一种鸭传染性浆膜炎三价灭活疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种鸭传染性浆膜炎三价灭活疫苗及其制备方法。本发明专利技术利用自行分离的三株不同血清型鸭疫里默氏杆菌菌株，分别接种适宜培养基培养，收获培养物，经甲醛溶液灭活后浓缩，然后按照一定比例混合均匀，加入矿物油佐剂乳化，制备出一种鸭传染性浆膜炎三价灭活疫苗，能够有效预防鸭传染性浆膜炎。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种鸭传染性浆膜炎三价灭活疫苗，属于兽用生物制品领域。
技术介绍
鸭传染性浆膜炎，又称鸭疫里默氏杆菌病、鸭疫巴氏杆菌病、鸭败血症、鸭疫综合征，是由鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer, RA)引起的一种鸭的急性、败血性的传染病。Hendrickson和Hilbert 1932年首次报道纽约长岛的北京鸭发生本病。本病呈急性或慢性败血症，以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎和脑膜炎为特征，慢性经过的鸭主要表现为脑膜炎症状(俞永裕，施建明.浅谈鸭传染性浆膜炎的诊治.上海畜牧兽医通讯， 2000，(2) :22 23)。I 8周龄雏鸭易感，恶劣环境可诱发本病，本病死亡率最高可达75% (胡建华，孙凤萍等.鸭疫里氏杆菌分离及免疫研究.上海农业学报，2003，19 (4) :109 111)。由于本病的高死亡率,致鸭体重减轻和高度淘汰,使其成为养鸭业经济损失最主要的疾病之一。使用疫苗进行免疫接种是控制该病的方法之一。到目前为止，鸭传染性浆膜炎共报道有21个血清型(I 21型)，由于鸭传染性浆膜炎血清型较多，且各血清型之间没有交叉保护(Sandhu T S，Leister M L. Serotype of Pasteurella anatipestifer isolates from poultry in different contries. Avian Pathology, 1991，20:232-239),所以，使用疫苗的抗原血清型必须与发生该病的血清型最大程度的吻合，才能达到最佳免疫效果。目前，对鸭传染性浆膜炎的防治主要以疫苗预防为主。由于鸭传染性浆膜炎不同血清型菌株的免疫原性不同，菌苗诱导的免疫力具有血清型的特异性，而且本病可出现多种血清型混合感染以及血清型的变异，因此，使用疫苗时，在确定不同地区流行菌株的血清型及其分布基础上，选用同型菌株的疫苗才能确保免疫效果。 鸭传染性浆膜炎给养鸭业带来严重的经济损失，引起越来越多的关注。目前，鸭传染性浆膜炎较为理想的疫苗应该是亚单位苗或基因工程苗，而作为兽用疫苗，亚单位苗由于成本过高而不太实用，基因工程苗则是较为理想的发展方向。在研制基因工程苗时，在亲本株的选择上，要么是分离本地毒力较强的优势血清型，产生最大限度的保护；要么使用的疫苗含有多种血清型，尽可能地包括多种保护性抗原，可以提供更全面的保护。但现在科研人员对RA的研究都集中在细菌的结构与功能上，细菌的致病机制等分子水平的研究虽然取得了很大的进展，但研究成果还未能促使RA疫苗取得突破。目前国内只有四川农业大学研制的疫苗获得了新兽药注册证书，但是他们研究的产品仅含血清I型鸭疫里默氏杆菌， 不能预防其它血清型引起的鸭传染性浆膜炎，市场急需多价苗的推广与应用。鉴于上述原因，根据近几年的流行病学调查和病原分离工作，特别是目前企业的实际生产能力和水平，我们认为利用多个血清型的流行菌株研制鸭传染性浆膜炎疫苗符合需要，并能够解决以往产品无法预防多个血清型引发鸭传染性浆膜炎的问题。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供本专利技术人自行分离的的三株不同血清型鸭疫里默氏杆菌血清I型ZJOl株、血清2型HNOl株、血清7型YC03株，利用三株菌株制备一种鸭 传染性浆膜炎三价灭活疫苗，用于有效预防鸭传染性浆膜炎。