本发明专利技术以金针菇免疫调节蛋白FIP-fve处理于感染RSV病毒的HEp-2细胞株，发现在处理FIP-fve后能够有效抑制RSV病毒的感染。另一方面，以西方墨点法侦测IκBα和NF-κB蛋白的磷酸化，发现处理FIP-fve后，两者磷酸化蛋白的表现量都有被抑制的情形，进一步以共轭焦显微镜观察NF-κB在细胞中的分布情况，结果显示，FIP-fve能明显减少由RSV所导致的NF-κB进核，而NF-κB相关的发炎因子IL-4表现量也明显下降。综上发现金针菇蛋白FIP-fve具有降低RSV感染，进而减少NF-κB路径相关的发炎物质产生的疗效。最后，以BALA/C小鼠进行动物模式，发现口服金针菇蛋白的小鼠，可抑制以鼻腔滴定RSV病毒后所引发的气喘现象。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术及农业化学。
技术介绍
一、呼吸道融合瘤病毒(Respiratory Syncytial Virus RSV)的介绍呼吸道融合瘤病毒(Respiratory Syncytial Virus RSV)是造成婴儿及幼童严重的病毒性支气管炎及病毒性肺炎等急性病毒性呼吸道疾病的主要原因。其是一种RNA病毒，和腿腺炎病毒，德国麻疫病毒同属副黏液病毒(Paramyxovirus),在多种不同组织中培养都可产生特别的细胞融合现象(syncytial cytopathology),侵入呼吸道后会引起气管上皮细胞坏死、黏液分泌、发炎细胞浸润、黏膜下层水肿。呼吸道融合瘤病毒特别喜欢感染 具有纤毛的呼吸道表皮细胞，在呼吸道会造成细支气管的阻塞与发炎以及黏膜下层细胞的浸润，出现呼气时间延长、肺膨胀不全(atelectasis)及肺炎等症状。在老年人及免疫不全的病人中，呼吸道融合瘤病毒同样会引起严重的呼吸道疾病。从公共卫生的观点来看，世界各国的卫生组织及政府的卫生单位，都把制作呼吸道融合瘤病毒疫苗列为当前防治病毒感染的重要工作之一。呼吸道融合瘤病毒是副黏液病毒科(Paramyxoviridae),肺炎病毒属(Pneumovirus),具有外套膜(envelope),其基因组为单股(-)RNA,由15，222个核酸组成，包含10段的mRNA。这些mRNA可以转译出11种已经被确认存在的蛋白质，包括4种核蛋白壳蛋白质(nucleocapsid protein),分别命名为 nucleocapsid N protein、phosphoprotein P、 large polymerase subunit transcription elongation factorM2-1 ;3种穿透膜的外套醣蛋白质，分别是fusion F protein、attachment G protein及small hydrophobic SH protein ;2 种非结构蛋白质 NS1、NS2 ;1 种基质蛋白质 M protein以及目前推测为负调控因子的M 2-2等蛋白质。目前功能不明确的有NS1、NS2及SH蛋白质等。根据过去科学家们发展呼吸道融合瘤病毒疫苗的试验结果，我们可以归纳出死毒疫苗(inactivated vaccine)引发的免疫反应是Th 2 T-helper cell—系列的反应,会使得下呼吸道(指支气管、肺脏等部位)的病情更加严重，因为Th 2 T-helper cell产生的细胞激素IL-4、IL-IO等，会引起更严重的细胞浸润现象，加重并且加速病情。以台湾北部地区流行病学调查2001/01-2005/12每二年的春秋季为罹患此病高峰期(Lee et al.，2007)，目前并无特效药多为支持性疗法。并且若以glucocorticoids治疗并无法改善其症状(Patelet al.，2008)。而利用我们在这次研究执行中发现FlP-fve可能可以诱导出有效抑制病毒感染及减轻呼吸道疾病病情的Th I T-helper cell的反应，是符合我们所要求的发展临床药物的有效方法。二、真菌类免疫调节蛋白的功能在一些食用菇类，如灵芝、草菇及金针菇中所纯化分离出来的蛋白质，他们具有类似的胺基酸序列及免疫调节功能，我们以将此种类的蛋白质，命名为真菌类免疫调节蛋白质(Fungal immunomodulatory proteins, FIPs) (Hsu et al. , 1997 ；Ko et al. , 1995 ；Lin et al.