柿叶总黄酮抑制胰岛β细胞凋亡的应用及其提取方法技术

本发明专利技术公开了柿叶总黄酮在制备抗糖尿病药物中的应用，柿叶总黄酮具有抑制胰岛β细胞凋亡，降低氧化应激胰岛β细胞自由基的产生，抑制氧化应激诱导的胰岛细胞凋亡，提高胰岛素分泌量，增强抗氧化酶活性的功能，用于治疗或预防糖尿病。本发明专利技术还涉及柿叶总黄酮的提取方法，包括步骤：1）用乙醇作为溶剂进行提取；2）得到的醇提液调节pH值，用石油醚和乙酸乙酯萃取后，用大孔吸附树脂处理；3）收集的洗脱液用冷冻干燥法处理得到柿叶总黄酮。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及来源于植物材料的药用有效成分的提取方法及用途，具体涉及ー种柿叶总黄酮的提取方法及其抑制胰岛0细胞凋亡的应用。
技术介绍
糖尿病是ー种由胰岛素分泌缺陷和(或)胰岛素抵抗而引起的，以慢性高血糖为特征的代谢紊乱疾病。随着生活水平的提高，糖尿病发生率急剧上升，目前发病率为2%。糖尿病患者的胰岛P细胞凋亡増加会导致胰岛素分泌不足和P细胞数量減少。采取有效措施抑制胰岛P细胞的凋亡，将可能最大限度的減少P细胞功能和数量的降低。糖尿病氧化应激与胰岛P细胞的凋亡和功能有着密切的关系。高糖环境下，由于线粒体呼吸链中过多生成的氧自由基，可激活多元醇途径、蛋白激酶C途径和晩期糖基化终末产物途径，后者反过来还能够促进自由基的生成，从而形成恶性循环，这是导致糖尿病各种并发症发生和发 展的中心环节。胰岛P细胞内表达的抗氧化物酶如谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)，相对于其他组织都要低，这也使胰岛P细胞更容易受到氧化应激的攻击。抗氧化治疗可以减轻氧化应激，阻止或延缓糖尿病的发生发展。柿叶是柿树科(Ebenaceae)柿属(Diospyros L.)植物柿树的新鲜或干燥叶。柿树是我国南北各地普遍栽培的一种果树，分布十分广泛，以山东、广西、山西分布较多，其他省份如安徽、河南、江苏、浙江、福建、广东、江西、湖南、湖北、陕西、甘肃等地也有一定规模的栽培。柿叶入药最早见于明《滇南本草第一卷》“柿花”项下，曰“经霜叶敷臃疮。”《本草再新》中记载柿叶“味苦，性寒，无毒，专入肺经，治咳嗽吐血，止渴生律。”《分类草药性》亦记载柿叶可“治咳嗽气喘消肺气胀。”《广西中药材标准1990版》收载中药柿叶，其性味“苦、酸、涩、凉”，功能与主治为“清肺止咳，凉血止血，活血化癖，降血压。用于咳喘，肺气胀，各种内出血，高血压，脑动脉硬化症，冠心病。”现代药理分析表明，柿叶中含有丰富的类胡萝卜素、黄酮甙、芦丁、维生素C、胆碱等对有效药理成分。然而，我国目前柿叶基本上都被当作废物扔掉。现代研究表明，柿叶中的主要有效成分是黄酮，黄酮类在柿叶中的总含量为121. 3mg/100g。目前已发现的黄酮化合物有槲皮素(quercetin)、异槲皮素(isoquercitrin)、山萘酌' (kaempferol)、山萘酌'3-0-0 -D-葡萄糖苷(kaempfero13-0--D-glucopyranoside) > 山蔡酌' 3-0-a -L-鼠李糖昔(kaempfero13-0-a-L-rhamnopyranoside)> 山萘酌'3-0-0-D-木糖苷(kaempferol3-0-0-D-xylopyramoside)、山蔡酌' 3-0- a -L-阿拉伯糖昔(kaempfero 13-0-a -L-arabinoside)、樹皮素3-0-_ 葡萄糖苷(quercetin3-0_(2" -0-(galloyl) - ^ -D-glucopyranoside)、芦丁、金丝桃苷(槲皮素-3-半乳糖苷)、紫云英苷(astragal in)、杨梅树皮苷等。以上统称为柿叶总黄酮(persimmon leaftotal flavonoids, PLTF)。柿叶总黄酮具有显著的抗氧化活性，有望成为非常有潜力的新型天然抗氧化剂。
技术实现思路
