本发明专利技术是涉及一种生防菌发酵液的制作方法，具体为一种具有防治蔬菜瓜类以枯萎病为主的土传病害及对多种蔬菜有促生效果的广谱促生生防芽孢杆菌B96-II发酵液的制备方法。广谱促生生防芽孢杆菌B96-II发酵液的制备方法，包括如下步骤：菌种活化；制作B96-II种子液培养基；制作B96-II种子液；制作B96-II发酵液体培养基；制作B96-II发酵液。本发明专利技术制得的芽孢杆菌B96-II发酵液广谱性好，可防治多种蔬菜瓜类的病害，而且对多种蔬菜有促生效果，可广泛适用于蔬菜瓜类土传病害的防治。
【技术实现步骤摘要】
广谱促生生防芽孢杆菌B96-1 I发酵液的制备方法
本专利技术是涉及一种生防菌发酵液的制作方法，具体为一种具有防治蔬菜瓜类以枯萎病为主的土传病害及对多种蔬菜有促生效果的广谱促生生防芽孢杆菌B96-1I发酵液的制备方法。
技术介绍
蔬菜瓜果是人们日常生活不可或缺的食品，凡有人有土地的地方几乎都有蔬菜瓜果的种植，然而瓜菜枯萎病、立枯病、疫病等土传病害始终与菜果相随。近年来，随着设施农业的不断进步，为方便产销运输，规模化大面积单一种植的生产方式与日俱增，为病原菌的繁殖和扩散提供了适宜的寄主和环境，导致土传病害日趋严重。用化学药剂进行土壤处理是防治土传病害的重要方法，如溴甲烷是世界上公认的高效土壤熏蒸剂，在发达国家曾广泛用于园艺作物土传病害的防治，但该化合物显著消耗大气臭氧层，严重影响地球生态环境和人类健康。除熏蒸剂外，用于土壤处理的化学药剂还有五氯硝基苯、敌克松等，但由于效果不佳、成本太高、毒副作用太大等问题而难以广泛推广，有些甚至已被禁用。目前，经过防治实践证明，利用有益微生物来拮抗土传病原菌是长期而有效的方法，土传病原菌由于发生环境相对稳定，适合微生物的定植和存活，宜于开展生物防治；但是现有生物农药的防治对象多为单一目标，针对性较强、广谱性较差。
技术实现思路
本专利技术为了解决现有微生物的防治对象针对性较强、广谱性较差的问题，提供了一种广谱促生生防芽 孢杆菌B96-1I发酵液的制备方法。本专利技术是采用如下技术方案实现的广谱促生生防芽孢杆菌B96-1I发酵液的制备方法，包括如下步骤(一)菌种活化将2-3代芽孢杆菌B96-1I菌种接入预先制作3-5天、温度保持在 4-10 0C的PDA斜面培养基，在28 °C恒温培养箱内培养2_3天，得到PDA斜面菌种；(二)制作B96-1I种子液培养基取洗净削皮的马铃薯200g，切Icm方块，IL清水煮沸再温火煮30分钟，过滤后将滤液用蒸馏水定容至IOOOmL,加入磷酸二氢钾1_10 g、氯化钠 l-10g、葡萄糖10-20g混合均匀后121°C灭菌20-30分，得到B96-1I种子液培养基；(三)制作B96-1I种子液待B96-1I种子液培养基自然冷却后，将步骤(一)制得的PDA 斜面菌种接入，30-34°C摇床，150-180转/分，培养24-36小时，得到B96-1I种子液；(四)制作B96-1I发酵液体培养基玉米粉l-10g、黄豆粉l-10g、蛋白胨l_10g、磷酸二氢钾l-10g、氯化钠l_15g、硫酸铵l_15g、碳酸钙l-10g、硫酸镁O. 1-10 g、硫酸锌O.1-1Og 、氯化锰O.1-1Og、酵母膏l-10g、葡萄糖10-200g、水1000mL，121°C灭菌20-40分，得到 B96-1I发酵液体培养基；(五)制作B96-1I发酵液将步骤(三)制得的B96-1I种子液按10-20%体积浓度接入步骤(四)制得的B96-1I发酵液体培养基中(如1000mLB96-1I发酵液体培养基需要100-200mLB96-1I种子液)，30_34°C摇床，150-180转/分，培养48小时，得到的菌液即为 B96-1I发酵液。