用于检测BMPR2基因突变的引物组、该引物组的用途及包含该引物组的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了用于检测BMPR2基因突变的引物组，至少包括BMPR2基因第1至第13外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子中任一区域对应的PCR扩增引物组和PCR测序引物组。本发明专利技术还公开了所述引物组的用途、包含所述引物组的试剂盒以及使用所述引物组对BMPR2基因进行PCR扩增方法。所述的引物组可以专一性鉴别BMPR2基因是否突变，确保了测定结果的准确性和唯一性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及引物，具体涉及用于检测BMPR2基因突变的引物组，本专利技术还涉及该引物组的用途，以及包含该引物组的试剂盒。
技术介绍
肺动脉高压是各种原因引起的静息状态下右心导管测得的肺动脉平均压（mean pulmonary arterial pressure，mPAP）≥25mmHg的一组临床病理生理综合征。肺动脉高压可以作为一种疾病而独立存在，更常见的是很多疾病进展到一定阶段的病理生理表现。由于肺血管重塑引起肺循环血流动力学改变，最终可导致右心衰竭，甚至死亡。这是一种极度恶性的疾病，七成多患者是年轻人，几乎每个人都知道癌症愈后差，但没有人知道肺动脉高压是一种极度恶性疾病，它的病因复杂、发病率高、误诊率高、危害性强，其愈后是灾难性的，可以说，这种病就是心血管疾病中的癌症。这种疾病平均发病年龄是36岁，75%患者集中于20-40岁年龄段，还有15%患者年龄在20岁以下，几岁的孩子也会发病。世界上该病的发病率在1×10-5～1×10-6之间，其中约6%为家族性的。多数家族性肺动脉高压和超过26%的散发病例都伴有骨形成蛋白Ⅱ型受体基因（Bone morphogenetic protein receptorⅡgene，BMPR2）序列改变。BMPR2存在大量不同的突变，但其临床表现和病理学特征与散发例完全一致。因此采用DNA检测寻找BMPR2基因突变有助于识别家系中高风险的成员，以及未出生孩子的患病风险，这对提高人口素质，优生优育有重要的意义。对于散发性病人进行BMPR2基因突变检测，对指导用药，基因评估具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种用于检测BMPR2基因突变的引物组。BMPR2基因第1到第13外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子中的任一区域在结构上发生碱基对组成或排列顺序的改变，都视为BMPR2基因发生了突变。因而，根据BMPR2基因第1至第13外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子分别设计出能专一性鉴别BMPR2基因是否突变的特异性引物组，可通过PCR扩增和测序测定BMPR2基因上述区域是否发生改变，以鉴定BMPR2基因是否发生突变，因此，本专利技术的用于检测BMPR2基因突变的引物组可以是BMPR2基因第1至第13外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子中任一区域对应的引物组。本专利技术第一个目的提供的用于检测BMPR2基因突变的引物组，包括BMPR2基因第1到第13外显子区，3’UTR、5’UTR和启动子中任一区域对应的PCR扩增引物组，即选自BMPR2基因第1到第13外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子分别对应的PCR扩增引物组，具体地，所述引物组选自BMPR2基因的第1外显子区(Exon1)的PCR扩增引物组、第2外显子区(Exon2)的PCR扩增引物组、第3外显子区(Exon3)的PCR扩增引物组、第4外显子区(Exon4)的PCR扩增引物组、第5外显子区(Exon5)的PCR扩增引物组、第6外显子区(Exon6)的PCR扩增引物组、第7外显子区(Exon7)的PCR扩增引物组、第8外显子区(Exon8)的PCR扩增引物组、第9外显子区(Exon9)的PCR扩增引物组、第10外显子区(Exon10)的PCR扩增引物组、第11外显子区(Exon11)的PCR扩增引物组、第12外显子区(Exon12)的PCR扩增引物组、第13外显子区(Exon13)的PCR扩增引物组、3’UTR的PCR扩增引物组、5’UTR的PCR扩增引物组和启动子的PCR扩增引物组中的任意一组，所述的上述各PCR扩增引物组为表1所示。