本专利技术解决的问题在于提供柿叶总黄酮抑制胰岛P细胞凋亡的应用及其提取方法，从而有助于在糖尿病的防治过程中发挥作用。本专利技术是通过以下技术方案来实现柿叶总黄酮在制备抗糖尿病药物和/或保健品中的应用。所述的抗糖尿病药物和/或保健品为促进胰岛细胞增殖和提高胰岛素分泌量的药物和/或保健品。 所述的抗糖尿病药物和/或保健品为增加Bcl-2mRNA表达和/或抑制p65蛋白表达的药物和/或保健品。所述的抗糖尿病药物和/或保健品为抑制胰岛0细胞凋亡的药物和/或保健品。所述的抗糖尿病药物和/或保健品为减少iNOS、Caspase3, Bax mRNA表达的药物和/或保健品。所述的抗糖尿病药物和/或保健品为增强胰岛细胞抗氧化活性的药物和/或保健品。所述的抗糖尿病药物和/或保健品为降低胰岛细胞自由基的产生的药物和/或保健品。所述的抗糖尿病药物和/或保健品为增强抗氧化酶活性的药物和/或保健品。一种柿叶总黄酮的制备方法，包括以下步骤I)将粉碎后干燥的柿叶，按Ig : 10 25ml的比例加入体积浓度为50 80%的こ醇，在微波超声下，加热回流提取10 30min，滤渣重复提取至少两次，合并提取液得到醇提液；2)将醇提液用调节pH值至5. 5后，依次用石油醚和こ酸こ酯萃取，然后有机相用大孔树脂吸附，水洗至流出液无色，再用质量浓度为体积浓度为50 80%的こ醇洗脱，收集洗脱液；3)将洗脱液减压浓缩后冷冻干燥，得到柿叶总黄酮。所述的微波超声的频率为2000 3000MHz，功率为400 600W。具体的所述的柿叶总黄酮提取物，经以下步骤提取得到I)称取粉碎的干燥柿叶，按Ig 20ml的用量比加入体积浓度为75%的こ醇，在200(T3000MHZ，40(T600W微波条件下，加热回流提取20min，滤渣重复提取至少2次，合并各次提取液得到醇提液；2)将醇提液用1%HC1调节PH值至5. 5，依次用石油醚和こ酸こ酯萃取后，有机相用AB-8大孔树脂吸附，水洗至流出液无色，再用体积浓度为75%こ醇洗脱，收集洗脱液；3)将洗脱液60°C减压浓縮，_60°C冷冻干燥，得到柿叶总黄酮。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果糖尿病氧化应激与胰岛P细胞的凋亡和功能有着密切的关系，糖尿病患者的胰岛3细胞凋亡増加会导致胰岛素分泌不足和P细胞数量減少。而本专利技术公开了柿叶总黄酮(PLTF)能够促进胰岛细胞增殖和提高胰岛素分泌量，所以可以应用于制备抗糖尿病药物和/或保健品。而且柿叶总黄酮能够降低氧化应激胰岛P细胞自由基的产生，抑制氧化应激诱导的P胰岛细胞凋亡，提高胰岛素分泌量，增强抗氧化酶活性，减少iNOS、Caspase3、BaxmRNA表达，增加Bcl-2mRNA的表达和抑制p65蛋白的表达，减轻凋亡，从而降低糖尿病的发生率。进ー步的本专利技术将粉碎后的柿叶，用こ醇作为溶剂进行提取，得到的醇提液调节PH值5. 5，用石油醚和こ酸こ酯萃取后，用大孔吸附树脂处理，收集的洗脱液用冷冻干燥法处理得到柿叶总黄酮，提取方法步骤简单，易操作。附图说明图I为柿叶总黄酮对细胞生存率的影响；图2为柿叶总黄酮抑制H2O2导致的胰岛细胞凋亡；图3为柿叶总黄酮对H2O2损伤Min6细胞分泌胰岛素功能的影响； 图4为柿叶总黄酮对H2O2诱导胰岛细胞产生活性氧的清除作用；图5-1为柿叶总黄酮对H2O2所致胰岛Min6细胞损伤抗氧化指标SOD的影响；图5-2为柿叶总黄酮对H2O2所致胰岛Min6细胞损伤抗氧化指标CAT的影响；图5-3为柿叶总黄酮对H2O2所致胰岛Min6细胞损伤抗氧化指标GSH的影响；图5-4为柿叶总黄酮对H2O2所致胰岛Min6细胞损伤抗氧化指标MDA的影响；图5-5为柿叶总黄酮对H2O2所致胰岛Min6细胞损伤抗氧化指标NO的影响。图6-1为柿叶总黄酮对H202所致胰岛Min6细胞损伤Bcl_2mRNA表达水平的影响；图6-2为柿叶总本文档来自技高网...

【技术保护点】
柿叶总黄酮在制备抗糖尿病药物和/或保健品中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张雅利，卢晓云，郭辉，孙丽君，张李钰，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：