用于预防和/或治疗癌症的肿瘤抗原制造技术

本发明专利技术涉及用于预防和/或治疗癌症的肿瘤抗原。具体地，本发明专利技术涉及编码多肽的核酸，和核酸或多肽在预防和/或治疗癌症中的应用。更具体地，本发明专利技术涉及改进的用于插入和表达编码肿瘤抗原的外来基因的载体，所述的载体用于免疫治疗性处理癌症。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及编码多肽的核酸，和核酸或多肽在预防和/或治疗癌症中的应用。更具体地，本专利技术涉及改进的用于插入和表达编码肿瘤抗原的外来基因的载体，所述的载体用于免疫治疗性处理癌症。
技术介绍
近几年来，由于在高密度微阵列、SEREX、免疫组织化学(IHC)、RT-PCR、原位杂交(ISH)和激光捕获显微术等数项技术的辅助下，基于原发肿瘤和正常细胞的表达谱分析的分子鉴定的巨大进展，在用肿瘤相关抗原(TAA)开发癌症疫苗方面取得了巨大进步(Rosenberg, Immunity, 1999 ；Sgroi 等，1999, Schena 等，1995, Offringa 等，2000)。TAA 是肿瘤细胞表达的或超量表达的抗原，且对一种或几种肿瘤是特异性的，例如CEA抗原在结直肠癌、乳腺癌和肺癌中表达。Sgroi等(1999)组合使用激光捕获显微解剖和cDNA微阵列，鉴定出了在侵入性和转移性癌细胞中差异表达的几种基因。可以使用几种送递系统(象DNA或病毒)来针对人癌症治疗性地接种疫苗(Bonnet等，2000)，且可以引起免疫应答，也可以中断针对TAA的免疫耐受。通过插入编码尤其是T细胞共刺激分子(例如B7. I)或细胞因子(例如IFN-y，IL2，*GM-CSF)的转基因，可以为肿瘤细胞提供更多的免疫原性。已经证实，TAA和细胞因子或共刺激分子的共表达可以用于开发有效的治疗性疫苗(Hodge等，95, Bronte 等，1995, Chamberlain 等，1996)。本领域需要能用于刺激免疫应答的试剂和方法来预防或治疗癌症。本专利技术提供了这样的试剂和方法，这克服了其它人在尝试治疗癌症时遇到的许多困难。
技术实现思路
本专利技术提供了用于施用给患者以预防和/或治疗癌症的免疫原性靶。更具体地，免疫原性靶是肿瘤抗原("TA")和/或血管发生相关抗原("AA")。在一个实施方案中，免疫原性靶由SEQ ID NO. :29或SEQ ID NO. :31编码，或具有SEQ ID NO. :30或SEQID NO. :32的氨基酸序列。在某些实施方案中，将TA和/或AA作为包含在质粒或其它送递载体(例如重组病毒)中的核酸施用给患者。也可以将TA和/或AA与免疫刺激物(例如共刺激分子或佐剂)组合施用。附图说明图I. A. AAC2-1和AAC2-2的核苷酸序列。B.预测的AAC2-1和AAC2-2的氨基酸序列的比对。缺失的核苷酸或氨基酸标记为"。序列之间的差异标有下划线。图2. A.人淋巴细胞应答于源自AAC2-2蛋白的肽而分化成能分泌IFN- Y的效应细胞。用表III所示的肽组(组1-9)刺激了 T细胞。刺激3轮后，通过ELISP0T分析了淋巴细胞的肽-特异性的IFN-Y生产。B.插入的图表明，由肽组#6刺激的活化的细胞能抗原-特异性的CTL活性地杀伤肽加载的T2 靶细胞。肽EC5会引起诱导CTL活性和IFN- Y分泌的显性活性。图3.用编码人AAC2-2的DNA质粒进行DNA免疫，会使来自HLA_A2_Kb转基因小鼠的鼠T细胞能识别和分泌IFN- Y。用不同组的肽，重新刺激了来自pEF6-hAAC2-2-免疫的小鼠的脾细胞。6天后，收获细胞，并测试每个肽组或对照HLA-A2-结合的9-聚物HIV肽弓丨起的IFN-Y分泌。将ELISP0T平板孵育过夜，并显色。每组反应于PMA和用作阳性对照的伊屋诺霉素而产生高水平的IFN- Y (超过250个斑点)。至今测试的来自HLA-A-0201+供体的人淋巴细胞也识别出了高反应性肽组中的一个(组6)。图4.用编码人AAC2-2的基因进行DNA接种，可以完全阻止植入的B16F10黑素瘤细胞的生长。