表1：BMPR2基因PCR扩增引物序列本专利技术所述的引物组还包括BMPR2基因第1到第13外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子中任一区域对应的PCR测序引物组，具体地，所述引物组包括选自BMPR2基因第1到第13外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子分别对应的PCR测序引物组中的任意一组。本专利技术所述的PCR测序引物组如表2所示。表2：BMPR2基因PCR测序引物序列本专利技术的第二个目的是提供使用上述PCR扩增引物组在制备通过PCR扩增自生物样品获得核酸样品检测BMPR2基因是否突变的试剂中的用途。所述PCR扩增反应包括第一阶段反应和第二阶段反应，其中，(1)第一阶段反应：包括11个扩增循环反应，其条件为：变性：温度98~94°C，退火：起始温度为62°C，每两次扩增循环退火温度递减0.5°C，直至扩增循环结束，延伸：温度为72°C，(2)第二阶段反应：包括24个扩增循环反应，其条件为：变性：温度94~95°C，退火：温度为57°C，延伸：温度68~72°C。本专利技术中所述的PCR扩增反应中每20μl的反应体系中使用0.2~1μl的各引物和10~100ng模板DNA。本专利技术PCR扩增方法还包括PCR产物纯化步骤，所述产物纯化的条件为37°C孵育60min，70°C10min。本专利技术的目的之三是提供一种用于检测BMPR2基因突变的试剂盒，以方便采用DNA测序技术检测导致肺动脉高压发病的BMPR2基因是否突变。本专利技术的第三个目的是通过以下技术方案来实现的：一种用于检测BMPR2基因突变的试剂盒，包括BMPR2基因的第1至第13外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子分别对应的PCR扩增引物组中的一组或两组以上的PCR扩增引物组，PCR扩增引物组为表1所示。本专利技术所述的试剂盒还包括如表2所示的BMPR2基因的第1至第13外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子分别对应的PCR测序引物组中的一组或两组以上的PCR测序引物组。本专利技术还包括常规PCR扩增试剂、PCR产物纯化试剂和DNA测序试剂。所述的PCR扩增试剂包括dNTP、Taq DNA聚合酶等。所述的PCR产物纯化试剂包括SAP酶、ExoI酶等。所述的DNA测序试剂包括BigDye mix、EDTA溶液、HIDI溶液等。本专利技术的第四个目的是提供使用上述引物组或者试剂盒对BMPR2基因的PCR扩增方法。本专利技术第四个目的是通过以下技术方案来实现的：一种使用上述引物组或者试剂盒对BMPR2基因的PCR扩增方法，取表1所述的BMPR2基因第1至第13外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子分别对应的PCR扩增引物组中的一组或两组以上对BMPR2基因进行PCR扩增反应，所述PCR扩增反应包括第一阶段反应和第二阶段反应：(1)第一阶段反应：包括11个扩增循环反应，本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测BMPR2基因突变的引物组，其特征在于，包括BMPR2基因第1至第13外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子中任一区域对应的PCR扩增引物组，所述的PCR扩增引物组包括:(1)所述启动子的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.1所示的核苷酸序列的引物P1F和具有SEQ？ID？NO.2所示的核苷酸序列所示的引物P1R的引物组；(2)所述5’UTR的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.3所示的核苷酸序列的引物P2？1F和具有SEQ？ID？NO.4所示的核苷酸序列的引物P2？1R的引物组、具有SEQ？ID？NO.5所示的核苷酸序列的引物P2？2F和具有SEQ？ID？NO.6所示的核苷酸序列的引物P2？2R的引物组、具有SEQID？NO.7所示的核苷酸序列的引物P3？