抗c‑MEt的单克隆抗体制造技术

本发明专利技术公开了与人c‑Met这种肝细胞生长因子受体结合的分离的单克隆抗体和相关的基于抗体的组合物和分子。还公开了包含该抗体的药物组合物和使用该抗体的治疗与诊断方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及针对人C-Met这种肝细胞生长因子受体的单克隆抗体，并涉及这类抗体的用途，特别是其在癌症治疗中的用途。
技术介绍
C-Met是一种跨膜受体酪氨酸激酶蛋白质。最初的单链前体经翻译后切割产生C-Met异二聚体的成熟形式,所述异二聚体由二硫键连接的胞外α -链(50kDa)和较长的跨膜 β_ 链(145kDa)组成(Birchmeier 等，2003, Nat Rev Mol Cell Biol 4:915)。c-Met的胞外部分由3种结构域类型组成。N端SEMA结构域由完整的α -亚基和部分β -亚基构成，并包括脑信号蛋白的同源物。SEMA结构域后面是富含半胱氨酸的结构域，再后面是4个免疫球蛋白-(Ig)样结构域。胞质部分含有对下游信号转导是必不可少的近膜激酶结构域和羧基端尾。c-Met的唯一已知的高亲和力配体肝细胞生长因子(HGF)在正常条件下主要由成纤维细胞表达(Li和Tseng 1995，J Cell Physiol 163 :61)，并由肿瘤细胞表达(Ferracini等，1995，Oncogene 10:739)。HGF(亦称为分散因子SF)以前体合成，该前体经蛋白水解转化成有活性的α/β异二聚体。根据受体结合片段的晶体结构，认为HGF作为二聚体与 c-Met 结合(Chirgadze 等，1999, Nat Struct Biol 6:72)。HGF- α 链以高亲和力与c-Met中的Ig样结构域结合，而HGF-β链以低亲和力与c_Met SEMA结构域结合(Basilico等，2008，J Biol Chem 283:21267)。后一互相作用在活性HGF异二聚体结合时，负责c-Met 二聚化和受体酪氨酸激酶活化。受体自身磷酸化产生用于效应子募集的独特停靠位点，Gabl (生长因子受体结合蛋白2[Grb2]相关结合物I)与之结合对于以下主要c-Met 下游信号转导途径是必需的(Comoglio 等，2008, Nat Rev Drug Discov 7 :504)· Ras-ERKI/2 途径增殖。· Ras-Rac途径侵袭、移动、上皮至间充质转换。· PI3K-Akt 途径存活。C-Met在胚胎发生期间和在成年期的许多器官的上皮和内皮细胞表面上表达，包括肝、胰腺、前列腺、肾、肌肉和骨髓。c-Met活化在由包括增殖、移动、血管生成和防止细胞凋亡在内的一系列过程组成的所谓“侵袭性生长”程序中起重要作用(Boccaccio和Comoglio 2006, Nat Rev Cancer 6:637)。这些c_Met调节的过程发生在胚胎发育、肝脏和心脏损伤修复期间的正常生理条件下和肿瘤发生期间的病理情况下(Eder等，2009，ClinCancer Res 15 :2207)。不良的c-Met信号转导几乎发生在实体瘤的所有类型以及各种肉瘤、造血系统恶性肿瘤和黑素瘤中，所述实体瘤例如膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌和甲状腺癌(Birchmeier等，2003，Nat Rev MolCellBiol 4 :915 ;Comoglio 等，2008, Nat Rev Drug Discov 7 :504 ;Peruzzi 和 Bottaro2006, Clin Cancer Res 12:3657)。c_Met的致肿瘤性的主要机制通常以下列3种不同的方式实现·自分泌 HGF/c-Met 环，· C-Met 或 HGF 过量表达，· c-Met受体编码序列中激活激酶的突变。最值得注意的是，在遗传性乳头状肾癌患者中鉴定出激活性c-Met突变(Schmidt等，1997，Nat Genet 16:68)。c_Met的组成型活化促成增殖、侵袭、存活或血管生成性癌表型之一或组合。已表明肿瘤细胞中内源性表达的c-Met的基因沉默导致增殖和肿瘤生长缺乏及已建立的转移消退，以及新转移的产生减少(Corso等,2008, 0ncogene27 :684)。由于从开始直到向转移进展，c-Met促成癌症发展的多个阶段，因此c-Met及其配体HGF成为定向癌症疗法的主要候选药物(Comoglio等,2008, Nat Rev Drug Discov 7 504 ；Knudsen 和 VandeWoude 2008, Curr Opin Genet Dev 18 87)。正对若干策略进行探索以达到该目的 诱铒受体HGF或c-Met或分子类似物的亚区可通过阻断配体结合或受体二聚化 而作为化学计量竞争剂(stochiometric competitor)起拮抗性作用。HGF的这类拮抗亚区的一个实例是 NK4 (KringlePharma)。 小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI):在临床评价的不同阶段中，3种c-Met特异性TKI 为 ARQ 197 (ArQule)、JNJ 38877605(Johnson&Johnson)和 PF-04217903 (Pfizer)。·抗 HGF 单克隆抗体，例如 AMG102、rilotumumab (Amgen)、HuL2G7 (Takeda)和AV-299(Schering)。·抗 C-Met 单克隆抗体描述于 W02005016382、W02006015371、W02007090807、W02007126799TO2009007427、TO2009142738 和 van der Horst 等(van der Horst 等，2009，Neoplasoa 11 :355)。