一种嗜热链球菌复合抗冻因子制造技术

本发明专利技术公开了一种嗜热链球菌复合抗冻因子，以质量份数计，包括以下组分：甜菜碱0.1～0.4份、氯化钠3～5份、甘露糖0.5～3份和碳酸钙0.1～0.4份。本发明专利技术从培养基的角度，在培养基中添加抗冻因子，以促进冻干保护物质的形成和积累或转化为其他物质，抑制冻干过程中共晶现象的发生，这类保护性物质的积累，可以改变嗜热链球菌的细胞膜脂肪酸的组成，甚至诱导抗冻蛋白的产生，从而提高菌体在冻干及贮存过程中的抗冷冻能力及菌体存活率。

【技术实现步骤摘要】
一种嗜热链球菌复合抗冻因子
本专利技术属于嗜热链球菌抗冻
，涉及一种嗜热链球菌复合抗冻因子。
技术介绍
嗜热链球菌通常被用来制作乳酸菌种，它是酸奶生产中制备发酵剂的常用乳酸菌种之一，酸奶的产品质量与发酵剂质量的优劣密切相关。作为一种对人体有明显食疗作用的有益菌，它的开发利用一直得到国内外乳品界的高度重视。目前嗜热链球菌菌粉的制备主要采用真空冷冻干燥技术。真空冷冻干燥是生产商品化乳酸菌发酵剂的一项关键技术。但嗜热链球菌如果直接进行冷冻干燥，不可避免地会造成部分细胞的死亡或损伤，对生产十分不利，从而造成发酵剂的活力明显下降。影响乳酸菌冻干效果的因素有很多，如菌株、细胞大小及形状、初始菌悬液浓度、培养基组成、培养条件、保护剂、预冻条件、冻干条件等，其中培养基组成是一个关键因素。
技术实现思路
本专利技术解决的问题在于提供一种嗜热链球菌复合抗冻因子，将该复合抗冻因子添加到培养基中培养嗜热链球菌之后，可提高菌体的抗冷冻能力，可以提高嗜热链球菌的冻干存活率。本专利技术是通过以下技术方案来实现一种嗜热链球菌复合抗冻因子，以质量份数计，包括以下组分甜菜碱O. I O. 4份、氯化钠3 5份、甘露糖O. 5 3份和碳酸I丐O. I O. 4份。进一步的，以质量份数计，包括以下组分甜菜碱O. 2 O. 4份、氯化钠3 4. 5份、甘露糖I. 5 2. 5份和碳酸I丐O. 3 O. 35 份。所述嗜热链球菌复合抗冻因子加入到嗜热链球菌培养基之后，各组分的浓度分别为甜菜碱O. I O. 4g/L、氯化钠3 5g/L、甘露糖O. 5 3g/L和CaCO3O. I O. 4g/L。一种嗜热链球菌的冷冻保存方法，包括以下步骤I)以质量份数计，按照以下组分配制成复合抗冻因子甜菜碱O. I O. 4份、氯化钠3 5份、甘露糖O. 5 3份和碳酸I丐O. I O. 4份；2)将复合抗冻因子配制成溶液，微孔滤膜除菌后添加至无菌的M17培养基中， 使得各组份的浓度分别为甜菜碱O. I O. 4g/L、氯化钠3 5g/L、甘露糖O. 5 3g/L和 CaCO3O. I O. 4g/L ；然后接种嗜热链球菌，培养18h后，离心收集菌体；3)用生理盐水清洗菌体，离心，再无菌生理盐水重悬菌体配制成菌悬液，将菌悬液与保护剂按照I :0. 8 I. 2的体积比均匀混合，静置20 30min后装于冻干管中， 在-35 _40°C下预冻至少12h后，于温度为-50 _56°C、真空度为4 6Pa的条件下冻干 24h;4)最后，用生理盐水将嗜热链球菌复溶。所述的保护剂以水为溶剂，包括脱脂奶粉150 180g/L、海藻糖10 20g/L、甘油 O. 2 I. Og/L和抗坏血酸O. 2 I. Og/Lo与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果本专利技术提供的嗜热链球菌复合抗冻因子，从培养基的角度，在培养基中添加抗冻因子，以促进冻干保护物质的形成和积累或转化为其他物质，抑制冻干过程中共晶现象的发生，这类保护性物质的积累，可以改变嗜热链球菌的细胞膜脂肪酸的组成，甚至诱导抗冻蛋白的产生，从而提高菌体在冻干及贮存过程中的抗冷冻能力及菌体存活率。