本专利技术所述的芽孢杆菌B96-1I菌株已在非专利文献——2009年15卷06期《应用与环境生物学报》上以论文“拮抗菌B96-1I对芦笋枯萎病的抑菌作用”的形式公开，公众欲获得该菌株可向山西省农业科学院山西省农药重点实验室申请获取，该菌株的合法持有者——山西省农业科学院山西省农药重点实验室，该室保证在符合法律等有关规定的条件下，将从申请日起二十年内向公众提供该菌株。山西省农药重点实验室从1996年开始，针对蔬菜枯萎病、疫病等土传病害筛选高效拮抗菌。经对上万个平皿、50余次温室和田间防病筛选试验证明芽孢杆菌B96-1I拮抗菌对芦笋茎枯菌、芦笋枯萎病、辣椒枯萎病、辣椒疫病、番茄枯萎病、番茄早疫病、黄瓜枯萎病、黄瓜猝倒病、西瓜枯萎病、西瓜炭疽病、苹果霉心病等17种蔬菜瓜类病原菌有明显的抑制作用，对芦笋、青椒、辣椒、番茄、芹菜、黄瓜、西瓜、甜瓜等多种蔬菜有促生作用。用本专利技术制得的B96-1I发酵液分别对芦笋茎枯菌、黄瓜枯萎菌、西瓜枯萎菌、青椒枯萎菌处理24h后与只用清水处理的对照组进行比较发现用B96-1I发酵液对芦笋茎枯菌处理后与对照组相比菌丝生长和孢子萌发抑制率分别为89. 6%和99. 6%，离体组织培养对菌斑的抑制率为94. 4%，田间防治效果3个月后为93. 40%,当B96-1I发酵液的浓度从 1%升到10%时，电导率(PS/cm)从47. 5%提高至Ij 818. 3%，总溶解固体(TDS)从151. 3%提高到797. 6%，呼吸抑制率从25%到196. 4% ;用B96-1I发酵液对黄瓜枯萎菌处理后与对照组相比芽管抑制率为 87. 5%，温室防治效果I个月后为43. 5%而3个月后为53. 7% ;用B96-1I发酵液对西瓜枯萎菌处理后与对照组相比芽管萌发抑制率为77. 3%，温室防治效果I个月后为64. 6%而3个月后为100% ;用B96-1I发酵液对青椒枯萎菌处理后与对照组相比芽管萌发抑制率为78. 1%，温室防治效果I个月后为43. 1%而3个月后为77. 9%。实验结果说明， B96-1I发酵液可导致菌丝和孢子严重的破损，使细胞内容物外渗；用B96-1I发酵液处理菌丝后菌液电导率和总溶解固体的值比未经处理的菌丝明显提高，即B96-1I发酵液可抑制病原菌菌丝呼吸、溶解菌丝；温室防治效果随时间延长效果显著提高；从而表明B96-1I发酵液对蔬菜瓜类土传病害具有显著的防治效果。用本专利技术制得的B96-1I发酵液对黄瓜、西瓜、辣椒、芦笋进行处理后与未处理的对照组比较发现用B96-1I发酵液处理后的黄瓜的株高、鲜重和干重分别增加了 18. 8%、 55. 2%和46. 2 ;用B96-1I发酵液处理后西瓜植株的干重增加了 20%_30% ;用B96-1I发酵液处理后的辣椒的干重增加了 30%左右；用B96-1I发酵液处理后芦笋的干重增加了 20%左右。实验结果说明，用B96-1I发酵液处理后的蔬菜田间封垄效果明显，植株高、果实大，促生效果明显。本专利技术制得的芽孢杆菌B96-1I发酵液广谱性好，可防治多种蔬菜瓜类的土传病害，而且对多种蔬菜类有促生效果，极大地降低了生产成本，可广泛适用于蔬菜瓜类土传病害的防治，特别适用于温室大棚等设施农业和绿色无公害蔬菜生产应用。