全部可溶性蛋白质的 4% 8%。H-F A B P与心肌细胞内的长链脂肪酸和有机化合物-辅酶A酯诱导体的疏水部分相结合，将其从细胞质膜向酯化和氢化部位运输，从而进入能量代谢体系氧化分解最终生成三磷酸腺苷(ATP )，为心肌收缩提供能量，并调节脂肪酸对各种代谢酶、受体和细胞内信号传导、基因表达的影响，保护细胞膜和酶不受高浓度游离脂肪酸及其C ο A衍生物的影响血管细胞内的H-FABP能与细胞色素P450表氧化酶、脂氧化酶的产物结合调节血管张力。H-FABP的基因表达依赖于升高的脂肪酸代谢，许多生理实验表明增加脂肪酸的摄入与代谢可引起H-FABP及其mRNA表达升高;H_FABP蛋白及其mRNA的组织分布相平行。 H-FABP能及早发现超急期AMI (急性心肌梗塞)患者。对于鉴别出需急诊住院、冠状动脉造影、介入治疗的患者有很高的敏感性，尤其那些胸痛发病6h内的患者的早期诊断和预后判断有很大帮助。H-FABP如与传统的标记物cTnl、CK-MB结合起来一起检测，早期检测 H-FABP，恢复期检测cTnl。有利于筛选出有心脏事件高风险的患者，不仅便于采取积极的治疗策略，还可节约患者开支和实验室资源，H-FABP与cTnl合理互补监测也许是将来一种临床诊治缺血性心脏病的理想选择。在动物方面H-FABP基因遗传变异方面的报道较少，至今尚未发现克隆获得双峰驼H-FABP基因编码蛋白序列以及对动物H-FABP基因进化规律研究的报道。H-FABP在细胞内与脂肪酸结合，使细胞内外保持一定的脂肪酸浓度差，促进细胞摄取脂肪酸，因此，通过对H-FABP从基因、蛋白质和抑制剂等多方面的研究，必然会为心血管疾病的预防和治疗带来新的希望。双峰驼有较强的耐旱和沉积脂肪能力，尤其是在水草充足的季节，驼峰能在短时间内沉积大量脂肪，很适合进行脂类代谢研究。
技术实现思路
本专利技术提供了一种双峰驼H-FABP蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法，H-F A B P是一种使细胞内外保持一定的脂肪酸浓度差，促进细胞摄取脂肪酸的蛋白质，克服了上述现有技术之不足，H-FABP能及早发现超急期AMI (急性心肌梗塞)患者。对于鉴别出需急诊住院、冠状动脉造影、介入治疗的患者有很高的敏感性，尤其那些胸痛发病6h内的患者的早期诊断和预后判断有很大帮助。本专利技术的技术方案之一是通过以下措施来实现的一种双峰驼H-FABP蛋白基因， 该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1所示的序列。下面是对上述专利技术技术方案的进一步优化或/和改进上述基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1中46-661位的序列。本专利技术的技术方案之二是通过以下措施来实现的一种双峰驼H-FABP蛋白基因的重组蛋白。下面是对上述专利技术技术方案之二的进一步优化或/和改进上述重组蛋白的氣基酸序列具有SEQ ID NO. 2所不的序列。上述重组蛋白为具有SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。上述重组蛋白通过设计一对引物从双峰驼H-FABP蛋白中得到双峰驼肌球蛋白基因，该引物对的核苷酸序列信息如下正引物，SEQ ID NO. 3 (正向)5’ - ATGGTGGACGCGTTCGTGGGC-3’， 反引物，SEQ ID NO. 4 (反向)01igo dT。本专利技术的技术方案之三是通过以下措施来实现的一种双峰驼H-FABP蛋白基因的克隆方法，其特征在于按下述步骤进行第一步，总RNA提取，采取双峰驼组织样品后，对组织样品进行组织总RNA提取； 第二步，引物设计及合成，引物对的核苷酸序列信息如下正引物，SEQ ID NO. 3 (正向):5，- ATGGTGGACGCGTTCGTGGGC-3，，反引物，SEQ ID NO. 4 (反向)01igo dT ；第三步，RT-PCR扩增，利用反转录试剂盒对组织样品中的蛋白基因进行反转录，并对待扩增的DNA片段进行RT-PCR扩增；第四步，蛋白基因的克隆，首先对PCR扩增的DNA片段进行回收，然后将回收的DNA片段同T载体连接形成感受态细胞，将感受态细胞进行转化培养成单菌落，取少量该单菌落进行PCR扩增，对扩增后的单菌落鉴别T载体上是否含有目的DNA片段，若有目的DNA片段， 将单菌落放入培养基中进行过夜培养，最后对质粒进行回收。本专利技术参考其它物种H-FABP基因序列，克隆测序获得双峰驼H-FABP基因的cDNA 序列，并对不同物种H-FABP基因的CDS序列进行同源性比较，旨在了解和验证H-FABP基因的结构特点，为今后研究H-FABP基因与双峰驼脂类代谢的关系提供基础资料。H-FABP如与传统的标记物cTnl、CK-MB结合起来一起检测，早期检测H-FABP，恢复期检测cTnl。有利于筛选出有心脏事件高风险的患者，不仅便于采取积极的治疗策略，还可节约患者开支和实验室资源，H-FABP与cTnl合理互补监测是将来一种临床诊治缺血性心脏病的理想选择。附图说明附图1为双峰驼H-FABP基因RT-PCR产物电泳图。附图2为构建系统发生树所用H-FABP蛋白氨基酸同源性比较。附图3为不同物种H-FABP氨基酸序列系统进化树。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步描述实施例1，一种双峰驼H-FABP蛋白基因，该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1所示的序列。通过以双峰驼肝脏组织中总RNA为模板，参考牛、人、鼠等物种的H-FABP蛋白基因的同源序列设计引物，进行反转录PCR而获得的新基因序列，获得的双峰驼H-FABP蛋白基因 cDNA 序列见 SEQ ID NO.1。可根据实际需要，对上述双峰驼H-FABP蛋白基因作进一步优化或/和改进 双峰驼H-FABP蛋白基因的核苷酸序列具有S本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种双峰驼H?FABP蛋白基因，其特征在于该基因的核苷酸序列具有SEQ?ID?NO.1所示的序列。
【技术特征摘要】
1.一种双峰驼H-FABP蛋白基因，其特征在于该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1所示的序列。2.根据权利要求1所述的双峰驼H-FABP蛋白基因，其特征在于该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1中46-661位的序列。3.一种含有权利要求1或2所述的双峰驼H-FABP蛋白基因的重组蛋白。4.根据权利要求3所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白的氨基酸序列具有SEQID NO. 2所示的序列。5.根据权利要求3或4所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白为具有SEQID NO. 2 所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。6.根据权利要求3或4所述的重组蛋白，其特征在于通过设计一对引物从双峰驼 H-FABP蛋白中得到双峰驼肌球蛋白基因，该引物对的核苷酸序列信息如下正引物，SEQ ID NO. 3 (正向)5’ - ATGGTGGACGCGTTCGTGGGC-3’，反引物，SEQ ID NO. 4 (反向)01igo dT。7.根据权利要求5所述的重组蛋白，其特征在于通过设计一对引物从双峰驼H-FABP蛋白中得到双峰驼肌球蛋白基因，该引物...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈钢粮，
申请(专利权)人：新疆旺源驼奶实业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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