在培养基中添加本专利技术的复合抗冻因子后，可以使嗜热链球菌的冻干存活率最高达73. 5%，而如果没有添加该复合抗冷冻因子，则菌体在冷冻干燥过程中的存活率最高仅 49.5%。与不添加复合抗冻因子相比，存活率提高了 1.4倍多，具有显著的效果。具体实施方式本专利技术提供一种嗜热链球菌复合抗冻因子，将该复合抗冻因子添加到培养基中培养嗜热链球菌之后，可提高菌体的抗冷冻能力，可以提高嗜热链球菌的冻干存活率。下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。一种嗜热链球菌复合抗冻因子，以质量份数计，包括以下组分甜菜碱O. I O. 4份、氯化钠3 5份、甘露糖O. 5 3份和碳酸I丐O. I O. 4份。进一步，以质量份数计，包括以下组分甜菜碱O. 2 O. 4份、氯化钠3 4. 5份、甘露糖I. 5 2. 5份和碳酸I丐O. 3 O. 35 份。嗜热链球菌复合抗冻因子加入到嗜热链球菌培养基之后，各组分的浓度分别为 甜菜碱O. I O. 4g/L、氯化钠3 5g/L、甘露糖O. 5 3g/L和CaCO3O. I O. 4g/L。实施例I :按质量配比将复合抗冻因子配制成溶液，将微孔滤膜除菌的复合抗冷冻因子添加至无菌的M17培养基中，然后接种嗜热链球菌，培养18h，然后以转速为5000r/min离心 IOmin,收集菌体；用生理盐水清洗菌体2次，离心弃去上清液；用无菌生理盐水将菌体配制成 6±0. 5X101(lCfu/mL菌悬液后，按照体积比为I : I将菌悬液与保护剂(脱脂奶粉150g/L+海藻糖10g/L+甘油+抗坏血酸O. 2g/L)均匀混合，然后，静置20-30min后装于冻干管中，装样高度 O. 3-0. 5cm ；接着放入-35 _40°C的冰箱中预冻24h后，移转入真空冷冻干燥机中，于温度为_56°C，真空度为4-6Pa的条件下冻干24h ;最后，用生理盐水复溶，M17固体培养基计数， 测定菌粉活性和菌体存活率。添加不同配比的复合抗冻因子，发酵得到的菌体进行冻干活菌率的验证结果如表 I所示表I添加不同配比的复合抗冷冻因子及对应的存活率本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种嗜热链球菌复合抗冻因子，其特征在于，以质量份数计，包括以下组分：甜菜碱0.1～0.4份、氯化钠3～5份、甘露糖0.5～3份和碳酸钙0.1～0.4份。

【技术特征摘要】
1.一种嗜热链球菌复合抗冻因子，其特征在于，以质量份数计，包括以下组分 甜菜碱0. I 0. 4份、氯化钠3 5份、甘露糖0. 5 3份和碳酸I丐0. I 0. 4份。2.如权利要求I所述的嗜热链球菌复合抗冻因子，其特征在于，以质量份数计，包括以下组分 甜菜碱0. 2 0. 4份、氯化钠3 4. 5份、甘露糖I. 5 2. 5份和碳酸钙0. 3 0. 35份。3.如权利要求I所述的嗜热链球菌复合抗冻因子，其特征在于，嗜热链球菌复合抗冻因子加入到嗜热链球菌培养基之后，各组分的浓度分别为甜菜碱0. I 0. 4g/L、氯化钠3 5g/L、甘露糖 0. 5 3g/L 和 CaCO3O. I 0. 4g/L。4.一种嗜热链球菌的冷冻保存方法，其特征在于，包括以下步骤 1)以质量份数计，按照以下组分配制成复合抗冻因子 甜菜碱0. I 0. 4份、氯化钠3 5份、甘露糖0. 5 3份和碳酸I丐0...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈合，李串娜，舒国伟，王勇，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：