本发明专利技术涉及一种薏仁多糖的制备方法，步骤如下：先将薏仁粉碎、过筛后，经脱脂、水浴提取、离心、酶解、浓缩、醇沉、真空冷冻干燥沉淀得薏仁粗多糖；再将制得的薏仁粗多糖溶解得薏仁粗多糖溶液，经过脱蛋白、脱色、透析和离子交换柱层析得薏仁纯化多糖，再经过真空冷冻干燥得白色粉末，即为薏仁多糖。本发明专利技术制备方法是通过水提醇沉法提取得到薏仁粗多糖，再经过脱蛋白，脱色，透析和离子交换柱层析得薏仁纯化多糖，再经过真空冷冻干燥得白色粉末薏仁多糖，制备方法方法简单，薏仁多糖的利率高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于营养与免疫领域，涉及多糖的提取，尤其是一种薏仁多糖的制备方法与应用。
技术介绍
薏米(Coix)别名薏苡仁、米仁、薏珠子、菩提子、芑实、解蠡等，广泛地种植于亚洲、非洲和地中海周边的温暖地区。喜生于湿润地区，但能耐涝耐旱。薏米的干燥成熟种仁叫做薏仁，薏仁质坚实，断面白色，粉性，气微，味微甜，薏仁通过烘烤或加工成薏米粉食用。薏米的种仁能入药治病。李时珍在《本草纲目》中记载薏仁能“健脾益胃，补肺清热，去风渗湿。炊饭食，治冷气。煎饮，利小便热淋。”它含有丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物和多种氨基酸、维生素、无机盐，其中主要的功能性成分是脂肪和糖类。在传统的中药中作为一种利尿剂、抗炎药物、抗癌药物、镇痛剂和一种营养物。研究表明薏仁中含有大量脂肪酸包括棕榈酸、硬脂酸、十八碳二烯酸、硬脂酸、油酸、亚油酸等，其中含有的寡聚糖具有DPPH自由基清除能力和脂质抗氧化能力。薏仁组份已被证实具有降血糖，提高免疫力等作用。多糖是一类天然大分子化合物，由10个以上单糖基通过苷键连接而成。通常多糖由几百个或几千个单糖聚合而成，是多分散分子，没有明确的分子量，只能有一个平均分子量，其性质已完全不同于单糖，多糖具有明显的种属特异性，结构规则庞大，有宏观(颗粒大小)不均一性，是一类高分子多聚物，具有复杂的生物活性和功能，其中部分多糖具有抗肿瘤机制表现在多糖能够直接抑制肿瘤细胞生长；多糖抑制肿瘤细胞的蛋白质和核酸合成；多糖诱导肿瘤细胞凋亡。通过检索，未发现与本专利申请相关的专利公开文献。
技术实现思路
本应用的目的在于克服现有技术的不足，提供一种原料来源广泛、价格低廉、方法简单的薏仁多糖的制备方法，同时也提供了由该制备方法制备得到的薏仁多糖的应用。本专利技术实现目的的技术方案是一种薏仁多糖的制备方法，其特征在于步骤如下⑴薏仁粗多糖的提取将薏仁粉碎、过筛后，分别用乙酸乙酯和石油醚脱脂后，按料液比g :g为1:20-30加入蒸馏水中并调节PH到5. 2，85-951水浴提取3-511 ;提取后趁热，取上清液冷却，酶解去淀粉，然后在3，000r/min下离心9_llmin，得上清液；上清液浓缩后，加入2-4倍浓缩液体积的95%冰乙醇沉淀过夜，得沉淀，沉淀经真空冷冻干燥，得薏仁粗多糖；⑵薏仁粗多糖的纯化将步骤⑴中制得的薏仁粗多糖加水溶解，得薏仁粗多糖溶液，经过脱蛋白、脱色、透析和离子交换柱层析得薏仁纯化多糖，再经过真空冷冻干燥得白色粉末，即为薏仁多糖。而且，所述步骤⑴中酶解去淀粉的具体步骤如下按酶上清液的比例为20IU/g加淀粉酶到上清液中，水浴温度60°C、pH7. 0去淀粉直到碘检不变色；然后按酶上清液的比例为18IU/g加糖化酶，在水浴温度50°C 60°C，pH6. 5条件下处理0. 5-1. 5h ;100°C水浴条件下灭酶8-llmin。