本发明专利技术提供了诱导未成熟树突细胞(DC)成熟以及致敏这些细胞以诱导1型免疫应答的组合物和方法。本发明专利技术还提供了可用于激活及用于制备朝产生1型细胞因子和/或1型应答极化的T细胞的树突细胞群。同样地，提供了激活的、极化的T细胞群以及制备它们的方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
引发单核树突细胞和T细胞TH-1应答的组合物和方法本申请是申请日为2002年9月6日、申请号为02819817. 4、专利技术名称为“引发单核树突细胞和T细胞TH-I应答的组合物和方法”的专利技术专利申请的分案申请。专利技术背景 抗原呈递细胞(APC)在引发有效的免疫应答方面很重要。它们不仅将抗原呈递给具有抗原特异性T细胞受体的T细胞，而且提供T细胞激活所必需的信号。这些信号仍未完全解释清楚，但包括许多细胞表面分子以及细胞因子或生长因子。原初或未极化T细胞激活所必需的因子可能与记忆T细胞再激活所必需的因子有所不同。APC呈递抗原和递送T细胞激活信号的能力通常被描述为辅佐细胞功能。虽然单核细胞和B细胞已被证明是感受态(competent)的APC，但它们在体外的抗原呈递能力似乎局限于先前致敏T细胞的再激活。因此，它们不能够在功能上直接地激活原初或未致敏T细胞群。树突细胞(DC)是被认为能够激活原初和记忆T细胞的免疫系统中的专职抗原呈递细胞。越来越多的离体制备树突细胞用于免疫治疗，特别是癌症的免疫治疗。制备具有最佳免疫刺激性质的树突细胞需要理解并运用这些细胞离体培养的生物学。培养这些细胞的多种方案已有描述，并附有各方案的多种优点。近来的方案包括无血清培养基的利用，以及赋予培养细胞预定的免疫刺激性质的成熟条件的使用。树突细胞的成熟是将表型上与皮肤朗格汉斯细胞(Langerhans cell)相似的未成熟DC转化为成熟的、能够迁移到淋巴结的抗原呈递细胞的过程。这个过程导致未成熟树突细胞所特有的强抗原摄取能力的丧失，以及共刺激细胞表面分子和多种细胞因子表达的上调。已知的成熟方案是以据信DC在暴露于抗原期间或之后所遇到的体内环境为基础的。这个方法最好的例子是使用单核细胞条件性培养基(MCM)作为细胞培养基。MCM通过培养单核细胞体外产生，并用作为成熟因子的来源。MCM中参与成熟的主要成分据报道是(原)炎症细胞因子白细胞介素10 (IL-1 P )、白细胞介素6 (IL-6)以及肿瘤坏死因子a (TNFx)。其它成熟因子包括前列腺素E2(PGE2)、多聚-dldC、血管活性肠肽(VIP)、细菌脂多糖(LPS)以及分枝杆菌或分枝杆菌成分，例如特定胞壁组份。完全成熟的树突细胞在质量上和数量上都不同于未成熟DC。完全成熟的DC表达较高水平的MHC I类和II类抗原，以及T细胞共刺激分子，即⑶80和⑶86。这些变化增强了树突细胞激活T细胞的能力，因为它们通过T细胞共刺激分子对应物，例如象CD28，增加了细胞表面的抗原密度以及T细胞激活信号的数量级。此外，成熟DC产生大量细胞因子，其刺激并指导T细胞应答。其中的两个细胞因子是白细胞介素IO(IL-IO)和白细胞介素12(IL-12)。这些细胞因子对诱导的T细胞应答方向具有相反的影响。IL-10产物导致诱导Th-2型应答，而IL-12产物导致Th-I型应答。后一种应答在期望细胞免疫应答的情况下，例如，举例来说，在癌症免疫疗法中尤为需要。Th-I型应答导致细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的诱导和分化，它们是细胞免疫系统的效应臂(effector arm)。该效应臂在抵抗肿瘤生长方面最为有效。IL-12也诱导天然杀伤(NK)细胞的生长，并具有抗血管生成活性，这两者都是有效的抗肿瘤武器。因此，利用产生IL-12的树突细胞在理论上最适用于免疫刺激。某些树突细胞成熟因子，例如，举例来说，细菌脂多糖、细菌CpGDNA、双链RNA和⑶40配体据报道诱导未成熟DC产生IL-12并致敏未成熟DC产生Th-I型应答。相反，抗炎分子例如IL-10、TGF-P、PGE-2和皮质类固醇抑制IL-12产生，并致敏细胞产生Th_2型应答。最近报道通过干扰素Y与某些树突细胞成熟因子，例如细菌脂多糖(LPS)和⑶40的组合增进树突细胞的IL-12产生。不过，LPS和CD40都具有在成熟期间诱导小量IL-12的已知能力。因此，有可能添加IFNy仅仅是增进产生。干扰素Y信号传导利用Jak2-Statl途径，包括它在迁往细胞核之前Statl701位酪氨酸残基的酪氨酸磷酸化以及继发的干扰素Y响应基因转录增强。不过，对人单核细胞来源的树突细胞的信号转导途径知之甚少。干扰素Y在这些细胞中的作用机制尚未确定。