人诱导多能干细胞的制备方法及其用途技术

本发明专利技术涉及一种肿瘤靶向显像技术领域的人诱导多能干细胞的制备方法及其用途，所述制备方法包括如下步骤：将慢病毒转染人成纤维细胞，得到人诱导多能干细胞。本发明专利技术还涉及所述人诱导多能干细胞在制备靶向体内肿瘤病灶制剂中的用途。本发明专利技术的人诱导多能干细胞能够靶向体内肿瘤病灶，人诱导多能干细胞通过标记荧光磁性纳米探针后，能够通过静脉注射后特异性富集于肿瘤病灶部位，同时还具有分子影像功能，示踪细胞在活体状态下在体内的分布。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于肿瘤靶向显像
，具体涉及一种人诱导多能干细胞的制备方法及其用途。
技术介绍
肿瘤被认为是目前最难治愈的疾病之一，基因治疗是治疗肿瘤的一种有前景的手段。已经有研究报道间充质干细胞（MSCs）可以作为基因载体实现肿瘤治疗，MSCs一般是从骨髓、脂肪、真皮等组织中分离得到，从这些组织中分离MSCs需要选择合适的供体并进行侵入性操作。而且从单个供体中取得MSCs是有限的，并且不能进行长期的增殖，这些都影响了MSCs作为载体进行基因治疗的可操作性。胚胎干细胞是一种来自于囊胚的内细胞团的全能干细胞，能够在体外无限增值而不丧失其分化的潜能，并且胚胎干细胞（ESCs）相对于其他细胞，易于进行基因改造，更适合作为基因载体，但是胚胎干细胞具有来源受限、伦理道德及操作技术等因素的限制，发展较为缓慢，而诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是使体细胞重编程获得的具有胚胎干细胞样特性的多能干细胞，现在iPSCs已经可以取代ESCs，从而克服了ESCs来源受限、伦理道德限制等问题，因此应用iPSCs作为“载体”细胞将为肿瘤研究带来了治疗希望。到目前为止，经对现有技术的文献检索，发现Hannon等在《Nature》（自然）杂志2004年第431卷第7006期371-378页上发表文章“Unlocking the potential of thehuman genome with RNA interference”，该文报道了通过转基因技术，向人类胚胎干细胞中添加了一个基因，该基因可以控制干细胞表达一种名为TRAIL的抗癌分子，当将这种转基因干细胞注入长有脑瘤的老鼠体内时，转基因干细胞便附着到脑瘤细胞上，并释放出TRAIL分子。实验结束后，这些老鼠脑瘤的体积平均缩小了50％，最多的甚至缩小了70％。2012年崔大祥等人又在《Theranostics》（诊疗）杂志第2卷第6期618-628页发表了文章“DiR-labeled Embryonic Stem Cells for Targeted Imaging of in vivoGastric Cancer Cells”，该文报道了小鼠胚胎干细胞具有主动靶向识别体内胃癌细胞的作用，并且这种迁移作用可能是由于体内趋化因子CXCL12与CXCR4配对作用所导致。以上研究都发现了ESCs具有靶向识别与治疗肿瘤的效果，但是，至今为止，还没有关于iPSCs靶向识别体内肿瘤细胞方面的报道。实际上iPSCs具有来源方便、实现个体化治疗、抗免疫排斥性、提高患者自身免疫力等优点，在肿瘤的早期预警与治疗方面具有很好的应用前景，是一种有应用前景的干细胞基治疗肿瘤的工具。
技术实现思路
本专利技术的目的在于弥补现有技术的不足，提供一种人诱导多能干细胞的制备方法及其用途。本专利技术的人诱导多能干细胞能够靶向体内肿瘤病灶，人诱导多能干细胞通过标记荧光磁性纳米探针后，能够通过静脉注射后特异性富集于肿瘤病灶部位，同时还具有分子影像功能，示踪细胞在活体状态下在体内的分布。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术的第一个目的在于提供一种人诱导多能干细胞的制备方法，包括如下步骤：将慢病毒转染人成纤维细胞，得到人诱导多能干细胞。优选地，所述人成纤维细胞为人真皮成纤维细胞或人包皮成纤维细胞。优选地，所述慢病毒为携带有Oct4、Sox2、Nanog和Lin28转录因子的慢病毒。优选地，所述人成纤维细胞是通过原代培养的方法从肿瘤病人体内获得的人成纤维细胞。本专利技术的第二个目的在于提供前述人诱导多能干细胞在制备靶向体内肿瘤病灶制剂中的用途。