1F和具有SEQ？ID？NO.8所示的核苷酸序列的引物P3？1R的引物组；(3)所述Exon1的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.9所示的核苷酸序列的引物P3？2F和具有SEQ？ID？NO.10所示的核苷酸序列的引物P3？2R的引物组；(4)所述Exon2的PCR扩增引物组:具有SEQ？ID？NO.11所示的核苷酸序列的引物P4F和具有SEQ？ID？NO.12所示的核苷酸序列的引物P4R的引物组；(5)所述Exon3的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.13所示的核苷酸序列的引物P5F和具有SEQ？ID？NO.14所示的核苷酸序列的引物P5R的引物组；(6)所述Exon4的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.15所示的核苷酸序列的引物P6F和具有SEQ？ID？NO.16所示的核苷酸序列的引物P6R的引物组；(7)所述Exon5的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.17所示的核苷酸序列的引物P7F和具有SEQ？ID？NO.18所示的核苷酸序列的引物P7R的引物组；(8)所述Exon6的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.19所示的核苷酸序列的引物P8F和具有SEQ？ID？NO.20所示的核苷酸序列的引物P8R的引物组；(9)所述Exon7的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.21所示的核苷酸序列的引物P9F和具有SEQ？ID？NO.22所示的核苷酸序列的引物P9R的引物组；(10)所述Exon8的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.23所示的核苷酸序列的引物P10F和具有SEQ？ID？NO.24所示的核苷酸序列的引物P10R的引物组；(11)所述Exon9的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.25所示的核苷酸序列的引物P11F和具有SEQ？ID？NO.26所示的核苷酸序列的引物P11R的引物组；(12)所述Exon10的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.27所示的核苷酸序列的引物P12F和具有SEQ？ID？NO.28所示的核苷酸序列的引物P12R的引物组；(13)所述Exon11的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.29所示的核苷酸序列的引物P13F和具有SEQ？ID？NO.30所示的核苷酸序列的引物P13R的引物组；(14)所述Exon12的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.31所示的核苷酸序列的引物P14F和具有SEQ？ID？NO.32所示的核苷酸序列的引物P14R的引物组、具有SEQ？ID？NO.33所示的核苷酸序列的引物P15F和具有SEQ？ID？NO.34所示的核苷酸序列的引物P15R的引物组、具有SEQID？NO.35所示的核苷酸序列的引物P16F和具有SEQ？ID？NO.36所示的核苷酸序列的引物P16R的引物组；(14)所述Exon13的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.37所示的核苷酸序列的引物P17F和具有SEQ？ID？NO.38所示的核苷酸序列的引物P17R的引物组;(15)所述3’UTR的PCR扩增引物组:包括具有SEQ？ID？NO.39所示的核苷酸序列的引物P18F和具有SEQ？ID？NO.40所示的核苷酸序列的引物P18R的引物组、具有SEQ？ID？NO.41所示的核苷酸序列的引物P19？1F和具有SEQ？ID？NO.42所示的核苷酸序列的引物P19？1R的引物组、具有SEQ？ID？NO.43所示的核苷酸序列的引物P19？2F和具有SEQ？ID？NO.44所示的核苷酸序列的引物P19？2R的引物组、具有SEQ？ID？NO.45所示的核苷酸序列的引物P20F和具有SEQ？ID？NO.46所示的核苷酸...