MetMAb (Genentech)是与c_Met的胞外结构域结合从而防止HGF结合和随后的受体活化的人源化一价(单臂)0A-5D5抗体(Jin等，2008，Cancer Res68 :4360)。在小鼠异种移植模型中，发现用MetMAb治疗抑制HGF驱动的原位成胶质细胞瘤和皮下胰腺肿瘤的肿瘤生长(Jin 等，2008, Cancer Res 68:4360 ;Martens 等，2006, Clin Cancer Res12 :6144) o h224Gl I (Pierre Fabre) (Corvaia 和 Boute 2009，摘要 835AACR第 100 周年年会(AACR IOOth Annual Meeting))是人源化二价抗c_Met IgGl抗体。在小鼠中观察到该抗体的抗肿瘤作用(Goetsch 等，2009，摘要 2792，AACR 第 100 周年年会)。CE-355621 (Pfizer)是一种人IgG2，在肿瘤异种移植模型中，通过与c-Met的胞外结构域结合阻断配体结合并抑制 HGF 依赖性长生(Tseng 等，2008，J Nucl Med 49 :129)。综上所述,对几个抗c-Met产品正在进行研究,但迄今为止，尚无抗c-Met产品获准用于治疗应用。仍然需要用于治疗严重c-Met相关疾病(例如癌症)的有效安全的产品。专利技术概述本专利技术的一个目的是提供用于医药用途的新的高特异性和有效的单克隆抗C-Met抗体。本专利技术的抗体具有不同于本领域所述抗体的c-Met结合性质。在优选的实施方案中，本专利技术的抗体对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.03.10 DK PA201000191;2010.09.24 DK PA201000861.一种结合人C-Met的单克隆抗体。2.权利要求1的抗体，其中所述抗体与固定化抗体竞争结合可溶性cMetECDHis，其中所述固定化抗体含有包含SEQ ID NO:33的序列的VH区和包含SEQ ID NO:37的序列的VL 区(024)，优选其中在按实施例17中所述测定时，所述抗体与所述固定化抗体的竞争超过 50%，例如超过75%。3.权利要求2的抗体，其中所述抗体不与选自以下的抗体竞争结合可溶性 cMetECDHisa)含有包含SEQID NO:1的序列的VH区和包含SEQ ID NO: 5的序列的VL区的固定化抗体(005)，b)含有包含SEQID NO: 17的序列的VH区和包含SEQ ID NO:21的序列的VL区的固定化抗体(008)，c)包含抗体的VH区和VL区的固定化抗体，和d)含有包含SEQID NO:49的序列的VH区和包含SEQ ID NO:53的序列的VL区的固定化抗体(045),优选其中在按实施例17中所述测定时，所述抗体与所述固定化抗体的竞争小于25%， 例如小于20%。4.权利要求2的抗体，其中所述抗体与选自以下的抗体结合相同的表位a)含有包含SEQID NO:33的序列的VH区和包含SEQ ID NO:37的序列的VL区的抗体(024)b)含有包含SEQID NO:65的序列的VH区和包含SEQ ID NO:69的序列的VL区的抗体(061)c)含有包含SEQID NO:73的序列的VH区和包含SEQ ID NO:77的序列的VL区的抗体(062)d)含有包含SEQID NO:81的序列的VH区和包含SEQ ID N0:85的序列的VL区的抗体(064)e)含有包含SEQID NO:89的序列的VH区和包含SEQ ID NO:93的序列的VL区的抗体(068)f)含有包含SEQID NO:97的序列的VH区和包含SEQ ID NO: 101的序列的VL区的抗体(069)g)含有包含SEQID NO: 113的序列的VH区和包含SEQ ID NO: 117的序列的VL区的抗体⑴98)h)含有包含SEQID NO: 121的序列的VH区和包含SEQ ID NO: 125的序列的VL区的抗体(101)，和i)含有包含SEQID NO: 129的序列的VH区和包含SEQ ID NO: 133的序列的VL区的抗体(181)。5.权利要求2或4的抗体，其中所述抗体包含具有下列所示序列的VHCDR3区a)SEQ ID NO:36 (024)b)SEQ ID NO: 193，例如 SEQ ID NO: 68、76、84 或 92 所示的 VH CDR3 区(061、062、064、068)c)SEQ ID NO: 196，例如如 SEQ ID NO: 100 或 132 所示的 VH CDR3 区(069，181)d)SEQ ID NO:116 (098)，或e)SEQ ID NO: 201，例如如 SEQ ID NO: 124 所示 VH CDR3 区(101)。6.权利要求2或4的抗体，其中所述抗体含有a)包含SEQ ID NO:33、185 和 36 的 CDRl、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID NO:37、 39和206的CDRl、2和3序列的VL区，例如含有包含SEQ ID NO:34、35和36的CDRl、2和 3序列的VH区和包含SEQ ID NO:38、39和40的CDRl、2和3序列的VL区的抗体，(024)b)包含SEQ ID NO: 191、192 和 193 的 CDRl、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID NO: 78、 79和208的CDRl、2和3序列的VL区，例如含有以下的抗体a.