而且，所述步骤⑵中脱蛋白的具体步骤如下向薏仁粗多糖溶液中加入1/3粗多糖溶液体积的Sevage试剂,剧烈震荡30min,3，000r/min离心15min,除去变形蛋白沉淀,水相重复上述操作至没有变性蛋白沉淀产生。而且，所述步骤⑵中脱色的具体步骤如下使用浓氨水调节脱蛋白后的薏仁粗多糖溶液pH至pH8.0，再滴加质量百分数30%H202至浅黄色，于50°C水浴保温2h。而且，所述步骤⑵中的透析的条件为用截留相对分子质量为8，000-14, 000的透析袋流水透析2d。而且，所述步骤⑵中的离子交换柱材料为DEAE-52纤维素柱材料。如上所述的薏仁多糖的制备方法所制备得到的薏仁多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。如上所述的薏仁多糖的制备方法所制备得到的薏仁多糖在制备诱导细胞凋亡药物中的应用。而且，所述薏仁多糖的作用浓度为300ii g/mL。本专利技术的优点和有益效果为I、本专利技术制备方法是通过水提醇沉法提取得到薏仁粗多糖，再经过脱蛋白，脱色，透析和离子交换柱层析得薏仁纯化多糖，再经过真空冷冻干燥得白色粉末薏仁多糖，制备方法方法简单，薏仁多糖的利率高。2、本专利技术制备方法使用的薏仁，价格低廉、来源广泛，不仅扩大了薏仁的使用范围、为以后薏仁的研究提供了依据，提高了农副产品的应用价值，而且对研究多糖类物质抗肿瘤具有积极的意义。3、本专利技术制备方法制备得到的薏仁多糖处理人非小细胞肺癌细胞A549细胞实验表明薏仁多糖能够A549细胞产生凋亡小体，造成S期阻滞，通过Annexin V-FITC和PI染色发现薏仁多糖造成A549细胞凋亡率显著上升，通过单细胞凝胶电泳实验发现处理后的A549产生典型的凋亡型彗星图案，同时薏仁多糖使细胞内的caspase_3、caspase_9基因和相应蛋白的相对表达量上调，从而表明薏仁多糖能够诱导人非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡。因此，制备得到的薏仁多糖可以应用于制备抗肿瘤药物中，同时，也可以应用于制备诱导细胞凋亡药物中。附图说明图I为本专利技术电子扫描显微镜观察细胞形态图，其中，图1-1为正常细胞，图1-2为处理后细胞；图2为本专利技术流式细胞仪检测细胞周期图；其中，图2-1为正常细胞，图2-1为处理后细胞；图3为本专利技术Annexin V-FITC检测细胞凋亡率图；其中，图3_1为正常细胞，图3-2为处理后细胞；图4为本专利技术激光共聚焦显微镜检测彗星实验图；其中，图4-1为正常细胞，图4-2为处理后细胞；图5为本专利技术RP-PCR检测caspase-3和caspase-9基因的相对表达量图；图6为本专利技术Western blotting检测caspase-3和caspase-9蛋白的相对表达量图。具体实施例方式下面通过具体实施例对本专利技术作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本专利技术的保护范围。本专利技术的主要思想为以薏仁为原料，通过水提醇沉法提取薏仁粗多糖，再经过纯化得到薏仁多糖，将所得到的薏仁多糖作用于非小细胞肺癌细胞A549细胞，观察薏仁多糖诱导A549细胞凋亡作用。