本发明专利技术公开了一种用于降解脐橙囊衣微生物的培养基及酶制剂的制备方法。其中，该制备方法包括：采用保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC?NO:M?2012160的黑曲霉C-2（Aspergillus?sp.C-2）作为发酵菌株，经过液体深层发酵或固态发酵培养制备得到降解脐橙囊衣酶制剂。采用本发明专利技术的技术方案，以脐橙囊衣粉或脐橙皮果渣为碳源的培养基对本发明专利技术中的微生物进行培养制备酶制剂，制得的酶制剂不仅降解脐橙囊衣效果明显，还利用脐橙果渣发酵产酶，变废为宝，既提高了脐橙产业的附加值，有保护了环境，具有经济和社会双重意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程
，具体而言，涉及一种。
技术介绍
我国柑橘加工长期沿袭着人工剥皮和酸碱脱囊衣等传统工艺生产。现有酸碱法脱囊衣的酸碱处理法主要有经典酸碱二步法、改良重酸二步法、磷酸盐NaOH —步法，以及EDTA或Na2-EDTA (乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠)为助剂的低碱去囊衣法。人工去皮和酸碱脱囊衣工艺存在劳动密集、生产效率低、产品质量不稳定等问题。目前工业化罐头生产脱囊衣耗水量大，每吨产品耗水量达60 80吨，不仅增加产品成本，而且加剧了饮用水 资源的短缺。同时，因大量使用碱，产生大量的工业碱液废水，增加了产品的生产成本，也污染环境，影响了产品的安全性，容易遭遇技术壁垒和绿色壁垒，削弱了我国柑橘罐头工业在国际市场的竞争优势。同时，在柑橘加工生产中产生了约占柑橘加工量30%左右的皮渣，通常都被丢弃掉，不仅造成资源浪费，也给环境带来了污染。脐橙加工中脱囊衣工艺是其主要技术难点之一。目前橙汁胞的生产技术主要采用传统柑橘罐头酸碱处理的工艺，存在人工剥皮、分瓣，生产效率低；酸碱囊衣用水量大，环境污染严重，产品安全性低；由于柑橘皮与脐橙皮结构的差异，导致现有的柑橘酶法去囊衣技术不适合于脐橙橙汁胞的加工。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种，以高效地制备降解脐橙囊衣微生物的酶制剂。根据本专利技术的一个专利技术，提供一种降解脐橙囊衣酶制剂的制备方法。该制备方法包括采用保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC N0:M 2012160的黑曲霉C-2 (Aspergillus sp. C_2)作为发酵菌株，经过液体深层发酵或固态发酵培养制备得到降解脐橙囊衣酶制剂。进一步地，液体深层发酵或固态发酵培养之前进一步包括活化、制备孢子悬浮液、种子培养的步骤。进一步地，活化包括将黑曲霉C-2接种于活化培养基中进行活化，活化培养基的pH值为7. 0 7. 2，活化温度控制在28°C 30°C，活化时间为I 2天；其中，活化培养基为以脐橙囊衣粉为碳源的固体斜面培养基，包括如下含量的组分(NH4)2SO4 2g/L 2. 5g/UMgSO4 0. 6g/L Ig/L,K2HPO4 lg/L 2g/L、NaCl lg/L 2g/L、脐橙囊衣粉 6g/L IOg/L和琼脂15g/L 20g/L，并且在121°C温度下灭菌30min制得活化培养基。进一步地，制备孢子悬浮液的步骤包括采用无菌水洗下黑曲霉C-2的孢子，并稀释至2 3X IO6个/mL制得孢子悬浮液，并将孢子悬浮液保存在4°C备用。进一步地，种子培养包括将孢子悬浮液接种于种子液体培养基中，控制种子液体培养基的pH值为7. O 7. 2，培养温度控制在28°C 30°C，200r/m培养12 16h ;或将孢子悬浮液接种于种子固体培养基中，控制种子固体培养基的初始PH值为6. 5，培养温度控制在28V 30°C，培养48h ;其中，种子液体培养基为以脐橙囊衣粉为碳源的培养基，包括如下含量的组分=(NH4)2SO4 2g/L 2. 5g/L、MgSO4 0. 6g/L lg/L、K2HPO4 lg/L 2g/L、NaCl lg/L 2g/L、脐橙囊衣粉或脐橙皮果渣15g/L 20g/L ;并且在121°C温度下灭菌30min制得种子液体培养基。进一步地，液体深层发酵培养的步骤包括将经过种子培养的含黑曲霉C-2的种子液体培养基接种于发酵瓶中进行深层发酵培养，发酵培养条件为12h内温度为30°C，12h 后 28°C ；pH 值为 7. 0 7. 2 ;压力位 0. 06MPa 0. 