，1997)。尤其以灵芝在传统中药已成为翘楚，对维持人体健康，有莫大作用。过去研究发现它具有抗过敏发炎(Lee et al. , 2001)、保护肝脏功能(Shieh et al. ,2001) >抗肿瘤及增强免疫功能，但大多局限于粗萃取物(Cuella et al.，1996)研究，或小分子化合物研究(Lai et al. ,2001 ；Zhang et al.，2002)。直到1989年日本明治制药从灵芝中纯化得一免疫调节功能蛋白，LZ8 (Kino et al.，1989)，实验结果发现LZ-8可以明显的抑制全身性过敏反应，治疗肝炎及预防糖尿病，我们实验室最近发现灵芝免疫调节蛋白抑制肺癌细胞终端酶活性(Liao et al.，2006 ；Liao et al.，2007)并造成肺癌细胞衰老(Liaoet al. ,2008)可发展治疗肺癌并已协助益生生技开发股份有限公司申请专利。LZ8具有mitogenic能力，且可抑制CFW老鼠由牛血清蛋白BSA所引起的anaphylaxis。本计划主持人曾自另一可食用的菇类-金针菇(FlP-fve)发现与LZ8及免疫球蛋白的重链区的蛋白质结构有相当程度的相似性，且二级结构多为b-Sheet，而测量其对于人类淋巴球细 胞增殖能力时，当FlP-fve浓度为100微克/毫升时(Ko et al.，1995)，其增殖能力达到最强。而注射FlP-fve蛋白质于老鼠体内，其剂量为8毫克/公斤体重时，具有抑制BSA所引起的systemic anaphylaxis反应。在老鼠足趾肿胀实验中预先腹腔注射FlP-fve蛋白质,齐[J量为5毫克/公斤体重时，即可减小compound 48/80所引起的发炎反应。由以上实验结果得知此蛋白质具有免疫调节活性，经进一步研究免疫调节的机转是为促进IFN-Y及TNF-α基因的转录作用。其中真蕈类免疫调节功能蛋白研究较透澈的为灵芝，此免疫调节功能蛋白质会促进 ICAM-1 (intercellular adhesion molecule-1)的表现(Haak-Frendscho et al.,1993)，并明显增加IFN- Y，因此灵芝增加⑶2表现，引起rosette形成，所以灵芝可借着调节immunocompetent cell上adhesion分子来表现其药性。而灵芝属菌株中，依许瑞祥博士论文中分离区别鉴定 G. applanatum. ，G. formosanum. ，G. fornicatum. ，G. Iucidium,G. tropicum及G. tsugae等数种灵芝。每种菌种间其免疫调节活性差异相当大，目前G. Iucidium及G. tsugae与本研究者发现的FlP-fve已被证实具有免疫调节功能,另本研究团队已同时在今年开发新的免疫调节功能蛋白能力。在蕈类植物中，他们的子实体或菌丝体中，有一些在蕈类植物中，它们的子实体或菌丝体中有一些亲醣蛋白质(lectins),会促进淋巴球的增殖；相反的,有些则会抑制淋巴球的增殖。包括松鸾科的Agaricus bisporus (Koyama et al. , 2002),分子量为64kDa,由4个次单元体构成，会抑制癌细胞U937增殖甚至造成细胞凋亡(Apoptosis)。这些亲醣蛋白质皆具有凝集细胞的能力。蕈类中亲醣蛋白质，其蛋白质上所结合的醣类多不相同，猴头燕 Hericium erinaceum(Kawagishi et al. , 1994)上的醣类是属于 sialic acid 结合，Laetiporus sulfurens (Yos本文档来自技高网...
【技术保护点】
口服真蕈类免疫调节蛋白，包含：金针菇免疫调节蛋白或灵芝免疫调节蛋白，可抑制RSV所导致的呼吸道过度反应。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：柯俊良，张语琦，
申请(专利权)人：柯俊良，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。