本专利技术利用薏仁多糖处理人非小细胞肺癌细胞A549细胞实验表明薏仁多糖能够A549细胞产生凋亡小体，造成S期阻滞，通过Annexin V-FITC和PI染色发现薏仁多糖造成A549细胞凋亡率显著上升，通过单细胞凝胶电泳实验发现处理后的A549产生典型的凋亡型彗星图案，同时薏仁多糖使细胞内的caspase-3、caspase-9基因和相应蛋白的相对表达量上调，从而表明薏仁多糖能够诱导人非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡。一、一种薏仁多糖的制备方法，步骤如下I、薏仁粗多糖提取(I)挑选籽粒饱满、色泽洁白、无虫蛀、无霉斑的薏仁置于超微粉碎机中，粉碎过40目筛；(2)使用乙酸乙酯(料液比为1:1044)在801条件下采用索氏提取法脱脂811和石油醚(料液比为l:10，g:g)在70°C条件下采用索氏提取法脱脂6h，置于三角瓶中，将脱脂后的薏仁粉末按料液比为1:20-30 (g:g)加入蒸馏水中并用盐酸调节pH到5.2，于水浴锅中90°C提取4h ；(3)酶解提取后趁热离心，取上清液冷却，按20IU/g加淀粉酶到提取液中水浴温度60°C，pH 7. 0去淀粉直到碘液检测不变色；接着按18IU/g加糖化酶，水浴温度5(T60°C，pH 6. 5处理Ih，得酶解液；(4)将酶解液于100°C水浴条件下灭酶lOmin，然后在30本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种薏仁多糖的制备方法，其特征在于：步骤如下：⑴薏仁粗多糖的提取：将薏仁粉碎、过筛后，分别用乙酸乙酯和石油醚脱脂后，按料液比g：g为1:20?30加入蒸馏水中并调节pH到5.2，85?95℃水浴提取3?5h；提取后趁热，取上清液冷却，酶解去淀粉，然后在3,000r/min下离心9?11min，得上清液；上清液浓缩后，加入2?4倍浓缩液体积的95%冰乙醇沉淀过夜，得沉淀，沉淀经真空冷冻干燥，得薏仁粗多糖；⑵薏仁粗多糖的纯化：将步骤⑴中制得的薏仁粗多糖加水溶解，得薏仁粗多糖溶液，经过脱蛋白、脱色、透析和离子交换柱层析得薏仁纯化多糖，再经过真空冷冻干燥得白色粉末，即为薏仁多糖。
【技术特征摘要】
1.一种薏仁多糖的制备方法，其特征在于步骤如下 ⑴薏仁粗多糖的提取 将薏仁粉碎、过筛后，分别用乙酸乙酯和石油醚脱脂后，按料液比g :g为1:20-30加入蒸馏水中并调节PH到5. 2，85-95°C水浴提取3_5h ;提取后趁热，取上清液冷却，酶解去淀粉，然后在3，000r/min下离心9_llmin，得上清液；上清液浓缩后，加入2-4倍浓缩液体积的95%冰乙醇沉淀过夜，得沉淀，沉淀经真空冷冻干燥，得薏仁粗多糖； ⑵薏仁粗多糖的纯化将步骤⑴中制得的薏仁粗多糖加水溶解，得薏仁粗多糖溶液，经过脱蛋白、脱色、透析和离子交换柱层析得薏仁纯化多糖，再经过真空冷冻干燥得白色粉末，即为薏仁多糖。2.根据权利要求I所述的薏仁多糖的制备方法，其特征在于所述步骤⑴中酶解去淀粉的具体步骤如下 按酶上清液的比例为20IU/g加淀粉酶到上清液中，水浴温度60°C、pH7. 0去淀粉直到碘检不变色；然后按酶上清液的比例为18IU/g加糖化酶，在水浴温度50°C 60°C，pH6. 5条件下处理0. 5-1. 5h ;100°C水浴条件下灭酶8-llmin。3.根据权利要求I所述的薏仁多糖的制备方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：卢相义，刘薇，罗成，李贞景，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：
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