检测呋喃它酮代谢物的化学发光试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种检测呋喃它酮代谢物的化学发光试剂盒。该试剂盒包括：96孔化学发光板、呋喃它酮代谢物（AMOZ）标准品溶液、酶标抗体浓缩液、酶标抗体稀释液、化学发光液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、衍生化试剂、自封袋、盖板膜、说明书和质检报告。采用间接竞争CELIA方法，在发光板微孔中预包被AMOZ偶联抗原，样本中含有的AMOZ将和包被AMOZ偶联抗原竞争结合抗AMOZ抗体，加入发光液，测量各孔发光强度值，再与标准曲线比较计算出相应浓度值再乘以其样品前处理的稀释倍数，即可得出样品中AMOZ的残留量。与仪器分析技术相比具有使用方便、灵敏度高等特点，可在动物组织中AMOZ的残留量检测中发挥重要作用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及检测呋喃它酮代谢物(AMOZ)残留量的化学发光试剂盒(CLEIA)，特别是检测畜禽组织(肌肉、肝脏)和水产品AMOZ残留量的CLEIA试剂盒。技术背景 呋喃它酮属于硝基呋喃类抗菌药，在临床上主要用于鸡白痢、鸡大肠杆菌病、鸡球虫病等各种肠道感染性疾病的治疗及用作猪、禽类和水产促生长的添加剂。但有关研究证明，呋喃它酮及其代谢物具有相当大的毒性和副作用，能诱导有机体基因突变及致畸胎，且能诱发癌症。欧盟早在1990年就颁布2377/90/EEC条例，将硝基呋喃类药物及其代谢物列为A类禁用药，规定其在动物源性食品中的最高残留量为l.Oyg/kg。1995年起欧盟、日本、美国等开始禁止这类抗菌剂在食用的畜禽及水产动物中使用，并严格执行对输入的食用鱼、虾及禽类进行残留检测。中国农业部2002年2月发布《食品动物禁用的兽药及其他化合物清单》中，明文禁止在所有食品动物的所有用途中使用硝基呋喃类药物。但是，由于其价格便宜，药效好，在很多国家还在继续违规使用。为了保障人民健康及扩大与世界各国动物源性食品贸易往来，必须对动物源性食品中呋喃它酮进行检测。由于呋喃它酮在体内很快就能被代谢，而在组织中结合的代谢产物(AMOZ)则能存留较长的一段时间，所以药残监测部门经常以检测其代谢产物-AMOZ为手段达到检测呋喃唑酮残留的目的。目前，呋喃它酮检测方法主要有微生物法、色谱法、免疫分析法等。微生物法是测定抗生素残留的经典方法，具有前处理简单、经济、批量大等优点，但精确度、准确度和特异性不高。色谱法应用较普遍，精确度和灵敏度高，但因其流程繁琐、设备昂贵、检测速度慢等原因，很难实现现场检测和普及推广。酶联免疫检测法具有简单、快速、处理样本量大、灵敏度较高、特异性强等诸多优点，被广泛应用于残留检测，但在实践中很容易出现各种各样的问题，如加样时间是否一致，洗板是否彻底，加样量是否一致等，导致易出现假阳性结果等缺点。基于化学发光强度和被测物含量之问的关系建立的分析方法叫化学发光分析法。化学发光免疫分析包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光免疫检测方法具有特异性强、稳定快速、检测范围宽、操作简单自动化程度高、试剂稳定且有效期长(6 18个月)等优点，其检测限比酶联免疫法和理化检测方法高几个数量级。本研究旨在建立AMOZ残留化学发光酶联免疫检测试剂盒，为拥有自主知识产权检测产品技术的开发奠定基础。
技术实现思路
本技术所要解决的问题是提供一种小巧轻便的AMOZ残留量检测试剂盒，其操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，需要的技术含量不高，可进行一次连续多个样品中AMOZ残留量的测定，减少了检测样本所需要的时间。本技术的技术方案是一种检测AMOZ残留量的化学发光酶联免疫试剂盒，包括盒体和盒内的一块96孔的化学发光板、14瓶试剂，化学发光板是采用96孔试剂板作为固相载体，在微孔中预包被呋喃它酮代谢物偶联抗原制成的检测板；14瓶试剂分别为7瓶呋喃它酮代谢物标准品溶液、酶标抗体浓缩液、酶标抗体稀释液、化学发光液A液、化学发光液B液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、衍生化试剂。检测AMOZ残留量的化学发光酶联免疫试剂盒还包括一张盖板膜、放置试剂的15个下凹瓶位、一个自封袋、一份说明书和一份质检报告；盖板膜是塑料硬膜；标准品溶液、酶标AMOZ抗体浓缩液、酶标AMOZ抗体稀释液、化学发光液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液用塑料瓶盛放，衍生化试剂用玻璃瓶盛放，下凹瓶位 由塑料泡沫制成；盒体是硬纸盒。