粘膜疫苗制造技术

本发明专利技术提供一种粘膜疫苗，其特征在于，含有以下的组成：(a)包含合成肽和脂质的AD载体，所述合成肽包含KnLm的氨基酸序列，其中，n为4-8，m为11-20；(b)羧基乙烯基聚合物；及(c)抗原蛋白，所述抗原蛋白为单独不会产生引起有效的免疫诱导和感染防御效果的量的粘膜免疫IgA及血中免疫IgG的量，所述粘膜疫苗产生引起有效的免疫诱导和感染防御效果的量的抗原特异性粘膜免疫IgA及血中免疫IgG。本发明专利技术的粘膜疫苗与现有的粘膜疫苗相比，具有更强的抗体产生能力，作为其结果，能够以极少量的抗原发挥优异的效果。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种有效诱导粘膜免疫IgA和血中免疫IgG的粘膜疫苗。
技术介绍
在专利文献I及2中，详细记载了与现有的钝化疫苗及类毒素等中的缺点、粘膜疫苗及免疫佐剂的开发有关的现状等。 如这些专利文献1、2中记载所述，广泛且深刻地认识到用在作为病毒的自然感染途径的粘膜中诱导IgA抗体产生的粘膜疫苗来代替向皮下、肌肉内等接种的现有疫苗的必要性。特别是作为21世纪的下一代疫苗，全世界均期待诱导IgA抗体的产生、局部免疫或粘膜免疫的所谓粘膜疫苗的开发和实用化，但尚未实现。本申请专利技术人等对于这样的课题，专利技术了由作为肺表面活性蛋白质B及/或肺表面活性蛋白质C与脂质的复合体的抗原药物(AD)载体(vehicle)和由该AD载体和抗原构成的粘膜疫苗，并提出了专利申请(专利文献I)。进而，本申请专利技术人等发现通过调节AD载体量(V)和抗原量㈧的重量比V/A，可以转换IgA抗体的选择性产生和IgA · IgG两抗体产生，并提出了以此为作用机制的粘膜疫苗的专利申请(专利文献2)。另外，专利文献1、2也公开了肺表面活性蛋白质B及C的片段(肽)的有效性。进而，本申请专利技术人等对肺表面活性蛋白质片段的各种变异体研究了抗体产生增强作用，结果专利技术了以合成肽KnLm(其中，η为4_8，m为11-20)为成分的AD载体和包含该AD载体和抗原的粘膜疫苗并提出了专利申请(专利文献3)，所述合成肽虽然为比专利文献1、2所公开的部分肽小的肽，但具有抗体产生的强诱导或者增强作用，特别是具有分泌型IgA抗体的单独产生、以及分泌型IgA和血中IgG两种抗体产生的优异且有效的诱导作用。另外，对采用与粘膜疫苗相同的给药经路的滴鼻剂而言，为了提高其粘度并持续发挥对于花粉症或过敏的效能，广泛使用有羧基乙烯基聚合物(CVP) (Carboxyvinylpolymer)或羟丙基纤维素(HPC)，另外，使用有以海藻酸钠为代表的增稠凝胶化剂。例如也已知有含有HPC的粘膜疫苗(专利文献4)及含有CVP的粘膜应用型疫苗制剂(专利文献5)及鼻腔内喷雾给药用流感疫苗(专利文献6)等。另外，在专利文献7中公开有一种由抗原、佐剂及增稠剂(海藻酸钠等)构成的粘膜给药用的疫苗。专利文献1:国际公开W02005/097182号公报专利文献2 :国际公开W02007/018152号公报专利文献3 :国际公开W02009/123119号公报专利文献4 :日本特开2008-231343号公报专利文献5 :国际公开W001/017556号公报专利文献6 :日本特开平03-38529号公报专利文献7 :日本特开2009-209086号公报
技术实现思路
专利技术要解决的课题专利文献3的粘膜疫苗具有强抗体产生能力，但作为粘膜疫苗的共通的问题点，具有需要比经皮注射疫苗更多的抗原。为了进行有效的疫苗治疗，相对于作为其目标的传染病的流行范围，需要充分量的疫苗，在鉴于现状的抗原生产量规模的情况下，粘膜疫苗增产很困难。因此，要求对粘膜疫苗赋予更强的抗体产生能力。本申请专利技术的课题在于提供一种改良型粘膜疫苗，所述改良型粘膜疫苗与专利文献3中记载的粘膜疫苗相比具有更强的抗体产生能力，作为其结果，能够以与经皮注射疫苗相匹敌那样的少量的抗原发挥优异的效果。用于解决课题的手段作为进一步增强专利文献3的粘膜疫苗的抗体诱导的方法，本申请专利技术人等从滴 鼻剂或粘膜应用型疫苗中使用的凝胶化剂(CVP、HPC)中，试验了作用于AD载体，增加运送至抗原呈递细胞的抗原量并对粘膜免疫IgA及血中免疫IgG的诱导效果，确认了以下内容。