本发明专利技术公开了一种HRAS基因检测特异性引物和液相芯片，该液相芯片主要包括有：每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为：针对Codon?12位点的SEQ?ID?NO.16及SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.20、和/或SEQ?ID?NO.21；针对Codon?13位点的SEQ?ID?NO.22及SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.24、和/或SEQ?ID?NO.25；和/或针对Codon?61位点的SEQ?IDNO.26及SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.29、和/或SEQ?ID?NO.30；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明专利技术所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，实现多个突变位点的野生型和突变型并行检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种HRAS基因突变检测特异性引物和液相芯片。
技术介绍
ras基因参与细胞生长和分化的调控，参与多种肿瘤的形成与发展。ras基因家族与人类肿瘤相关的特征性基因有三种，即H-ras、K-ras和N_ras，它们分别定位于11、12、I号染色体。ras族癌基因活化是某些肿瘤发生发展的分子基础，其中，点突变是ras族基因活化的重要方式，而ras族基因第12位、13位和61位密码子的点突变可使其获得转化细胞 的能力。因此对肿瘤细胞ras基因点突变的检测，对了解肿瘤的发生发展，以及监测恶性肿瘤的治疗效果具有重大意义，对临床工作具有重要指导意义。其中，HRAS(v-Ha-ras Harvey rat sarcoma viral oncogene homo log)基因定位于11号染色体，由946个腺嘌呤、2287个胞嘧啶、2113个鸟嘌呤、1107个胸腺嘧啶组成。HRAS基因突变及其突变率与地理环境条件、种族、致癌原的不同有关，有研究表明，HRAS点突变与胃癌的某些分子生物学行为相关，而且有可能成为判断胃癌患者预后的有用指标。本专利技术所开发的HRAS基因突变检测液相芯片涉及的突变位点如下表所示 基因位点__mm__密码子HRAS12-w (野生型)__GGC G12S (突变型)__AGC^ , ^ G12C (突变型) TGCCodonI2 -- G12R (突变型)__GGG G12D (突变型)__GAC G12V (突变型)GTC--- 13-w (野生型)__GGT ^ G13S (突变型) AGT CodonI3 -- G13R (突变型)__CGT__G13C (突变型)__TGT Codon6161-w (野生型)__CAG Q61K (突变型)__AAG___Q61R (突变型)__CGG Q61L (突变型)__CTG___Q61H (突变型)__CAC目前，对HRAS基因突变进行检测和分析的方法很少，主要有直接测序法和PCR-RFLP分析法，其中最常用的方法有PCR-RFLP分析法。PCR-RFLP法是基于基因突变造成的限制性内切酶识别位点的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再用限制性内切酶酶切扩增产物，电泳观察片段的大小，这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变，可直接判断基因型，但该法不能用于没有产生新酶切位点的基因突变检测。再次，以上这些方法都存在着检测通量的局限性，每次只能检测一种突变类型，不能满足实际应用的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供HRAS基因突变检测液相芯片，该液相芯片可用于单项或者并行检测HRAS基因Codon 12的正常基因型及五种突变型G12S、G12C、G12R、G12D、G12V，Codon 13的正常基因型及三种突变型G13S、G13R、G13C，以及Codon 61的正常基因 型及四种突变型Q61K、Q61R、Q61L、Q61H。实现上述目的的技术方案如下一种HRAS基因突变检测液相芯片，包括有(A).针对HRAS基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为针对Codon 12位点的SEQ ID NO. 16以及SEQ ID NO. 17、SEQ IDNO. 18,SEQ IDN0. 19,SEQ ID NO. 20 和 SEQ ID NO. 21 中的一种以上;针对 Codon 13 位点的SEQ ID NO. 22 以及 SEQ ID NO. 23、SEQ ID NO. 24 和 SEQ ID NO. 25 中的一种以上；和 / 或针对 Codon 61 位点的 SEQ ID NO. 26 以及 SEQ ID NO. 27、SEQ ID NO. 28、SEQ ID NO. 29 和SEQ ID NO. 30中的一种以上；所述tag序列选自SEQ ID NO.1 SEQ ID NO. 15 ；(B).有ant1-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述ant1-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述ant1-tag序列选自SEQ ID NO. 31 SEQ ID NO. 45，且所述ant1-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；(C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。优选地，所述扩增引物为针对HRAS基因Codon 12和/或Codon 13位点的SEQ IDNO. 46 及 SEQ ID NO. 47 ;和 / 或针对 Codon 61 位点的 SEQ ID NO. 48 及 SEQ ID NO. 49。优选地，所述ASPE引物为:针对Codon 12位点的由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO. 16组成的序列以及由SEQ ID NO. 2及SEQ ID NO. 17组成的序列、由SEQ ID NO. 3和SEQ IDNO. 18组成的序列、由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 19组成的序列、由SEQ ID NO. 5和SEQ IDNO. 20组成的序列、和/或由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 21组成的序列；针对Codon 13位点的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 22组成的序列以及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 23组成的序列、由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 24组成的序列、和/或由SEQ ID NO. 10和SEQ IDNO. 25组成的序列；和/或针对Codon 61位点的由SEQ ID NO. 11和SEQ ID NO. 26组成的序列以及由 SEQ ID NO. 12 和 SEQ IDN0. 27 组成的序列、由 SEQ ID NO. 13 和 SEQ ID NO. 28组成的序列、由SEQ ID NO. 14和SEQ IDN0. 29组成的序列、和/或由SEQ ID NO. 15和SEQID NO. 30组成的序列。本专利技术的另一目的是提供用于HRAS基因突变检测的特异性引物。实现上述目的的技术方案如下用于HRAS基因突变检测的特异性引物，其为所述特异性引物序列为针对Codon12位点的 SEQ ID NO. 16 以及 SEQ ID NO. 17、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 19、SEQ ID NO. 20和 SEQ ID NO. 21 中的一种以上；针对 Codon 13 位点的 SEQ ID NO. 22 以及 SEQ ID NO. 23、SEQ IDN0. 24 和 SEQ ID NO. 25 中的一种以上；和 / 或针对 Codon 61 位点的 SEQ ID NO. 26以及 SEQ IDN0. 27、SEQ ID NO. 28、SEQ ID NO. 29 和 SEQ ID NO. 30 中的一种以上。本专利技术的主要优点在于1.本专利技术所提供的检测方法与测序法的吻合率高达100%。且检测所需要的时间远远低于常用的测序技术，特别符合实际应用需本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种HRAS基因突变检测液相芯片，其特征是，包括有：(A).针对HRAS基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物：每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对Codon?12位点的SEQ?ID?NO.16以及SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.18、SEQ?IDNO.19、SEQ?ID?NO.20和SEQ?ID?NO.21中的一种以上；针对Codon?13位点的SEQ?ID?NO.22以及SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.24和SEQ?ID?NO.25中的一种以上；和/或针对Codon?61位点的SEQ?ID?NO.26以及SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.29和SEQ?ID?NO.30中的一种以上；所述tag序列选自SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.15；(B).有anti?tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti?tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti?tag序列选自SEQ?ID?NO.31～SEQ?ID?NO.45，且所述anti?tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；(C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：许嘉森，吴诗扬，
申请(专利权)人：广州益善生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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