本发明专利技术涉及一种新的环维黄杨星D纯化方法。采用介孔硅胶表面分子印迹固定相作为填料。所说的介孔硅胶主要由四乙氧基硅烷、模板剂、酸、盐、共溶剂和1，3，5-三甲苯经溶胶-凝胶法一步共缩聚制得。该介孔硅胶具有较大的孔径(10-20nm)。所说的表面印迹主要以该介孔硅胶为载体，采用接枝共聚方法合成得到以环维黄杨星D为模板分子的介孔硅胶表面印迹固定相。将该介孔硅胶表面分子印迹固定相填入色谱柱中，用于环维黄杨星D原料药的纯化，可得到高纯度的环维黄杨星D。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药原料药的纯化方法。
技术介绍
环维黄杨星D是心血管疾病药物黄杨宁的有效成分。2010版中国药典虽然规定环维黄杨星D原料含量不得少于99%，但由于药典收载的环维黄杨星D的含量测定采用的是非水滴定。而该方法只能测定总生物碱含量。同时由 于环维黄杨星D与其他黄杨生物碱结构相似，色谱行为相近，分离不易，纯化困难。因此目前市售的环维黄杨星D原料的实际含量仅为55 85%。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的环维黄杨星D纯化方法。本专利技术的技术解决方案以孔径在10_20nm的介孔硅胶为载体，采用接枝共聚方法制备介孔硅胶表面印迹固定相。将此固定相用于环维黄杨星D的分离纯化。本专利技术公开了包括介孔硅胶的制备方法、介孔硅胶表面印迹固定相的制备方法以及基于介孔硅胶表面印迹固定相的新的环维黄杨星纯化方法。介孔硅胶的制备方法—室温下，称取适量三嵌段聚合物P123和氯化铵，加入去离子水、乙醇和浓盐酸的混合溶液中，室温搅拌使之完全溶解得到澄清透明溶液；——将适量1，3，5_三甲苯滴加到上述反应液中，在35°C搅拌10小时；—在剧烈搅拌下，滴加四乙氧基硅烷到上述反应液中，35°C继续搅拌15分钟。-将上述反应液转移至不锈钢聚四氟反应爸中，35°C静置水热反应24小时后再90°C反应24小时；—趁热过滤，分别用乙醇、去离子水充分洗涤，90°C常压干燥10小时；——550°C高温煅烧6小时除去模板剂。介孔硅胶表面印迹的制备方法—介孔硅胶的活化。将介孔硅胶置于浓盐酸和去离子水混合溶液中，125°C回流12小时，用去离子水洗至中性，100°C真空干燥24小时。—介孔硅胶的衍生化。称取适量上述活化后的介孔硅胶，加入乙醇，去离子水，搅拌，滴加Y_(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷，氮气保护下50°C反应24小时。冷却后过滤，分别用乙醇、去离子水洗涤，室温真空干燥24小时。-介孔娃胶表面印迹固定相的合成。取一定量干燥后的环维黄杨星D对照品、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯溶解于氯仿中，氮气保护下搅拌30分钟，加入适量引发剂偶氮二异丁腈超声使溶解，通氮气5分钟备用。称取适量上述衍生化后的介孔硅胶，加入上述混合溶液，氮气保护下搅拌15分钟后50°C引发聚合8小时。反应结束后，过滤，将所得的介孔硅胶表面印迹固定相在索氏提取器中用甲醇乙酸=4I的混合溶剂反复提取48小时以除去环维黄杨星D模板分子，最后用甲醇洗涤，50°C真空干燥24小时即得。环维黄杨星D纯化方法采用匀浆装柱法将上述介孔硅胶表面印迹固定相填充于不锈钢色谱柱(50_X4.6mm，1. D.)。采用高效液相色谱仪，运用蒸发光散射检测器，采用梯度洗脱。甲醇中醋酸体积百分数在10分钟内由0%变为0.5%。环维黄杨星D原料药溶于甲醇后泵入色谱柱，梯度洗脱进行分离纯化，分段收集再浓缩、结晶、烘干即得高纯度的环维黄杨星D。本专利技术的优点在于纯化环维黄杨星D的过程简单，分离效能好，纯化得到的环维黄杨星D纯度可达90%以上，易于实现商品化。附图说明图1是本专利技术所用固定相的载体——介孔硅胶的扫描电镜图片图2是本专利技术所用固定相的载体一介孔硅胶的N2吸附-解吸附3是本专利技术所用固定相的载体——介孔硅胶的孔径分布曲线图4是本专利技术所用固定相的载体——介孔硅胶进行衍生化后的红外谱5是本专利技术用于纯化环维黄杨星D的色谱6是本专利技术用于纯化环维黄杨星D，环维黄杨星D纯度检查色谱图具体实施例方式实施例1介孔硅胶的制备室温下，称取P1230. 5021g、氯化铵0. 