优选地，所述用途包括如下步骤：将人诱导多能干细胞的制剂注射入人体，人诱导多能干细胞能够主动识别体内肿瘤病灶。优选地，所述肿瘤为胃癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、肝癌、膀胱癌或脑胶质瘤。优选地，所述用途包括如下步骤：通过荧光标记人诱导多能干细胞，注射入人体，体内示踪，显示人诱导多能干细胞在体内的分布，进而显示体内肿瘤病灶的位置。优选地，所述荧光标记使用的材料为无机荧光纳米材料。优选地，所述无机荧光纳米材料为量子点、荧光磁性纳米粒子、二氧化硅包覆的荧光纳米粒子或上转换材料。现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：本专利技术提供了一种人诱导多能干细胞在制备靶向体内肿瘤病灶制剂中的用途，本专利技术的人诱导多能干细胞能够靶向体内肿瘤病灶，人诱导多能干细胞通过标记荧光磁性纳米探针后，能够通过静脉注射后特异性富集于肿瘤病灶部位，同时还具有分子影像功能，示踪细胞在活体状态下在体内的分布。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显：图1为实施例1中的人iPSCs的碱性磷酸酶染色图；图2为实施例1中的人iPSCs的免疫荧光染色图；图3为实施例1中悬浮培养形成类胚体（EB）的形态图（A）和RT-PCR定量分析人iPSCs和EB中各胚层特异性基因的表达（B）；图4为实施例2中未标记的人iPSCs细胞（A）和荧光磁性纳米粒子标记的人iPSCs细胞（B）的可见光与荧光成像复合图；图5为实施例2中未标记的人iPSCs细胞（A）和荧光磁性纳米粒子标记的人iPSCs细胞（B）的普鲁士蓝-核固红复染照片图；图6为实施例2中FMNPs（A）和FMNPs标记的iPSCs（B）在尾静脉注射进入荷瘤小鼠体内之后1h和6h时间点小鼠活体荧光成像图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆：实验室手册（New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989）中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1、人iPSCs的制备本实施例涉及一种人iPSCs的制备，包括如下步骤：步骤一，细胞制备小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryo fibroblast，MEF）购自上海斯丹赛生物技术有限公司，传代培养至第三～五代的MEF细胞作为滋养层细胞；原代培养人真皮成纤维细胞（Human Dermal Fibroblasts，HDF）：无菌条件下取患者腹部2～3cm2的皮肤，去除皮下组织和表皮层，用胶原酶消化真皮层，保持温度为37℃，时间为2个小时，然后挤压消化过的皮肤，并用单层纱布过滤，培养液用D本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人诱导多能干细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将慢病毒转染人成纤维细胞，得到人诱导多能干细胞。

【技术特征摘要】
1.一种人诱导多能干细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将慢病毒转
染人成纤维细胞，得到人诱导多能干细胞。
2.如权利要求1所述的人诱导多能干细胞的制备方法，其特征在于，所述人成纤
维细胞为人真皮成纤维细胞或人包皮成纤维细胞。
3.如权利要求1所述的人诱导多能干细胞的制备方法，其特征在于，所述慢病毒
为携带有Oct4、Sox2、Nanog和Lin28转录因子的慢病毒。
4.如权利要求1所述的人诱导多能干细胞的制备方法，其特征在于，所述人成纤
维细胞是通过原代培养的方法从肿瘤病人体内获得的人成纤维细胞。
5.一种如权利要求1所述的人诱导多能干细胞在制备靶向体内肿瘤病灶制剂中的
用途。
6.如权利要求5所述的用途，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔大祥，阮静，李超，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：