(I)与专利文献3的粘膜疫苗(抗原+合成肽+脂质)或专利文献5、6的粘膜疫苗(抗原+CVP)相比，由包含“抗原+合成肽+脂质+CVP”的粘膜疫苗具有特别优异的抗体诱导能力，其效果大大超过由专利文献3 (抗原+合成肽+脂质)和专利文献5、6 (抗原+CVP)的简单的组合所预测的范围。(2)与CVP同样地作为滴鼻剂或粘膜疫苗的凝胶化剂被广泛报告的HPC赋形剂在与抗原并用或者与抗原并用于AD载体的情况下，完全不具有抗体诱导能力，也无法期待诱导粘膜免疫IgA及血中免疫IgG的效果。(3)即使将抗原量减少至专利文献3的粘膜疫苗(抗原+合成肽+脂质)的需要量的约1/5以下，“抗原+合成肽+脂质+CVP”的粘膜疫苗仍然具有特别强的抗体诱导效果。本专利技术是基于以上的新见解而完成的。S卩，本专利技术为一种粘膜疫苗，其特征在于，含有以下的组成(a)包含合成肽和脂质的AD载体，所述合成肽包含KnLm(其中，η为4_8，m为11-20)的氨基酸序列；(b)羧基乙烯基聚合物；及(C)抗原蛋白，所述抗原蛋白为单独不会产生引起有效的感染防御效果的量的粘膜免疫IgA及血中免疫IgG的量，所述粘膜疫苗产生引起有效的感染防御效果的量的抗原特异性粘膜免疫IgA及血中免疫IgG。在本专利技术的粘膜疫苗中，其中，抗原蛋白(C)为即使进一步利用与AD载体(a)的组合或与羧基乙烯基聚合物(b)的组合也不会产生引起有效的感染防御效果的量的抗原特异性粘膜免疫IgA及血中免疫IgG的量。在该粘膜疫苗中的一形态中，所述合成肽为包含序列编号I或2的氨基酸序列的肽。另外，在该粘膜疫苗中的其它的方式中，脂质为卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、月桂酸、肉豆蘧酸、棕榈酸、硬脂酸及油酸中的至少一种。进一步具体而言，脂质为二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油及棕榈酸的三种脂质混合物。在该粘膜疫苗中的又一方式中，抗原包括源自病原体的钝化抗原、纯化抗原、部分纯化抗原、重组抗原或无毒化毒素、成为过敏原因的过敏原。进而，本专利技术为一种粘膜疫苗的制造方法，所述粘膜疫苗含有以下的组成(a)包含合成肽和脂质的AD载体，所述合成肽包含KnLm(其中，η为4_8，m为11-20)的氨基酸序列；(b)羧基乙烯基聚合物；及(C)抗原蛋白，所述抗原蛋白为单独不会产生引起有效的免疫诱导的量的粘膜免疫IgA及血中免疫IgG的量，所述粘膜疫苗产生引起有效的免疫诱导和感染防御效果的量的抗原特异性粘膜免疫IgA及血中免疫IgG， 所述方法的特征在于，(I)将所述(a)及(C)悬浮在水中，(2)将加温和搅拌重复I次以上，(3)进行冷冻干燥，(4)将冷冻干燥体悬浮在生理盐水中并制备成规定浓度，(5)加入所述(b)的溶液。在本专利技术中，所谓“引起有效的免疫诱导的量的粘膜免免疫IgA及血中免疫IgG”例如为血液的病毒感染抑制效果HI值为国际评价基准以上那样的量的IgA及IgG。需要说明的是，在以下的说明中，有时将包含合成肽和脂质的组合物记为“AD载体”，将包含该AD载体和所述抗原的组合物记为“粘膜疫苗”。这些“AD载体”及“粘膜疫苗”与专利文献3中所公开的载体及疫苗的实施性相同。进而，有时将在该粘膜疫苗中添加了CVP的组合物记为“CVP添加粘膜疫苗”。另外，对本申请专利技术而言，关于所述的“脂质”，含有专利文献1-3的公开内容，关于“合成肽”及“AD载体”，含有专利文献3的公开内容。专利技术效果本申请专利技术的CVP添加粘膜疫苗具有疫苗抗原特异性IgA及IgG抗体的极强的诱导效果和远远超过所诱导的抗体的国际基准的强病毒感染抑制效果(HI效果)。即使与专利文献3中记载的粘膜疫苗或者“抗原+CV本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：木户博，水野大，
申请(专利权)人：国立大学法人德岛大学，
类型：
国别省市：