北豆根抗肿瘤提取物、制备方法及用途技术

本发明专利技术涉及一种北豆根抗肿瘤提取物、制备方法及用途。现在的北豆根有效成分提取工艺均采用生物碱的常规提取方法：即酸提碱沉结合碱化后有机溶剂萃取，此提取方法存在有机试剂残留。步骤：1）浸泡提取：是用75%～95%乙醇溶液浸泡数小时后超声提取；（2）浓缩、分散、离心：是将提取液减压浓缩至无醇味后再稀释、离心处理；（3）用大孔吸附树脂：是取离心处理后的上清液注入处理好的AB-8大孔吸附树脂；（4）洗脱：是把吸附树脂用流速为1倍柱床体积/小时，依次用3～5倍柱床体积的蒸馏水洗脱、5倍柱床体积的10%乙醇溶液洗脱和4倍柱床体积的70%乙醇溶液洗脱；（5）制得抗肿瘤提取物：是收集70%的乙醇洗脱液，浓缩收干得到干燥固体。本发明专利技术用于医药领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种北豆根抗肿瘤提取物、制备方法及用途。
技术介绍
北豆根系防已科植物蝙蝠葛的干燥根茎，现在的北豆根有效成分提取工艺均采用生物碱的常规提取方法即酸提碱沉结合碱化后有机溶剂萃取，此提取方法存在有机试剂残留，而且操作繁琐。
技术实现思路
本专利技术的目的是采用一种北豆根抗肿瘤提取物的制备方法，此方法只用到了水和乙醇，使提取物无有机残留，可以与药物赋形剂制成适合于临床使用的中药有效部位的抗肿瘤药物。上述的目的通过以下的技术方案实现 一种北豆根抗肿瘤提取物的制备方法，该方法包括如下步骤 (1)浸泡提取取北豆根药材用8 10倍重量的75% 95%乙醇溶液浸泡24小时后，用超声波提取器提取三次，将所述的三次提取液充分混合； (2)浓缩、分散、离心将混合后的提取液减压浓缩至无醇味后，再把浓缩液和水按体积比1:1稀释，进行离心分离处理； (3)用大孔吸附树脂取离心处理后的上清液注入已处理好的AB-8大孔吸附树脂，上清液与树脂的重量比例为I :2 ； (4)洗脱将吸附树脂进行洗脱，流速为I倍柱床体积/小时，依次用3 5倍柱床体积的蒸馏水洗脱、5倍柱床体积的10%乙醇溶液洗脱和4倍柱床体积的70%乙醇溶液洗脱； (5)制得抗肿瘤提取物收集70%的乙醇洗脱液，进行浓缩收干，得到干燥的固体即为北豆根抗肿瘤提取物。一种北豆根抗肿瘤提取物在抗肿瘤领域药品制备中的应用。一种北豆根抗肿瘤提取物，通过以下方法制得 I)浸泡提取取北豆根药材用8 10倍重量的75% 95%乙醇溶液浸泡24小时后，用超声波提取器提取三次，将所述的三次提取液充分混合； (2 )浓缩、分散、离心将混合后的提取液减压浓缩至无醇味后，再把浓缩液和水按体积比1:1稀释，进行离心分离处理； (3)用大孔吸附树脂取离心处理后的上清液注入已处理好的AB-8大孔吸附树脂，上清液的与树脂的重量比例为I :2 ； (4)洗脱将吸附树脂进行洗脱，流速为I倍柱床体积/小时，依次用3 5倍柱床体积的蒸馏水洗脱、5倍柱床体积的10%乙醇溶液洗脱和4倍柱床体积的70%乙醇溶液洗脱； (5)制得抗肿瘤提取物收集70%的乙醇洗脱液，进行浓缩收干，得到干燥的固体即为北豆根抗肿瘤提取物。—种北豆根抗肿瘤提取物在抗肿瘤领域药品制备中的应用，抑制人乳腺癌细胞MCF-7的活性实验是细胞培养、细胞毒测定、药效学试验及试验方法细胞培养 人乳腺癌细胞MCF-7培养于RPMI 1640培养基，补加10%胎牛血清、L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素以及100 mg/ml链霉素，将细胞置于37 °C, 5% CO2饱和湿度的培养箱中进行培养，孵育2-3天后再用O. 25%胰蛋白酶进行消化传代，选取对数生长期细胞进行后续的实验。细胞毒测定 10批北豆根药材按照上述的制备过程制备的抗肿瘤提取物，用培养液稀释至不同浓度后，用O. 22 mm的微孔滤膜过滤，将所得的续滤液用于肿瘤细胞增殖抑制实验，在无菌的96孔板中，接种的细胞密度为每孔I X IO5个/ml,用量为每孔100 ml,然后分别加入5 mg/ml、l mg/ml>O. 2 mg/ml>O. 04 mg/ml四个梯度浓度的样品溶液,每孔加入100 ml,每个样品设3个复孔，另外设4个空白对照孔，空白对照孔中只加100 ml的完全培养基，不加细胞；设4个阴性对照孔，只加100 ml细胞悬液。将其进行48 h培养，采用MTT法进行测定，SP培养后的细胞，加入10 ml MTT5 mg/ml磷酸盐缓冲液，37° C、5% CO2培养箱中培养4小时，离心，取上清液150 ml弃去，加入175ml DMS0，振摇10分钟后，用酶标仪在550 nm测定吸光值。根据公式计算得IC5tl。