包含SEQ ID NO: 66、67 和 68 的 CDRl、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID NO: 70、 71和72的CDRU2和3序列的VL区，(061)b.包含SEQ ID NO: 74、75 和 76 的 CDRl、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID NO: 78、 79和80的CDRl、2和3序列的VL区，(062)c.包含SEQ ID NO: 82、83 和 84 的 CDRl、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID NO: 86、 87和88的CDRl、2和3序列的VL区，(064)，或d.包含SEQ ID NO: 90、91 和 92 的 CDRl、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID NO: 94、 95和96的CDRl、2和3序列的VL区，(068)c)包含SEQ ID NO: 194、195 和 196 的 CDRl、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID NO: 209、 210和104的CDRU2和3序列的VL区，例如含有以下的抗体a.包含SEQ ID N0:98、99和100的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQ ID NO: 102、103 和 104 的 CDRl、2 和 3 序列的 VL 区，(069)，或b.包含SEQID N0:130、131和132的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQ ID NO: 134、135 和 136 的 CDRU2 和 3 序列的 VL 区，(181)d)包含SEQ ID NO: 197、198 和 116 的 CDRl、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID NO: 118、 119和211的CDRl、2和3序列的VL区，例如含有包含SEQ ID NO: 114、115和116的CDR1、 2和3序列的VH区和包含SEQ ID NO: 118、119和120的CDRU2和3序列的VL区的抗体 (098)，或e)包含SEQ ID NO: 199、200 和 201 的 CDR1、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID NO: 126、212和128的CDR1、2和3序列的VL区，例如含有包含SEQ ID NO: 122、123和124的 CDRl、2和3序列的VH区和包含SEQ ID NO: 126、127和128的CDRl、2和3序列的VL区的抗体(101)。7.权利要求2的抗体，其含有a)包含SEQID NO: 33的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 37的序列的VL区(024)b)包含SEQID NO:65的序列的VH区和优选包含SEQ ID N0:69的序列的VL区(061)c)包含SEQID NO: 73的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 77的序列的VL区(062)d)包含SEQID NO:81的序列的VH区和优选包含SEQ ID N0:85的序列的VL区(064)e)包含SEQID NO: 89的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 93的序列的VL区(068)f)包含SEQID NO:97的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 101的序列的VL区(069)g)包含SEQID NO: 113的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 117的序列的VL区h)包含SEQID NO: 121的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 125的序列的VL区 (101)i)包含SEQID NO: 129的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 133的序列的VL区 (181)j)包含SEQ ID NO: 159的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 160的序列的VL区 (078)k)包含SEQ ID NO: 161的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 162的序列的VL区 (084)1)包含SEQ ID NO: 163的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 164的序列的VL区 (063)m)包含SEQ ID NO: 165的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 166的序列的VL区 (087)n)包含SEQ ID NO: 137的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 138的序列的VL区 (066)o)包含SEQ ID NO: 139的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 140的序列的VL区 (065)p)包含SEQ ID NO: 141的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 142的序列的VL区 (082)q)包含SEQ ID NO: 143的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 144的序列的VL区 (089)，或r)所述抗体中的任一种的变体，其中所述变体在所述序列中优选具有至多1、2或3个 氨基酸修饰、更优选氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。