【技术特征摘要】
1.用于检测BMPR2基因突变的引物组，其特征在于，包括BMPR2基因第1至第13
外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子中任一区域对应的PCR扩增引物组，所述的PCR
扩增引物组包括:
(1)所述启动子的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的引物P1F和
具有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列所示的引物P1R的引物组；
(2)所述5’UTR的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的引物P2-1F
和具有SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列的引物P2-1R的引物组、具有SEQ ID NO.5所示的核苷
酸序列的引物P2-2F和具有SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列的引物P2-2R的引物组、具有SEQ
ID NO.7所示的核苷酸序列的引物P3-1F和具有SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列的引物P3-1R
的引物组；
(3)所述Exon1的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列的引物P3-2F
和具有SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列的引物P3-2R的引物组；
(4)所述Exon2的PCR扩增引物组:具有SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列的引物P4F和具有
SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列的引物P4R的引物组；
(5)所述Exon3的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列的引物P5F
和具有SEQ ID NO.14所示的核苷酸序列的引物P5R的引物组；
(6)所述Exon4的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.15所示的核苷酸序列的引物P6F
和具有SEQ ID NO.16所示的核苷酸序列的引物P6R的引物组；
(7)所述Exon5的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.17所示的核苷酸序列的引物P7F
和具有SEQ ID NO.18所示的核苷酸序列的引物P7R的引物组；
(8)所述Exon6的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.19所示的核苷酸序列的引物P8F
和具有SEQ ID NO.20所示的核苷酸序列的引物P8R的引物组；
(9)所述Exon7的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.21所示的核苷酸序列的引物P9F
和具有SEQ ID NO.22所示的核苷酸序列的引物P9R的引物组；
(10)所述Exon8的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.23所示的核苷酸序列的引物P10F
和具有SEQ ID NO.24所示的核苷酸序列的引物P10R的引物组；
(11)所述Exon9的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.25所示的核苷酸序列的引物P11F
和具有SEQ ID NO.26所示的核苷酸序列的引物P11R的引物组；
(12)所述Exon10的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.27所示的核苷酸序列的引物P12F
和具有SEQ ID NO.28所示的核苷酸序列的引物P12R的引物组；
(13)所述Exon11的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.29所示的核苷酸序列的引物P13F
和具有SEQ ID NO.30所示的核苷酸序列的引物P13R的引物组；
(14)所述Exon12的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.31所示的核苷酸序列的引物P14F
和具有SEQ ID NO.32所示的核苷酸序列的引物P14R的引物组、具有SEQ ID NO.33所示的核
苷酸序列的引物P15F和具有SEQ ID NO.34所示的核苷酸序列的引物P15R的引物组、具有SEQ
ID NO.35所示的核苷酸序列的引物P16F和具有SEQ ID NO.36所示的核苷酸序列的引物P16R
的引物组；
(14)所述Exon13的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.37所示的核苷酸序列的引物P17F
和具有SEQ ID NO.38所示的核苷酸序列的引物P17R的引物组;
(15)所述3’UTR的PCR扩增引物组:包括具有SEQ ID NO.39所示的核苷酸序列的引物P18F
和具有SEQ ID NO.40所示的核苷酸序列的引物P18R的引物组、具有SEQ ID NO.41所示的核
苷酸序列的引物P19-1F和具有SEQ ID NO.42所示的核苷酸序列的引物P19-1R的引物组、具有
SEQ ID NO.43所示的核苷酸序列的引物P19-2F和具有SEQ ID NO.44所示的核苷酸序列的引物
P19-2R的引物组、具有SEQ ID NO.45所示的核苷酸序列的引物P20F和具有SEQ ID NO.46所
示的核苷酸序列的引物P20R的引物组、具有SEQ ID NO.47所示的核苷酸序列的引物P21F和
具有SEQ ID NO.48所示的核苷酸序列的引物P21R的引物组、具有SEQ ID NO.49所示的核苷
酸序列的引物P22-1F和具有SEQ ID NO.50所示的核苷酸序列的引物P22-1R的引物组、具有
SEQ ID NO.51所示的核苷酸序列的引物P22-2F和具有SEQ ID NO.52所示的核苷酸序列的引物
P22-2R的引物组、具有SEQ ID NO.53所示的核苷酸序列的引物P23F和具有SEQ ID NO.54所
示的核苷酸序列的引物P23R的引物组、具有SEQ ID NO.55所示的核苷酸序列的引物P24F和
具有SEQ ID NO.56所示的核苷酸序列的引物P24R的引物组、具有SEQ ID NO.57所示的核苷
酸序列的引物P25F和具有SEQ ID NO.58所示的核苷酸序列的引物P25R的引物组、具有SEQ ID
NO.59所示的核苷酸序列的引物P26F和具有SEQ ID NO.60所示的核苷酸序列的引物P26R的
引物组、具有SEQ ID NO.61所示的核苷酸序列的引物P27F和具有SEQ ID NO.62所示的核苷
酸序列的引物P27R的引物组、具有SEQ ID NO.63所示的核苷酸序列的引物P28F和具有SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢文菊，张晨婷，王健，
申请(专利权)人：广州医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：