该作用不是由于非特异性的免疫应答，这是由编码流感-NP蛋白和人flkl的质粒(VEGFR-2)不能阻止肿瘤生长所证实的。图5.将B16F10黑素瘤细胞植入C57BL/6小鼠后的小鼠存活率证实了，用人AAC2-2载体进行DNA接种，可以完全保护免受肿瘤生长的作用。该保护作用是抗原_特异性的，且不能通过接种其它基因来引起。图6.用pEF6-hAAC2-2表达质粒进行DNA接种后，人AAC2-2的肽能引起来自C57BL/6小鼠的T淋巴细胞表现出效应细胞活性，并分泌IFN- Y。这些肽可以表现出B6MHCI类的交叉反应性。组I和组5中的肽能诱导C57BL/6T细胞的强反应性。图7. BFA4cDNA 序列。图8.BFA4氨基酸序列。图9.针对BFA4肽的免疫应答。图10. BCYl核苷酸㈧和氨基酸⑶序列。图11.针对特异性的BCYl肽的免疫应答。图12. BFA5cDNA 序列。图13.BFA5氨基酸序列。图14.针对BFA5-衍生的肽的免疫应答。 图15. BCZ4cDNA和氨基酸序列。图16.针对BCZ4-衍生的肽的免疫应答。图17. BFY3cDNA和氨基酸序列。图18.针对BFY3-衍生的肽的免疫应答。具体实施例方式本专利技术提供了用于治疗和/或预防癌症的试剂和方法。在本申请中引用的所有文献都引作参考。在一个实施方案中，本专利技术涉及诱导或增强针对一种或多种肿瘤抗原("TA")的免疫应答，以预防和/或治疗癌症。在某些实施方案中，可以组合一种或多种TA。在优选的实施方案中，例如施用编码肿瘤抗原的核酸载体或肽或多肽形式的肿瘤抗原自身后，TA在宿主细胞中的表达引起免疫应答。如本文所使用的，"抗原"是一种分子，例如多肽或其部分，其能在已经施用了该抗原的宿主中产生免疫应答。免疫应答可以包括能结合至少一个抗原表位的抗体的生成和/或针对能表达抗原表位的细胞的细胞免疫应答的生成。该反应可以是现有免疫应答的增强，例如通过造成增强的抗体生产、具有增强的抗原亲合力的抗体的生成或增强的或更有效的细胞应答(即，增加的T细胞或具有更高的抗肿瘤活性的T细胞)。将能产生免疫应答的抗原可替换地称作是免疫原性的或免疫原。在本专利技术的描述中，可以将TA称作"免疫原性靶"。TA包括肿瘤相关抗原(TAA)和肿瘤-特异性的抗原(TSA)，其中癌细胞是抗原的 来源。TAA是一种抗原，它在肿瘤细胞表面上表达的量高于在正常细胞上观察到的，或者是在胚胎发育过程中在正常细胞上表达的抗原。TSA是肿瘤细胞特有的抗原，且在正常细胞上不表达。TA还包括TAA或TSA、其抗原性片段和保留了它们的抗原性的修饰形式。典型地，根据它们的表达图谱、功能或遗传起源，将TA分成5类睾丸癌(CT)抗原(即，MAGE, NY-ES0-1);黑素细胞分化抗原(即，Melan A/MART-1，酪氨酸酶，gap 100)；突变的抗原(即，MUM-1, p53，CDK-4);超量表达的“自身”抗原(即，HER-2/neu, p53)；和病毒抗原(即，HPV, EBV)。为了实现本专利技术的目的，合适的TA是能在表达该TA的宿主中诱导或增强抗肿瘤免疫应答的任意TA。合适的TA包括，例如，gapl00(Cox等.，Science，264 :716-719(1994))，MART-l/Melan A (Kawakami 等·，J.Exp. Med.，180 :347-352(1994))，gp75 (TRP-I) (Wang 等·，J. Exp. Med.，186 :1131-1140 (1本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的肽，其如氨基酸序列MLWKLTDNI、HAIEEVPHV、KYKVTVAEV、LLGGVLRRA、KLDKIGLNL或KAANVTLLT所示。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·贝林斯泰因，S·加利钱，C·罗维特，M·帕林顿，L·拉万伊，D·辛桑胡，
申请(专利权)人：圣诺菲·帕斯图尔公司，
类型：发明
国别省市：