对照孔仅加细胞不加药物，空白孔仅加溶剂不加细胞和药物，实验孔加细胞再加药物。药效学试验 试验动物昆明种小鼠，体重18g-22g，雌雄兼用。药物与试剂注射用生理盐水，5-氟尿嘧啶，北豆根提取物，瘤株小鼠肝癌H22。试验方法 (I)对小鼠瘤重及免疫器官指数的影响小鼠随机分组，雌雄各半。分别为给药组，5-氟尿嘧啶组，生理盐水组。各组小鼠于右前腋皮下常规接种H22瘤细胞悬液O. 2ml (约I X 106-2 X IO6个细胞)，接种后各组给药，连续7d，末次给药后处死小鼠，称体重，称瘤块、胸腺及脾脏质量，计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数。(2)对H22小鼠生命延长率的影响小鼠腹腔接种H22瘤细胞悬液O. 2ml，每天观察并记录小鼠死亡情况。有益效果 I.本专利技术提供了一种未报道过的具有抗肿瘤作用的北豆根提取物，通过对癌细胞抑制试验和药效学试验，证明了该提取物具有优良的抗癌活性，可与多种医用辅料如赋形剂、稀释剂、香味剂、润滑剂等配合，制成多种剂型的药物，如冻干粉针、注射液、片剂、胶囊、颗粒剂以及口服液等，广泛应用于临床。本专利技术采用的浸泡提取，浓缩、洗脱及干燥的方法只用到了乙醇溶液，且最后又蒸干排出，无有机物残留，保证了提取物的纯净性，对后续的抗肿瘤药物的制备提供了安全保障。本专利技术采用的大孔吸附树脂的方法，对北豆根抗肿瘤组分进行分离富集，代替了传统的碱化，有机溶剂萃取，不仅保证了所得组分的抗肿瘤活性，且避免了乳化、有机物残留等缺点。本专利技术采用的浸后再用超声波提取器对北豆根抗肿瘤组分进行提取的方法，不仅避免了加热回流对成分的破坏，还克服了单纯用浸取法提取效率低的缺点。本专利技术提供的北豆根抗肿瘤提取物的制备方法操作简便，容易制取，有利于降低成本，进行抗肿瘤药物的大规模生产。附图说明 附图I是本专利技术的10批北豆根抗肿瘤活性组分的细胞毒性试验IC5tl值。附图2是本专利技术对小鼠药效学试验数据。具体实施例方式 实施例I: 一种北豆根抗肿瘤提取物的制备方法，该方法包括如下步骤 (1)浸泡提取取北豆根药材用8 10倍重量的75% 95%乙醇溶液浸泡24小时后，用超声波提取器提取三次，将所述的三次提取液充分混合； (2)浓缩、分散、离心将混合后的提取液减压浓缩至无醇味后，再把浓缩液和水按体积比1:1稀释，进行离心分离处理； (3)用大孔吸附树脂取离心处理后的上清液注入已处理好的AB-8大孔吸附树脂，上清液与树脂的重量比例为I :2 ； (4)洗脱将吸附树脂进行洗脱，流速为I倍柱床体积/小时，依次用3 5倍柱床体积的蒸馏水洗脱、5倍柱床体积的10%乙醇溶液洗脱和4倍柱床体积的70%乙醇溶液洗脱； (5)制得抗肿瘤提取物收集70%的乙醇洗脱液，进行浓缩收干，得到干燥的固体即为北豆根抗肿瘤提取物。实施例2: 一种北豆根抗肿瘤提取物，其特征是通过以下方法制得 I)浸泡提取取北豆根药材用8 10倍重量的75% 95%乙醇溶液浸泡24小时后，用超声波提取器提取三次，将所述的三次提取液充分混合； (2 )浓缩、分散、离心将混合后的提取液减压浓缩至无醇味后，再把浓缩液和水按体积比1:1稀释，进行离心分离处理； (3)用大孔吸附树脂取离心处理后的上清液注入已处理好的AB-8大孔吸附树脂，上清液与树脂的重量比例为I :2 ； (4)洗脱将吸附树脂进行洗脱，流速为I倍柱床体积/小时，依次用3 5倍柱床体积的蒸馏水洗脱、5倍柱床体积的10%乙醇溶液洗脱和4本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种北豆根抗肿瘤提取物的制备方法，其特征是：该方法包括如下步骤：（1）浸泡提取：取北豆根药材用8～10倍重量的75%～95%乙醇溶液浸泡24小时后，用超声波提取器提取三次，将所述的三次提取液充分混合；（2）浓缩、分散、离心：将混合后的提取液减压浓缩至无醇味后，再把浓缩液和水按体积比1:1稀释，进行离心分离处理；（3）用大孔吸附树脂：取离心处理后的上清液注入已处理好的AB？8大孔吸附树脂，上清液与树脂的重量比例为1：2；（4）洗脱：将吸附树脂进行洗脱，流速为1倍柱床体积/小时，依次用3～5倍柱床体积的蒸馏水洗脱、5倍柱床体积的10%乙醇溶液洗脱和4倍柱床体积的70%乙醇溶液洗脱；（5）制得抗肿瘤提取物：收集70%的乙醇洗脱液，进行浓缩收干，得到干燥的固体即为北豆根抗肿瘤提取物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘丽娟，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：