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案在于将保藏号为CGMCC No. 6400的血清I型鸭疫里默氏杆菌ZJOl株、保藏号为CGMCC No. 6398的血清2型鸭疫里默氏杆菌HNOl株和保藏号为CGMCC No. 6399的血清7型鸭疫里 默氏杆菌YC03株作为生产疫苗用菌种，分别接种马丁肉汤培养基，于37°C培养16 20小 时，经过灭活、浓缩制成三种灭活浓缩菌液；将检验合格的三种灭活浓缩菌液混合，加入油 佐剂再经乳化制备出鸭传染性浆膜炎三价灭活疫苗。具体实施例方式I.疫苗生产用菌株(I)菌株来源本专利技术人于2006年从河南、山东和浙江等地鸭场采集鸭疫里默氏杆菌病病料，用 血清营养琼脂平板从病死鸭的脑组织、心脏、肝脏等部位分离出多株鸭疫里默氏杆菌菌株， 对分离的鸭疫里默氏杆菌进行了形态观察、培养特性、生化特性、血清学试验、毒力和免疫 原性试验，最终筛选到国内流行的血清I型、2型菌株和7型菌株各一株，分别命名为鸭疫 里默氏杆菌血清I型ZJOl株、血清2型HNOl株和血清7型YC03株。以上鸭疫里默氏杆菌 (Riemerella anatipestifer) I 型 ZJOl 株，2 型 HNOl 株和 7 型 YC03 株已于 2012 年 08 月 14日送交北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为分别CGMCC No. 6400，CGMCC No. 6398和CGMCC No. 6399。(2)菌种特性I)形态及生化特性本菌为革兰氏阴性小杆菌。感染动物的组织或血液涂片，瑞氏 染色为两极着色小杆菌。生化特性符合细菌分类学中本菌的特性。2)培养特征在麦康凯琼脂平板上不生长；在含5%新生牛血清的营养琼脂平板、含 10%绵羊鲜血的营养琼脂平板和马丁肉汤培养基中生长良好；在含5%新生牛血清的营养琼 脂平板上培养24小时,形成圆形、凸起、透明、呈露珠样、直径为O. 5mm I. 5mm的菌落,用 斜射光观察有蓝色荧光；在含10%绵羊鲜血的营养琼脂平板上呈露珠样小菌落，不溶血；在 马丁肉汤培养基中均匀浑浊，无菌膜。3)分型鉴定①材料鸭疫里默氏杆菌定型血清琼扩效价均> 1:16，由扬州大学兽医学院保存、提供。待检菌株鸭疫里默氏杆菌ZJOl株、HNOl株、YC03株，由齐鲁动物保健品有限公司 分离、提供。②方法在室温条件下，将鸭疫里默氏杆菌ZJOl株、HNOl株、YC03株抗原分别充分振荡摇 匀后，吸取25 μ I滴于洁净载玻片上，分别取定型血清25 μ I与之混匀。抗原和血清混合后 观察5min，若出现明显的颗粒凝集或块状凝集则为阳性，若不出现凝集则为阴性。③结果凝集反应结果表明，鸭疫里默氏杆菌ZJOl株与I型定型血清产生凝集反应，判定为血清I型；HN01株与2型定型血清产生凝集反应，判定为血清2型；YC03株与7型定型血清产生凝集反应，判定为血清7型菌株。具体结果见表I。表I鸭疫里默氏杆菌血清型鉴定试验结果本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸭传染性浆膜炎三价灭活疫苗，其特征是该疫苗含有保藏号为CGMCC?No.6400的血清1型鸭疫里默氏杆菌ZJ01株、保藏号为CGMCC?No.6398的血清2型鸭疫里默氏杆菌HN01株和保藏号为CGMCC?No.6399的血清7型鸭疫里默氏杆菌YC03株，三株病毒已于2012年8月14日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏。

【技术特征摘要】
1.一种鸭传染性浆膜炎三价灭活疫苗，其特征是该疫苗含有保藏号为CGMCC No. 6400的血清I型鸭疫里默氏杆菌ZJOl株、保藏号为CGMCC No. 6398的血清2型鸭疫里默氏杆菌HNOl株和保藏号为CGMCC No. 6399的血清7型鸭疫里默氏杆菌YC03株，三株病毒已于2012年8月14日送交北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏。2.—种权利要求1所述的鸭传染性浆膜炎...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲍海忠，王蕾，鞠洪涛，徐龙涛，李金波，宋晓飞，张小军，吴昊，魏联果，
申请(专利权)人：齐鲁动物保健品有限公司，
类型：发明
国别省市：