本发明专利技术涉及一种抗人LunX蛋白的单克隆抗体，本发明专利技术还涉及生产该单克隆抗体的杂交瘤细胞株以及该单克隆抗体的应用。本发明专利技术的抗人LunX蛋白的单克隆抗体由杂交瘤细胞株LunX-mAb-S-35-8(保藏编号CCTCC?NO：C2012187)分泌。本发明专利技术的单克隆抗体可以用于免疫组化和免疫荧光检测肺癌标本中的LunX蛋白的表达，还可以用于体外抑制肿瘤细胞的增殖以及对体内肿瘤的治疗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株特异性抗人肺特异X蛋白(LunX蛋白)的单克隆抗体。具体地说，本专利技术涉及一株特异性针对人LunX蛋白第103至256位的氨基酸序列的单克隆抗体，本专利技术还涉及产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以及所述单克隆抗体的应用。
技术介绍
在全球范围内，肺癌是近年来发病率最高的恶性肿瘤之一，其发病率上升速度是最快的。肺癌5年存活率为13 % ;80 %的患者在诊断后I年内死亡；肺癌早期诊断率为15%，但这些患者5年存活率达到60% 90%。由此可见，亟待寻找肺癌的早期诊断和治疗的祀点。目前国际上倾向于将肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，其中非小细胞肺癌占肺癌的85%以上。肺特异X 蛋白(简称 LunX 蛋白)，又称PLUNC ；NASG ；SPURT ；LPLUNC3 ；SPLUNCI。其基因是日本学者Iwao等通过对人体13种不同组织中分离出来的RNA运用差异显示技术，于2001年发现的一种人肺组织特异性X蛋白。基因定位于20pll.1ql2，全长1015bp，包括一个编码256个氨基酸的768个核苷酸的开放式读码框。其含有和LPS结合的BPI样结构域，所以认为LunX蛋白是一个参与天然免疫的天然免疫分子。目前其主要研究集中于上呼吸道，当感染时上皮细胞等LunX蛋白表达升高，而正常肺实质细胞不表达LunX蛋白，但伴随癌变开始高表达。由于LunX蛋白在肺癌病人中表达的特异性，因此，准确快速检测组织局部LunX蛋白表达以及探讨以LunX作为靶标的生物治疗具有重要的临床意义。
技术实现思路
专利技术概述本专利技术的一个目的是提供对人LunX蛋白有特异性的单克隆抗体。本专利技术的又一个目的是提供产生所述单克隆抗体的杂交瘤细胞株LunX-mAb-S-35-8。本专利技术的又一个目的是提供本专利技术的单克隆抗体的制备方法。本专利技术的又一个目的是验证本专利技术的单克隆抗体在体外能够抑制肺癌细胞的增殖，在体内可以抑制肿瘤的生长，并且在体内可以抑制肿瘤的生长及转移。本专利技术的又一个目的是提供本专利技术的单克隆抗体在免疫组织化学检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者的肺组织中LunX蛋白表达试验中的应用。本专利技术的又一个目的是提供本专利技术的单克隆抗体在细胞免疫荧光检测NSCLC患者的锁骨下淋巴结中LunX蛋白表达试验中的应用。有益效果本专利技术提供了一株特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体、其制备方法、鉴定及应用，所述单克隆抗体特异性好，灵敏度高，能够应用于检测人肺脏组织和淋巴结LunX蛋白的表达，可以作为肺癌的早期或转移的诊断指标之一，另外，本专利技术的单克隆抗体可以抑制肿瘤的生长及转移。因此，本专利技术对肺癌的诊断及治疗具有重大的临床意义。专利技术详述本专利技术的第一方面涉及一种特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体，该抗体的类型为IgG2b, K，其特异性针对的是人LunX蛋白的第103-256位的氨基酸序列。本专利技术的第二方面涉及稳定分泌所述抗人LunX蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株LunX-mAb-S-35-8，该细胞株已于2012年11月27日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国武汉，武汉大学，邮编430072)，保藏编号为CCTCC NO :C2012187。本专利技术的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体在本文中也可以称为单克隆抗体S-35-8。 本专利技术的第三方面涉及所述单克隆抗体的制备方法，所述制备方法包括重组人LunX蛋白的表达、复性与纯化，用纯化后的人LunX蛋白免疫小鼠，取免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合，筛选出能够稳定分泌对重组人LunX有反应性的单克隆抗体的杂交瘤细胞，从杂交瘤细胞培养上清中或者从用该杂交瘤细胞免疫的小鼠腹水中获取单克隆抗体。本专利技术的第四专利技术涉及本专利技术的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体的功能鉴定S-35-8单克隆抗体能够在体外抑制NC1-H292细胞的增殖，将本专利技术的S_35_8单克隆抗体加入NC1-H292细胞培养上清中，细胞计数实验显示S-35-8单克隆抗体能够抑制NC1-H292细胞的增殖；S-35-8单克隆抗体能够在体内抑制移植性肿瘤(移植性肿瘤人肺癌细胞系NC1-H292细胞接种于裸鼠皮下)的生长，肿瘤大小测量结果显示S-35-8单克隆抗体能够抑制肿瘤的生长；S-35-8单克隆抗体能够在体内抑制移植性肿瘤(移植性肿瘤人肺癌细胞系NC1-H292细胞通过尾静脉接种于裸鼠体内)的生长和转移，小鼠荧光成像结果显示S-35-8单克隆抗体能够抑制肿瘤的生长和转移。