具体实施方式实施例1 :广谱促生生防芽孢杆菌B96-1I发酵液的制备方法，包括如下步骤(一)菌种活化将3代芽孢杆菌B96-1I菌种接入预先制作3天、温度保持在10°C的PDA 斜面培养基，在28°C恒温培养箱内培养3天，得到PDA斜面菌种；(二)制作B96-1I种子液培养基取洗净削皮的马铃薯200g，切Icm方块，IL清水煮沸再温火煮30分钟,过滤后将滤液用蒸懼水定容至IOOOmL,加入磷酸二氢钾5g、氯化钠10g、 葡萄糖15g混合均匀后121°C灭菌30分，得到B96-1I种子液培养基；(三)制作B96-1I种子液待B96-1I种子液培养基自然冷却后，将步骤一制得的PDA斜面菌种接入，30°C摇床，180转/分，培养30小时，得到B96-1I种子液；(四)制作B96-1I发酵液体本文档来自技高网...
【技术保护点】
广谱促生生防芽孢杆菌B96?II发酵液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（一）菌种活化：将2?3代芽孢杆菌B96?II菌种接入预先制作3?5天、温度保持在4?10℃的PDA斜面培养基，在28℃恒温培养箱内培养2?3天，得到PDA斜面菌种；（二）制作B96?II种子液培养基：取洗净削皮的马铃薯200g,切1cm方块，1L清水煮沸再温火煮30分钟，过滤后将滤液用蒸馏水定容至1000mL，加入磷酸二氢钾1?10?g、氯化钠1?10g、葡萄糖10?20g混合均匀后装瓶121℃灭菌20?30分，得到B96?II种子液培养基；（三）制作B96?II种子液：待B96?II种子液培养基自然冷却后，将步骤（一）制得的PDA斜面菌种接入，30?34℃摇床，150?180转/分，培养24?36小时，得到B96?II种子液；（四）制作B96?II发酵液体培养基：玉米粉1?10g、黄豆粉1?10g、蛋白胨1?10g、磷酸二氢钾1?10g、氯化钠1?15g、硫酸铵1?15g、碳酸钙0.1?10g、硫酸镁0.1?10g、硫酸锌0.1?10g?、氯化锰0.1?10g?、酵母膏1?10g、葡萄糖10?200g、水1000mL，121℃灭菌20?40分，得到B96?II发酵液体培养基；（五）制作B96?II发酵液：将步骤（三）制得的B96?II种子液按10?20%体积浓度接入步骤（四）制得的B96?II发酵液体培养基中，30?34℃摇床，?150?180转/分，培养48小时，得到的菌液即为B96?II发酵液。...
【技术特征摘要】
1.广谱促生生防芽孢杆菌B96-1I发酵液的制备方法，其特征在于包括如下步骤 (一)菌种活化将2-3代芽孢杆菌B96-1I菌种接入预先制作3-5天、温度保持在4-100C的PDA斜面培养基，在28°C恒温培养箱内培养2_3天，得到PDA斜面菌种； (二)制作B96-1I种子液培养基取洗净削皮的马铃薯200g，切Icm方块，IL清水煮沸再温火煮30分钟，过滤后将滤液用蒸馏水定容至IOOOmL,加入磷酸二氢钾1_10 g、氯化钠l-10g、葡萄糖10-20g混合均匀后装瓶121°C灭菌20-30分，得到B96-1I种子液培养基； (三)制作B96-1I种子液待B96-1I种子液培养基自然冷却后，将步骤(一)制得的PDA斜面菌种接入，30-34°C摇床...
【专利技术属性】
技术研发人员：马利平，郝变青，乔雄梧，
申请(专利权)人：山西省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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