一种成年大鼠窦房结精确定位和取材的方法技术

本发明专利技术涉及对成年大鼠窦房结快速定位及精确取材的方法，大鼠窦房结宏观定位于上腔静脉近心端壁内并延伸至右心房与上腔静脉交界区，采用在体缝线打结法标记右上腔静脉后，沿上腔静脉远端取下大鼠心脏。本发明专利技术还涉及对成年大鼠窦房结连续切片肉眼精确定位方法。对取材的窦房结进行固定后连续切片，切片过程中同时用肉眼观察窦房结在上腔静脉壁的位置和形态，以精确定位窦房结。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种实验材料的取材方法，具体涉及对成年大鼠窦房结快速定位及精确取材的方法，本专利技术还涉及对成年大鼠窦房结连续切片肉眼精确定位方法。
技术介绍
大鼠是最常用的实验动物之一。在医学实验研究中，大鼠的窦房结定位是一项技术难题。窦房结(sinoatrialnode,以下或简称SAN)是哺乳动物心脏正常节律的起搏点，正常的SAN功能是心脏泵功能得以实现的前提条件。大鼠的窦房结解剖位置隐蔽，体积小， 仅通过肉眼观察难以发现，然而其在心脏自律性活动中却占有非常重要的位置。关于成年大鼠SAN的位置和切取方法，目前尚存争议。有研究报道，人及大多数哺乳类动物的SAN位置大致位于上腔静脉与右心耳交界处以下，结的长轴与界沟平行，大多数偏静脉窦侧，结的上端可达界沟与右心耳嵴交界处，下端可达下腔静脉口。但有关大鼠SAN位置的研究结果相去甚远，有研究认为大鼠SAN绝大多数位于界嵴腔静脉窦侧心外膜下，少数位于界嵴处或偏右心耳侧。也有研究认为，新生SD大鼠SAN位于上腔静脉与右心房交界处以上的上腔静脉近侧段壁内，呈马蹄形。而有关SAN的定位方法描述，如①在上腔静脉旁的心外膜下，心肌细胞分布疏松，染色较淡，胶原纤维和结缔组织成分较多；②距SAN中央区不远处有较多的神经节细胞、神经纤维和脂肪组织，由此从心外膜向内膜比较容易找到结中央区；③有结动脉，不一定都位于SAN的中央。而关于心脏SAN的切取方法，目前研究认为通过大体和体视显微镜确定其部位有技术上的困难，只有通过连续切片才能成功地进行研究，人及大多数哺乳类动物的SAN位置大致位于上腔静脉与右心耳交界处以下，窦房结的长轴与界沟平行，大多数偏静脉窦侧，窦房结的上端可达界沟与右心耳嵴交界处，下端可达下腔静脉口。以上各种研究从定位、取材的角度讲都不够准确。由于现有技术无法较为精确地确定成年大鼠SAN的位置,实验中对大鼠SAN取材定位不明确；心脏SAN的切取过程中，常常需要切片近千张，工作量庞大。因此建立大鼠SAN的准确定位并清晰显示的方法对SAN基础研究和临床相关疾病的诊治均具有非常重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立一种方法，能够对成年大鼠SAN准确定位并清晰地显示出，使实践中可准确切取成年大鼠SAN，而且该方法应该简单、快速。本专利技术需要解决的技术问题是对成年大鼠窦房结的定位和取材，本专利技术进行了如下研究I、宏观定位、精确取材方法；2、连续切片肉眼精确定位方法。本专利技术的技术方案是一种对成年大鼠窦房结的定位和取材方法，包括宏观定位和精确取材步骤，其特征是，所述宏观定位是将大鼠窦房结定位于上腔静脉近心端壁内并延伸至右心房与上腔静脉交界区，并用在体缝线打结法标记右上腔静脉；所述精确取材是在宏观定位的基础上，沿上腔静脉远端取下大鼠心脏。所述用在体缝线打结法标记右上腔静脉是在大鼠胸腔内寻找右侧上腔静脉，用O号缝线在静脉远心端打结做标记；所述沿上腔静脉远端取下大鼠心脏是沿上腔静脉远端、离断其它与心脏相连的根部大血管，取下完整心脏；然后剪下右心房及与之相连的上腔静脉近心段，分离并去除上腔静脉周围的结缔组织。所述精确取材还包括对取材的窦房结进行固定，方法是先进行组织修剪，修剪的标准是以上腔静脉与右心房交界区为中心，在向上向下各1.5mm处横断上腔静脉与右心房；然后用滤纸包裹取好的组织入10%中性缓冲福尔马林固定；将固定后的组织脱水后用石蜡包埋。所述包埋方向为上腔静脉远端向下、静脉壁立埋。 上述精确取材还包括通过连续切片定位窦房结的步骤，方法是用切片机对石蜡包埋的组织连续切片，切片过程中同时用肉眼观察窦房结在上腔静脉壁的位置和形态，以定位窦房结。