化学发光板是由外框支撑架及放置其上的可拆的12条化学发光反应微孔条组成，每个可拆装化学发光反应微孔条有8个反应孔，每个反应孔预包被呋喃它酮代谢物偶联抗原，96孔试剂板为不透明的聚苯乙烯化学发光板，放于真空铝钼袋内；盖板膜大小与化学发光板横切面大小一致；将14瓶试剂用不同大小、不同颜色的试剂瓶盛装并固定在下凹瓶位中与酶标板、盖板膜、自封袋、说明书、质控报告一同封装在硬纸盒内，以便于携带和运输。14瓶试剂分别为标准品溶液7瓶，ImL/瓶；浓缩酶标抗体I瓶，ImL ;酶标抗体稀释液I瓶，7mL ;化学发光液A液I瓶，8mL ;化学发光液B液I瓶，8mL ;浓缩洗涤液I瓶，40mL ；浓缩复溶液I瓶，50mL ;衍生化试剂I瓶，15mg。每一个试剂盒中的试剂足够进行96次测定(包括标准分析孔)，既可进行一次连续多个样品的检测，也可以将板孔拆开多次检测。将剩下的放回铝箔袋中并用自封袋密封，这样可以保证试剂盒检测结果的准确性。检测时，样本中含有的AMOZ将和包被AMOZ偶联抗原竞争结合抗AMOZ抗体，加入发光液，测量各孔发光强度值，再与标准曲线比较计算出相应浓度值再乘以其样品前处理的稀释倍数，即可得出样品中AMOZ的残留量。其操作简便易行。经实验表明本试剂盒具有很高的灵敏度畜禽组织(肌肉、肝脏)和水产品样本的最低检测限为O. Ing/mL，回收率为85± 15%，相对于其他AMOZ检测方法，本试剂盒所需仪器较少，所需成本较低。本技术的有益效果是能快速、简便、灵敏、准确地用于动物组织中呋喃它酮代谢物残留量的检测。附图说明图I为本技术化学发光板的侧面纵剖面图(长为8. 55cm)；图2为本技术化学发光板的侧面横剖面图(长为12. 8cm)；图3为本技术化学发光板的俯视图；图4为本技术盖板膜平面图；图5为本技术试剂瓶纵剖面平面图；图6为本技术固定泡沫模具的俯视图；图7为本技术盒体与固定泡沫模具的侧视图。参见附图化学发光反应微孔条(2)预包被AMOZ偶联抗原(3)固定于化学发光板的外框支撑架(I)上，化学发光反应微孔条(2)可随要求拆卸；盖板膜(4)用于化学发光板置水浴或恒温箱内反应时封盖化学发光反应微孔条(2);半透明塑料试剂瓶(5)分别用于封装40mL浓缩洗涤液和50mL复溶工作液；黑色塑料试剂瓶(6)分别用于封装8mL化学发光液A液和8mL化学发光液B液，棕色玻璃试剂瓶(6)分别用于封装15mg衍生化试剂——2-硝基苯甲醛，白色塑料试剂瓶(7)分别用于封装ImL酶标抗体和7mL酶标抗体稀释液，白色塑料试剂瓶(8)分别用于封装ImL/瓶的标准品溶液；泡沫塑料模具(10)有15个瓶位，放置位置依次为40mL浓缩洗涤液瓶位(18)，50mL浓缩复溶液(11)，8mL化学发光液A液瓶位(14)，8mL化学发光液液B液瓶位(13)，15mg衍生化试剂瓶位(12)，ImL酶标AMOZ抗体浓缩液瓶位(16)，7mL酶标AMOZ抗体稀释液瓶位(15)，7瓶ImL/瓶各种浓度的标准品溶液瓶位(17)，盒体为(9)是硬纸盒。具体实施方式具体实施例一样本的前处理I、配液配液I :衍生化试剂向装有2-硝基苯甲醛的试剂瓶中加IOmL甲醇溶解混匀。配液2 :0. lmol/L磷酸氢二钾溶液称取22. 8g三水合磷酸氢二钾加入IL去离子水溶解混匀。配液3 lmol/L盐酸溶液量取8. 3mL浓盐酸加入去离子水定容至100mL。配液4 lmol/L氢氧化钠溶液称取4. Og氢氧化钠加IOOmL去离子水溶解混匀。配液5 :复溶工作液用去离子水将2 X浓缩复溶液按I :1体积比进行稀释(I份2X浓缩复溶液+1份去离子水)用于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测呋喃它酮代谢物的化学发光试剂盒，其特征在于：包括盒体和盒内的一块96孔的化学发光板、14瓶试剂，化学发光板是采用96孔试剂板作为固相载体，在微孔中预包被呋喃它酮代谢物偶联抗原制成的检测板，14瓶试剂分别为7瓶呋喃它酮代谢物标准品溶液、酶标抗体浓缩液、酶标抗体稀释液、化学发光液A液、化学发光液B液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、衍生化试剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，万宇平，陶光灿，罗晓琴，聂雯莹，韩京朋，冯月君，罗贵昆，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：