本专利技术的第五方面涉及本专利技术的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体在制备用于检测非小细胞肺癌患者的组织中的LunX蛋白的试剂中的应用。在一个优选实施方案中，所述非小细胞肺癌患者的组织选自肺组织或锁骨下淋巴结。具体地，本专利技术的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体可以用于免疫组织化学检测NSCLC患者肺组织中的LunX蛋白。用本专利技术的S-35-8单克隆抗体鉴定LunX蛋白的表达，免疫组织化学实验显示S-35-8单克隆抗体能在免疫组织化学水平用于检测NSCLC患者肺组织中的LunX蛋白。本专利技术的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体还可以用于细胞免疫荧光检测NSCLC患者锁骨下淋巴结中的LunX蛋白。用本专利技术的S-35-8单克隆抗体鉴定LunX蛋白的表达，细胞免疫荧光实验显示S-35-8单克隆抗体能在细胞免疫荧光水平用于检测NSCLC患者锁骨下淋巴结LunX蛋白。本专利技术的第六方面涉及本专利技术的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体的制药用途。具体地，涉及本专利技术的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体在制备用于抑制肿瘤细胞增殖的药物中的应用，或本专利技术的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体在制备用于抑制体内肿瘤生长和/或转移的药物中的应用。本专利技术的第七方面涉及一种用于检测非小细胞肺癌的诊断剂，所述诊断剂包含本专利技术所述的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体。本专利技术的第八方面涉及一种用于抑制肿瘤细胞增殖和/或抑制肿瘤生长和/或转移的药物，所述药物包含治疗有效量的本专利技术所述的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体。优选地，所述肿瘤为非小细胞肺癌。优选地，本专利技术涉及一种用于治疗受试者中的非小细胞肺癌的药物，所述药物包含治疗有效量的本专利技术所述的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体。其中所述受试者为哺乳动物，优选为人。本领域技术人员应该理解，尽管在本专利技术的一个具体实施方案中，本专利技术的特异 性抗人LunX蛋白的单克隆抗体为一株鼠来源的抗人Lunx蛋白的单克隆抗体(由鼠源杂交瘤细胞表达)，其结构可划分为可变区、恒定区和绞链区，可变区识别及结合Lunx蛋白，而恒定区具有小鼠种属特异性，但是，本专利技术的单克隆抗体可以进行人源化处理，即，通过分子克隆等技术将其恒定区替换为人种属的IgG2b, K亚型的恒定区，人源化后的抗体可以用于治疗人受试者中的非小细胞肺癌。因此，本专利技术的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体的人源化形式也包含在本专利技术的范围内。本专利技术中，术语“单克隆抗体的特异性”是指单克隆抗体识别抗原上的特定表位或者抗原决定簇并与之结合的性质。术语“单克隆抗体的反应性”是指在合适的反应条件下，单克隆抗体与抗原结合的能力。术语“细胞株”是指通过筛选或者有限稀释方法，从原代培养物或者细胞系获得的单细胞培养物。根据本专利技术的公本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性针对人LunX蛋白第103至256位的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体,所述单克隆抗体特异性针对人LunX蛋白第103至256位的氨基酸序列。2.一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为CCTCC N0:C2012187，所述杂交瘤细胞株分泌权利要求I所述的单克隆抗体。3.权利要求1所述的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体在制备用于检测非小细胞肺癌患者的组织中的LunX蛋白的试剂中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其中所述非小细胞肺癌患者的组织选自肺组织或锁骨下淋巴结。5.权利要求1所述的特异性抗人LunX蛋白的单克隆抗体在制备...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏海明，郑小虎，田志刚，孙汭，
申请(专利权)人：中国科学技术大学，
类型：发明
国别省市：
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