所述切片方向为自上腔静脉断端至心房，切片厚3μπι;所述观察窦房结在上腔静脉壁的位置和形态为，当静脉壁局部开始增宽，并且增宽处静脉壁上出现明显动脉管腔时，表明是窦房结开始出现的部位。具体操作步骤如下I、宏观定位大鼠胸腔内寻找右侧上腔静脉，用O号缝线在静脉远心端打结做标记。2、取材沿上腔静脉远端、离断其它与心脏相连的根部大血管，取下完整心脏；剪下右心房及与之相连的上腔静脉近心段，分离并去除上腔静脉周围的结缔组织；3、固定固定前先进行组织修剪，修剪的标准是以上腔静脉与右心房交界区为中心，在向上向下各I. 5mm处横断上腔静脉与右心房；然后用滤纸包裹取好的组织(防止组织折叠卷曲)入10%中性缓冲福尔马林固定；将固定后的组织脱水后用石蜡包埋，包埋方向为上腔静脉远端向下、静脉壁立埋。所述连续切片肉眼定位方法是用切片机对上述石蜡包埋的组织连续切片，切片方向为自上腔静脉断端至心房，切片厚3 μ m，切片过程中同时用肉眼观察切片中上腔静脉壁的形态，当静脉壁局部开始增宽，并且增宽处静脉壁上出现明显动脉管腔时，表明是SAN开始出现的部位。本文中所述的“上腔静脉”亦可称为“前腔静脉”。本专利技术用以下方法分别确认了上述方法对成年大鼠窦房结是精确定位并取材的I、大鼠SAN组织染色HE染色和Masson三色染色同时进行。对上述切片进行快速HE染色，通过光镜观察证实含有SAN组织。2、大鼠SAN组织电镜标本制作将大鼠SAN组织半薄切片与甲苯胺蓝快速染色定位；经大鼠SAN组织电镜标本精确定位和染色证实是大鼠SAN组织。本专利技术在进行SAN取材时保留上腔静脉的近心段。因为发现成年大鼠SAN位于上腔静脉近心端壁内并延伸至右心房与上腔静脉交界区；在宏观定位的基础上，采用在体缝线打结法标记右上腔静脉的方法可以准确取到成年大鼠的SAN组织。在体缝线打结法确保了对上腔静脉取材的准确性和SAN组织的完整性、缩短了取材时间，有助于成年大鼠SAN准确取材；SAN精确取材方法准确、可靠，可以增加SAN取材的精确程度，减少取材部位，减少了病理技术人员的工作量和切片等耗材的用量。本专利技术提供了一种成年大鼠SAN精确取材及快速定位的方法，连续切片和肉眼定位相结合,并通过HE和Masson染色进行SAN组织形态学观察；通过半薄切片定位和进一步超薄切片进行超微结构观察。对正确判断实验结果、确定准确的电镜取材部位和分离传导 细胞进行体外培养等均有重要意义。本专利技术将现有的病理技术系统化，建立了对大鼠SAN进行在体定位、精确取材及连续切片时肉眼定位的方法，本方法主要优点是操作简单、省力、快速、结果精确；本专利技术采用在体缝线打结法标记右上腔静脉、SAN精确取材的方法。在体缝线打结法确保了对上腔静脉取材的准确性和SAN组织的完整性、缩短了取材时间、增加SAN取材的精确程度，减少取材部位，减少了病理技术人员的工作量和切片等耗材的用量。附图说明图I是成年大鼠心脏右侧面观，示右上腔静脉打结标记部位。图2在体成年大鼠心脏右侧面观，示SAN位置。图3成年大鼠右上腔静脉横切面，Λ示静脉壁局部开始增宽处(石蜡切片肉眼观察)。图4成年大鼠右上腔静脉横切面，静脉壁局部增宽处常为SAN开始出现的部位，▲7]\ SAN 动脉(HEscalebar=50 μ m)。图5成年大鼠SAN组织连续切片，★示SAN组织(HE scale bar=50 μ m)0图6成年大鼠SAN组织,示SAN组织结构(HE scale bar=50 μ m)。图7 成年大鼠 SAN 组织，示 SAN 动脉(HE scale bar=50 μ m)。图8成年大鼠SAN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对成年大鼠窦房结的定位和取材方法，包括宏观定位和精确取材步骤，其特征是，所述宏观定位是将大鼠窦房结定位于上腔静脉近心端壁内并延伸至右心房与上腔静脉交界区，并用在体缝线打结法标记右上腔静脉；所述精确取材是在宏观定位的基础上，沿上腔静脉远端取下大鼠心脏。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：彭瑞云，刘燕青，高亚兵，董霁，姚斌伟，张静，赵黎，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所，
类型：发明
国别省市：