【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物化学分析
，具体涉及一种莱克多巴胺单克隆抗体的制备方法以及用途，用于检测莱克多巴胺的酶联免疫检测试剂盒和胶体金试纸卡，其特别适用于畜禽组织、尿样、饲料、乳制品等样品中莱克多巴胺药物残留的检测。
技术介绍
莱克多巴胺(ractopamine，Rac)属于β -肾上腺素受体激动剂(简称β _激动·剂)，国内外许多研究者将其作为饲料添加剂，分别对猪、牛、草鱼和鼠等动物进行试验，证明其具有营养重分配作用，该药物能改变动物的营养代谢，降低胴体脂肪，提高瘦肉率，同时使动物增重，提高饲料使用率。然而β_激动剂在动物体内的蓄积性残留会对食用者的安全构成潜在威胁，常常引起食用者发生心悸、肌肉震颤、恶心呕吐、发热寒战等临床症状，特别对心脏病、糖尿病、高血压等病人危害更大。在欧洲，1986年就颁布了禁用β-激动剂的禁令，1997年我国农业部严禁将β -激动剂等药物作为动物促生长剂使用。然而由于经济利益的驱使，违法滥用β_激动剂的现象仍非常普遍，各类中毒事件时有发生。另外由于美国FDA核准Elanco Animal Health Products所制造的莱克多巴胺用作猪的饲料添加剂，这一规定成为许多非法使用者的借口。为了打击非法使用违禁药物，除了健全法律法规，建立有效的监督管理体系外,还需要健全相应的检测方法。目前分析检测莱克多巴胺的方法主要有仪器检测法和免疫分析方法，其中仪器检测方法主要涉及高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)，但是仪器检测方法所用的仪器几乎都属于大型仪器，价格昂贵，样品前处...
【技术保护点】
一种莱克多巴胺单克隆抗体的制备方法，其特征在于所述莱克多巴胺单克隆抗体采用合成的莱克多巴胺半抗原与载体蛋白偶联得到的抗原进行动物免疫而得到的，其中所述莱克多巴胺半抗原的制备方法步骤为：1.1g对苯二胺，溶入150ml?0.2M的HCl水溶液中，0?4℃下滴加0.7g?NaNO2的20ml水溶液，避光反应0.5?1小时，然后缓慢滴加1.1g莱克多巴胺在20ml0.5mol/L醋酸钠水溶液中的混合物。避光反应1?3小时。加入适量浓盐酸酸化，产生沉淀，离心，水洗，乙酸乙酯提取，除去溶剂后得到莱克多巴胺半抗原，为莱克多巴胺的偶氮衍生物。
【技术特征摘要】
1.一种莱克多巴胺单克隆抗体的制备方法，其特征在于所述莱克多巴胺单克隆抗体采用合成的莱克多巴胺半抗原与载体蛋白偶联得到的抗原进行动物免疫而得到的，其中所述莱克多巴胺半抗原的制备方法步骤为1.1g对苯二胺，溶入150ml 0. 2M的HCl水溶液中，0-4°C下滴加0.1g NaNO2的20ml水溶液，避光反应0. 5-1小时，然后缓慢滴加1.1g莱克多巴胺在20ml0. 5mol/L醋酸钠水溶液中的混合物。避光反应1_3小时。加入适量浓盐酸酸化，产生沉淀，离心，水洗，乙酸乙酯提取，除去溶剂后得到莱克多巴胺半抗原，为莱克多巴胺的偶氮衍生物。2.根据权利要求1所述的莱克多巴胺单克隆抗体的制备方法，其特征在于莱克多巴胺小分子经过结构改造得到带有氨基结构的莱克多巴胺的偶氮衍生物，其分子结构如下3.根据权利要求1所述的莱克多巴胺单克隆抗体，其特征在于其制备方法包括以下步骤 (1)将权利要求2所述的莱克多巴胺半抗原与牛血清白蛋白偶联得到的免疫原对8-10周龄的Balb/c小鼠进行三次间隔免疫，在第三次免疫后再进行一次加强免疫，激活体内的淋巴细胞，产生莱克多巴胺特异性抗体。(2)将产生莱克多巴胺特异性抗体的Balb/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按8 I比例进行融合，采用间接竞争ELISA测定细胞上清液，筛选阳性孔。将阳性细胞采用有限稀释法进行亚克隆，得到稳定的能够分泌莱克多巴胺单克隆抗体的杂交瘤细胞。(3)用液体石蜡致敏Balb/c小鼠，将收集得到的杂交瘤细胞株用1640进行清洗，并注射与小鼠的腹腔。采集到的腹水，用辛酸-饱和硫酸铵法进行纯化，纯化后的腹水放入-20°C环境保存。4.如权利要求1所述的莱克多巴胺单克隆抗体制备的莱克多巴胺酶联免疫试剂盒，其包括 (1)包被了莱克多巴胺抗原的96孔酶标板； (2)羊抗鼠酶标二抗； (3)莱克多巴胺抗体工作液； (4)莱克多巴胺标准品溶液； (5)底物液A液； (6)底物液...
【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，万宇平，冯静，扶胜，聂雯莹，邵小雪，顾蓉蓉，何丽霞，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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