一种植物体内莽草酸含量检测试剂盒包含：（1）A剂：莽草酸提取剂，为HCl溶液；（2）B剂：氧化剂，为高碘酸与偏高碘酸钾混合液；（3）C剂：显色剂，为NaOH和Na2SO3混合液；（4）D剂：莽草酸标准液，是莽草酸标准样品的盐酸溶液。把待测样品0.5g左右剪碎，放入5mL血清瓶中，然后向瓶中加入2ml的A剂，盖上瓶盖后浸提90min，期间每隔0.5小时晃动1次，成为待测浸提液。向96孔比色板的每个孔中加入100μL的B剂，然后加入25μL待测浸提液，室温下反应60min后加入100μL的C剂，然后用酶标仪在波长380nm下测定吸光值。从D剂中分别取0，0.01，0.1，1，5，10，50μL，加入A剂定容至1.0mL，然后在波长380nm下测定吸光值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物内莽草酸含量的测定新方法，尤其是莽草酸含量检测试剂盒。
技术介绍
莽草酸-(3，4，5-三羟基-1-环已烯-1-羧酸)是自然界中存在的一种重要的有机酸，在生物的代谢途径中，莽草酸代谢是其中的重要途径之一，这种代谢方式存在于大量高等植物与微生物中。莽草酸代谢，就是以莽草酸为中间物质，在生物体内进一步合成分解，生成其它化合物，植物体中固定的碳大约20%来自于莽草酸途径，莽草酸是植物代谢过程的中间产物。莽草酸过去是用来作为化工原料合成其它化学物质或化学制剂。然而目前瑞士罗氏公司利用莽草酸合成抗流感药物磷酸奥司他韦(达菲)的原料。“达菲”是世界卫生组织推荐的防治高致病性禽流感药物，也是目前唯一证实有效治疗禽流感药物。有关莽草酸的药理作用，除了最受关注的抗禽流感病毒的作用外，还具有其它2个作用(1)抗菌、抗肿瘤作用；(2)对心血管系统的作用，即莽草酸具有抑制凝血系统而发挥抗血栓形成作用。从植物中提取莽草酸是目前获取天然莽草酸的主要途径之一。因此，对植物体内莽草酸含量的检测可明确不同植物体内莽草酸含量的高低，从而为有目的选择莽草酸含量较高的植物进行提取提供必要的理论依据。此外，农业生产中化学除草剂草甘膦的主要作用机理是抑制杂草体内莽草酸合成途径的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)的活性，进而导致杂草体内莽草酸的积累。在明确除草剂草甘膦的作用原理和杂草对草甘膦抗药性方面，也常常把检测杂草体内莽草酸含量做为一项重要的生理指标。因此，利用莽草酸检测试剂盒可以方便、快速检测植物体内莽草酸的含量，在医药和农业生产中将具有重要的作用。专利技术内容目前莽草酸含量的测定大都采用高效液相色谱法，操作程序复杂，测定中所用药品及仪器设备价格昂贵，因此检测费用较高。在我们的科学研究中，经过大量的研究找到了以显色反应为基本原理的莽草酸测定试剂，并研制成为测定试剂盒。试剂盒包含=(I)A剂莽草酸提取剂，为0. 25 M的HCl溶液；(2)B剂氧化剂，为0. 25%高碘酸与0. 25%偏高碘酸钾混合液；(3)C剂显色剂，为0.6 mo I L-1的NaOH和0. 22 mo I L-1的Na2SO3混合液；(4)D剂莽草酸标准液，是莽草酸标准样品的盐酸溶液。具体实施例方式(I)样品中莽草酸含量的测定把待测样品0. 5g左右剪碎，放入5mL血清瓶中，然后向瓶中加入2 ml的A剂，盖上瓶盖后浸提90 min，期间每隔半小时晃动I次，成为待测浸提液。向96孔比色板的每个孔中加入IOOii L的B剂,然后加入25 u L待测浸提液，室温下反应60 min后加入100 U L的C剂，然后用酶标仪在波长380 nm下测定吸光值，每个样品重复测定3次。(2)标准曲线的配制:从D剂中分别取0，0.01，0. 1,1,5,10,50 U L，用A剂定容至I. O mL,然后在波长380 nm下测定吸光值。结果计算从标准曲线上查得每毫升提取液所含莽草酸的微克数。计算公式莽草酸含量(U g /g) =C V M—1 式中C一每毫升提取液含的莽草酸，单位为ii g/mL ； V一提取液的总体积，单位为mL ； M—样品质量，单位为g ； 利用莽草酸含量检测试剂盒可以实现莽草酸含量的快速测定，经过多年的研究和在科研中的应用表明在除草剂草甘膦处理抗性杂草后，采用莽草酸测定试剂盒与高效液相色谱法进行莽草酸含量测定比较，结果表明两种测定方法所得结果无显著差异(测定结果见表I )，证明莽草酸测定试剂盒可准确测定植物体内莽草酸含量，但与高效液相色谱法相比莽草酸测定试剂盒检测费用低、方法更简便、快速。表I莽草酸含量检测方法对比权利要求1.莽草酸测定试剂盒，A剂莽草酸提取剂，为HCl溶液；B剂氧化剂，为高碘酸与偏高碘酸钾混合液；C剂显色剂，为NaOH和Na2SO3混合液；D剂莽草酸标准液，是莽草酸标准样品的盐酸溶液。全文摘要一种植物体内莽草酸含量检测试剂盒包含(1)A剂莽草酸提取剂，为HCl溶液；(2)B剂氧化剂，为高碘酸与偏高碘酸钾混合液；(3)C剂显色剂，为NaOH和Na2SO3混合液；(4)D剂莽草酸标准液，是莽草酸标准样品的盐酸溶液。把待测样品0.5g左右剪碎，放入5mL血清瓶中，然后向瓶中加入2ml的A剂，盖上瓶盖后浸提90min，期间每隔0.5小时晃动1次，成为待测浸提液。向96孔比色板的每个孔中加入100μL的B剂，然后加入25μL待测浸提液，室温下反应60min后加入100μL的C剂，然后用酶标仪在波长380nm下测定吸光值。从D剂中分别取0，0.01，0.1，1，5，10，50μL，加入A剂定容至1.0mL，然后在波长380nm下测定吸光值。文档编号G01N1/28GK102980866SQ201210484219公开日2013年3月20日 申请日期2012年11月26日 优先权日2012年11月26日专利技术者丁伟, 程茁, 戴航宇, 刘燕 申请人:东北农业大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
莽草酸测定试剂盒，A剂：莽草酸提取剂，为HCl溶液；B剂：氧化剂，为高碘酸与偏高碘酸钾混合液；C剂：显色剂，为NaOH和Na2SO3混合液；D剂：莽草酸标准液，是莽草酸标准样品的盐酸溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：丁伟，程茁，戴航宇，刘燕，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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