8.权利要求1的抗体，其中-所述抗体与固定化抗体竞争结合可溶性cMetECDHis，其中所述固定化抗体含有包含 SEQ ID NO:9的序列的VH区和包含SEQ ID NO: 13的序列的VL区(006)，优选其中在按实 施例17中所述测定时，所述抗体与所述固定化抗体的竞争超过50%，例如超过75%，和-所述抗体不与固定化抗体竞争结合可溶性cMetECDHis,其中所述固定化抗体含有包 含SEQ ID NO:49的序列的VH区和包含SEQ ID N0:53的序列的VL区(045)，优选其中在按 实施例17中所述测定时，所述抗体与所述固定化抗体的竞争小于50%,例如小于25%,例如 小于20%和-所述抗体与c-Met的SEMA结构域结合，优选其中所述抗体能够抑制HGF与SEMA结 构域结合，其IC50小于10 u g/mL,例如小于2 u g/mL,如实施例9所述。9.权利要求8的抗体，其中所述抗体不与固定化抗体竞争结合可溶性cMetECDHis， 所述固定化抗体含有包含SEQ ID NO:33的序列的VH区和包含SEQ ID NO:37的序列的VL 区(024)，优选其中在按实施例17中所述测定时，所述抗体与所述固定化抗体的竞争小于 25%，例如小于20%。10.权利要求8的抗体，其中所述抗体与选自以下的抗体结合相同的表位a)含有包含SEQID NO:1的序列的VH区和包含SEQ ID NO: 5的序列的VL区的抗体(005)b)含有包含SEQID NO:9的序列的VH区和包含SEQ ID NO: 13的序列的VL区的抗体(006)c)含有包含SEQID NO:25的序列的VH区和包含SEQ ID NO:29的序列的VL区的抗体(022)，和d)含有包含SEQID NO:57的序列的VH区和包含SEQ ID N0:61的序列的VL区的抗体(058)。11.权利要求8或10的抗体，其中所述抗体含有具有下列所示序列的VHCDR3区a)SEQ ID NO: 181，例如 SEQ ID N0:4 或 12 中所示的 VH CDR3 区(005,006)b)SEQ ID NO:28 (022)，或c)SEQ ID NO:60 (058)。12.权利要求8或10的抗体，其中所述抗体含有a)包含SEQ ID NO: 179、180 和 181 的 CDR1、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID N0:6、 7和202的CDRl、2和3序列的VL区，例如含有以下的抗体a.包含SEQID N0:2、3和4的CDR1、2和3序列的VH区和包含SEQ ID N0:6、7 和8的CDRl、2和3序列的VL区，(005)，或b.包含SEQ ID NO: 10、11 和 12 的 CDR1、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID NO: 14、 15和16的CDRl、2和3序列的VL区，(006)b)包含SEQ ID NO:26、184 和 28 的 CDR1、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID NO:30, 31和205的CDRl、2和3序列的VL区，例如含有包含SEQ ID NO:26、27和28的CDRl、2和 3序列的VH区和包含SEQ ID NO: 30、31和32的CDRl、2和3序列的VL区的抗体(022)，或c)包含SEQ ID NO: 189、190 和 60 的 CDRl、2 和 3 序列的 VH 区和包含 SEQ ID NO: 62、 63和207的CDRl、2和3序列的VL区，例如含有包含SEQ ID NO:58、59和60的CDRl、2和 3序列的VH区和包含SEQ ID NO:62，63和64的CDRl、2和3序列的VL区的抗体(058)。13.权利要求8或10的抗体，其含有a)包含SEQID NO:1的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 5的序列的VL区(005)b)包含SEQID NO:9的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 13的序列的VL区(006)c)包含SEQID NO: 25的序列的VH区和优选包含SEQ ID NO: 29的序列的VL区(022)d)包含SEQID NO: 57的序列的VH区和优选包含SEQ IDNO:61的序列的VL区(058)e) (031)包含SEQIDNO: 145的序列的VH区和优选包含SEQIDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：JJ尼杰森，B德格伊，E范登布林克，AF拉布里恩，RMA赫特，J舒尔曼，P帕伦，J范德温克尔，
申请(专利权)人：根马布股份公司，
类型：
国别省市：