24g置于50ml圆底烧瓶，依次加入去离子水15ml、乙醇2ml和浓盐酸3ml，搅拌使之混合均匀得到澄清透明溶液。剧烈搅拌下滴加1，3，5-三甲苯450ul，35°C搅拌10小时。滴加四乙氧基硅烷1150ul至上述反应液中，35°C剧烈搅拌15分钟。将反应液转移至不锈钢聚四氟反应釜中于35°C静置24小时，再将温度升至90°C静置24小时。趁热过滤，再分别用乙醇、去离子水充分洗涤，90°C常压干燥10小时，550°C高温煅烧6小时除去模板剂即得，该材料具有球形形貌，见图1。其氮气吸附-解吸附图谱见图2，具有典型的IV曲线，证明其具有介孔。其孔径分布曲线见图3，证明其孔径集中分布在10nm，BJH法计算得到的平均孔径为14. 7nm。实施例2介孔硅胶表面印迹的制备称取介孔硅胶4. 05g，置于250ml圆底烧瓶中，加入体积比1:1的浓盐酸和去离子水的混合溶液200ml，125°C回流12小时，用去离子水洗至中性，100°C真空干燥24小时得到活化的介孔硅胶。称取活化后的介孔硅胶3. 02g，置于IOOml三颈瓶中，加入去离子水25ml和乙醇25ml，搅拌，滴加Y _(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷5. 5ml。氮气保护下50°C反应24小时。冷却后过滤，分别用乙醇、去离子水洗涤，室温真空干燥24小时即得衍生化后的介孔硅胶。红外表征结果见图4，由图可知，衍生化后的硅胶在1701CHT1出现羰基峰，在1361cm—1出现双键吸收峰，证明Y_(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷成功接枝到活化后的介孔娃胶表面。称取干燥后的环维黄杨星D对照品190mg置于250ml三颈瓶中，依次加入氯仿80ml、甲基丙烯酸170ul、乙二醇二甲基丙烯酸酯1. 5ml，氮气保护下搅拌30分钟，加入引发剂偶氮二异丁腈20mg超声使溶解，通氮气5分钟备用。称取上述衍生化后的介孔硅胶2g置于另一 250ml三颈瓶中，加入上述混合溶液，氮气保护下，室温搅拌15分钟后50°C引发聚合8小时。反应结束后，过滤，将所得产物在索氏提取器中用甲醇乙酸=4 I的混合溶剂反复提取48小时以除去环维黄杨星D模板分子，最后用甲醇洗涤，50°C真空干燥24小时即得介孔硅胶表面印迹固定相。实施例3取实施例2制备的表面印迹介孔硅胶，采用匀浆法填装于不锈钢柱管 (50mmX 4. 6mm,1. D.),装柱压力为35MPa,并米用此自制柱进行环维黄杨星D分离纯化试验(见图5)。纯化后的样品通过检测证实纯度由65%提升到98% (见图6)。权利要求1.一种新的环维黄杨星D纯化方法，其特征在于环维黄杨星D的纯化过程采用了以介孔硅胶为载体，并以环维黄杨星D为模板分子的表面印迹固定相。2.按权利要求1所述的介孔硅胶，其结构特征在于介孔硅胶的孔径在10-20nm之间。3.按权利要求1所述的介孔硅胶，其结构特征在于介孔硅胶是球形颗粒。4.按权利要求1所属的介孔硅胶的制备方法，其特征在于采取了如下步骤 —室温下，称取适量三嵌段聚合物P123和氯化铵，加入去离子水、乙醇和浓盐酸的混合溶液中，室温搅拌使完全溶解得到澄清透明溶液； ——将适量1，3，5_三甲苯滴加到上述反应液中，在35°C搅拌10小时； ——在剧烈搅拌下，滴加适量四乙氧基硅烷到上述反应液中，35°C继续搅拌15分钟。—将上述反应液转移至不锈钢聚四氟反应釜中，35 °C静置水热反应24小时后再90°C反应24小时； —趁热过滤，分别用乙醇、去离子水充分洗涤，90°C常压干燥10小时； ——550°C高温煅烧6小时除去模板剂。5.按权利要求1所属的介孔硅胶表面印迹固定相的制备方法，其特征在于采取了如下步骤 —介孔硅胶的活化。将介孔硅胶置于浓盐酸和去本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种新的环维黄杨星D纯化方法，其特征在于：环维黄杨星D的纯化过程采用了以介孔硅胶为载体，并以环维黄杨星D为模板分子的表面印迹固定相。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：狄斌，蓝娟，苏梦翔，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：
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