目前称为卡介苗(BCG)的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的减毒牛菌株(牛分枝杆菌Mycobacterium bovis)已被用于癌症免疫疗法。在一个例子中，膀胱内给药活BCG被证明可有效治疗膀胱癌，尽管这种治疗的机制尚不知晓。BCG给药的效果被假定是通过诱导攻击，例如，癌细胞的免疫应答介导的。BCG在这一应答中的特定作用被认为是广义免疫反应诱导子的作用，而且具有将肿瘤抗原呈递给免疫系统的佐剂功能。还发现BCG是树突细胞的强有力成熟因子，具有上调成熟标志⑶83的能力。BCG还能够上调MHC分子以及共刺激分子⑶80和⑶86，伴随着内吞能力的下降。此外，已报道BCG或BCG-来源的脂阿拉伯甘露聚糖(Iipoarabidomannan)增进细胞因子的产生,虽然与其它DC成熟因子所发现的结果相反，发现IL-12的产生是被特异性抑制的。后面的这种性质，即抑制IL-12产生，降低了利用BCG来成熟树突细胞，用于期望强烈细胞介导的细胞毒性应答(Th-I应答)的免疫疗法的吸引力。因此，BCG在主动免疫疗法中的应用，具有诱导树突细胞成熟的潜力。不过，(仍然)需要诱导这种树突细胞成熟、同时又提供广泛免疫刺激，并致敏那些树突细胞产生具有强烈细胞毒性T细胞应答的I型(Th-I)免疫应答的组合物和利用这种组合物的方法。专利技术概述本专利技术提供了利用同时提供广泛免疫刺激的因子(即BCG)，诱导未成熟树突细胞(DC)成熟，并致敏那些细胞产生抗原特异性细胞毒性T细胞应答的方法和组合物。在一方面，提供了产生成熟树突细胞群的方法，包括提供未成熟树突细胞；并使未成熟树突细胞与有效浓度的BCG和干扰素Y (IFNy)在适于未成熟树突细胞成熟的培养条件下接触，以形成成熟树突细胞群。成熟树突细胞群比在成熟期间未与BCG和IFNy接触的未成熟树突细胞群产生升高的白细胞介素12:白细胞介素10比例。未成熟树突细胞在与BCG和IFNy接触之前或期间可与预定抗原接触。预定抗原可以是，例如，肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、病毒抗原、细菌抗原、肿瘤细胞、细菌细胞、表达抗原的重组细胞、细胞裂解物、膜制备物、重组制备的抗原、肽抗原(如，合成的肽抗原)或者分离的抗原。在某些实施方案中，该方法可选地进一步包括分离单核树突细胞前体；并在分化因子存在下培养该前体，以形成未成熟树突细胞。合适的分化因子包括，例如，GM-CSF、白细胞介素4、GM-CSF和白细胞介素4的组合、或者白细胞介素13。单核树突细胞前体可以分离自人类受试者。在特别的实施方案中，成熟树突细胞产生的IL-12: IL-10的比例为至少1:1。在另一方面，提供了制备成熟树突细胞群的方法。该方法一般包括提供未成熟树突细胞；并使未成熟树突细胞与有效量的BCG和干扰素Y (IFNy)在适于未成熟树突细胞成熟的培养条件下接触，以形成成熟树突细胞群。所得的成熟树突细胞群产生I型免疫应答。未成熟树突细胞在与本文档来自技高网...
【技术保护点】
在动物中产生1型免疫应答的组合物，其包含：产生比白细胞介素10多的白细胞介素12的激活的T细胞，其中通过以下步骤体外产生激活的T细胞：提供未成熟树突细胞；使未成熟树突细胞与有效量的卡介苗和干扰素γ以及预定抗原在适于未成熟树突细胞成熟的培养条件下接触以形成成熟树突细胞群；使成熟树突细胞与原初T细胞接触，以形成产生比白细胞介素10多的白细胞介素12的激活的T细胞。
【技术特征摘要】
2001.09.06 US 60/317,5921.在动物中产生I型免疫应答的组合物，其包含 产生比白细胞介素10多的白细胞介素12的激活的T细胞，其中通过以下步骤体外产生激活的T细胞 提供未成熟树突细胞； 使未成熟树突细胞与有效量的卡介苗和干扰素Y以及预定抗原在适于未成熟树突细胞成熟的培养条件下接触以形成成熟树突细胞群； 使成熟树突细胞与原初T细胞接触，以形成产生比白细胞介素10多的白细胞介素12的激活的T细胞。2.权利要求I的组合物，其中预定抗原是肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、病毒抗原、细菌抗原、肿瘤细胞、细菌细胞、表达抗原的重组细胞、细胞裂解物、膜制备物、重组制备的抗原、肽抗原或者分离的抗原。3.权利要求I的组合物，其中...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·L·博施，
申请(专利权)人：西北生物治疗药物公司，
类型：发明
国别省市：
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