08MPa ;搅拌速度 12h 内 180r/m, 12h后200r/m ;通气量1:1. 0 1. 5 ;发酵时间108 120h,制得酶制剂。进一步地，固态发酵培养的步骤包括经过种子培养的含黑曲霉c-2的种子固体培养基接种入固态发酵培养基中，30°C培养108h，得到黑曲霉C-2固态发酵曲，固态发酵曲通过低温干燥及粉碎后制得酶制剂，或通过0. 5mol/L pH=6. 5磷酸缓冲液中浸提获得酶制剂；其中，固态发酵培养基通过以下方法制备将麦麸95重量份、脐橙果渣或脐橙果皮粉180重量份、硫酸铵2重量份、硫酸镁0. 5重量份、磷酸氢二钾I重量份加入水拌匀并调节水分湿度为60%，得固态发酵培养基。进一步地，包括将酶制剂经过超滤、浓缩制得浓缩酶制剂，或将酶制剂制备成粉剂或颗粒剂。根据本专利技术的另一个方面，提供一种用于降解脐橙囊衣微生物的培养基，培养基为以脐橙囊衣粉或脐橙皮果渣为碳源。进一步地，包括如下含量的组分(NH4)2SO42g/L 2. 5g/L、MgSO4 0. 6g/L Ig/L^K2HPO4lg/L 2g/L、NaCl lg/L 2g/L、脐橙囊衣粉 6g/L 10g/L 和琼脂 15g/L 20g/L，并且在121°C温度下灭菌30min制得培养基。进一步地，包括如下含量的组分(NH4)2SO42g/L 2. 5g/L、MgSO4 0. 6g/L Ig/ L、K2HPO4lg/L 2g/L、NaCl lg/L 2g/L、脐橙囊衣粉或脐橙皮果渣15g/L 20g/L ;并且在121°C温度下灭菌30min制得培养基。采用本专利技术的技术方案，以脐橙囊衣粉或脐橙皮果渣为碳源的培养基对本专利技术中的微生物(保藏号为CCTCCN0:M 2012160，保藏日为2012年5月7日)进行培养制备酶制剂，制得的酶制剂不仅降解脐橙囊衣效果明显，还利用脐橙果渣发酵产酶，变废为宝，既提高了脐橙产业的附加值，有保护了环境，具有经济和社会双重意义。具体实施例方式需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本专利技术。根据本专利技术一种典型的实施方式，提供一种降解脐橙囊衣微生物。该微生物的保藏名称为黑曲霉C-2(Aspergillus sp. C-2)，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC N0:M 2012160，保藏日为2012年5月7日。本专利技术的降解脐橙囊衣微生物是通过以下步骤筛选获得的从腐烂脐橙表面、土壤等样品中筛选目标菌株，然后经过紫外诱变后，通过反复的筛选获得对脐橙囊衣具有高效降解作用的菌株。本专利技术的准用菌株经鉴定为黑曲霉C-2 (Aspergillus sp.C-2)，其主要生物学特征为在固体培养基上，培养3d 5d，菌落蔓延迅速，初为白色，后变成褐色直至黑色厚绒状，背面无色或中央略带黄褐色。分生孢子头褐黑色放射状，分生孢子梗长短不一。顶囊球形，双层小梗。分生孢子褐色球形。顶部形成球形顶囊，其上全面覆盖一层梗基和一层小梗，小梗上长有成串褐黑色的球状，直径2. 5 4. O Pm。分生孢子头球状，直径700 800 ym，褐黑色。分生孢子头褐黑色放射状，分生孢子梗长短不一。分生孢子梗自基质中伸出长约I 3mm,壁厚而光滑。根据本专利技术一种典型的实施方式，提供一种降解脐橙囊衣酶制剂。该酶制剂采用上述降解脐橙囊衣微生物制得。由于该降解脐橙囊衣酶制剂不涉及酸碱的大量使用，通过生物酶解作用进行脐橙囊衣的脱除，因此可大大提升生产效率、减少脐橙果破碎率、使产品质量稳定，并且能够降低生产成本，无残留、绿色环本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种降解脐橙囊衣酶制剂的制备方法，其特征在于，采用保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC?NO:M?2012160的黑曲霉C?2作为发酵菌株，经过液体深层发酵或固态发酵培养制备得到所述降解脐橙囊衣酶制剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵良忠，尹乐斌，李文，伍桃英，肖凯，郭育齐，周小虎，蒋琼华，周晓洁，
申请(专利权)人：湖南李文食品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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