本发明专利技术涉及清香藤中环烯醚萜类化合物制备方法和抗炎、抗肿瘤应用,属于医药技术领域.本发明专利技术提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，其方法为粉碎干燥的清香藤茎，然后利用闪式提取技术，得总提取液,总提取液经大孔树脂柱色谱处理,即得富含环烯醚萜类成分的粗提物；采用正相硅胶柱色谱法分离,筛选富集环烯醚萜类化合物的有效流分,所得有效流分经半制备或制备型HPLC色谱分离，以甲醇-水，乙腈-水或甲醇-乙腈-水为流动相洗脱，得到环烯醚萜类化合物。本发明专利技术提供的环烯醚萜类化合物的制备方法简便可靠，提取分离效率高，可操作性强，易于实现工业化大生产，所制备的环烯醚萜类化合物具有抗炎、抗肿瘤活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，涉及清香藤中环烯醚萜类化合物制备方法和抗炎、抗肿瘤应用。
技术介绍
猜香藤(Jasminum Ianceolarium Roxb.)又名川香茉莉、光清香藤、北清香藤，为木犀科素馨属植物，清香藤的药用部位为根及茎，称为破骨风。据《新华本草纲要》记载破骨风有祛风除湿、凉血解毒功能，主治风湿痹痛、跌打损伤、头痛、外伤出血、无名疮毒、蛇伤。在我国民间，清香藤的根茎被用于治疗发热及风湿疼痛，其叶可用于消炎，治疗眼部疼痛。目前国内外关于清香藤化学成分的报道很少。SHENYa-ching等在较早时期从中分离得到5个裂环环烯醚萜苷类及相关的甲基化、乙酰化衍生物；近年来，孙佳明对该植物的化学成分和药理活性进行了初步研究。本课题组重点对清香藤植物中的环烯醚萜类成分的提取制备工艺和抗炎、抗肿瘤活性进行了详细的研究。环烯醚萜类化合物是含有环烯醚键的单萜类化合物，尤其包括裂环环烯醚萜类以及裂环内酯环烯醚萜类两种类型。环烯醚萜类化合物的稳定性很差，基本上以苷的形式存在居多。据文献报道，含有环烯醚萜类化合物的植物提取物具有一系列生物活性，如文献报道茉莉根的醇浸膏对小鼠具有减少自主活动，抑制扭体反应及延长戊巴比妥钠阈上剂量睡眠时间的作用，表明对中枢神经系统具有抑制作用L. Balchin等利用豚鼠的回肠和小鼠的子宫在离体条件下研究了 J.grandiflora的精油解疫挛作用；SHEN Ya-ching等在用豚鼠离体心脏作心血管药理方面活性筛选时发现，J. mult ifIorum植物内酯类成分具有很强的异丙肾上腺素样作用，李红及王振学等研究中药茉莉根的醇浸膏的戒毒效果，利用小鼠模型，采用醋酸扭体法观察，显示出明显的镇痛作用等。为了能更充分的研究这类天然产物的药理活性，我们总结发现了一种快速、大量从植物界分离制备环烯醚萜类化合物并检测其抗炎、抗肿瘤活性的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了清香藤中的环烯醚萜类化合物的制备方法及其抗炎、抗肿瘤应用。本专利技术提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，可以通过以下两种方法中任意一种制备环烯醚萜类化合物， 方法一 (1)粉碎干燥的清香藤茎，然后利用闪式提取技术，溶剂提取法或超声提取法，采用20%-95%的乙醇提取，过滤，合并滤液，减压回收提取液至醇浓度低于5%，得总提取液； (2)总提取液经大孔树脂柱色谱(如XAD-4，Diaion HP-20, D101、D102、D401, Dl、D2、D3、D4，HPD-100，X-5、D-201，HPD-300，AB-8XAD-6、XAD-7、XAD-8、HPD400、HPD60 等型号)处理，依次用不同比例的水和醇梯度洗脱，各洗脱部位利用薄层色谱和HPLC技术(210nm检测)，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效部位，得到10% -100%醇洗脱下来的流分为环烯醚萜类化合物的有效部位，即得富含环烯醚萜类成分的粗提物； (3)上述粗提物采用正相硅胶柱色谱法分离，以不同比列的氯仿/二氯甲烷-甲醇-水，石油醚-乙酸乙酯/丙酮或氯仿/ 二氯甲烷-甲醇作为洗脱剂洗脱，或反相柱色谱分离，或快速中低压反相柱色谱分离，以甲醇-水或乙醇-水梯度洗脱，减压回收溶剂，所得流分利用薄层色谱和HPLC技术(210nm检测)，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效流分； (4)上述步骤(3)中所得有效流分经半制备或制备型HPLC色谱分离，以甲醇-水，乙腈-水或甲醇-乙腈-水为流动相洗脱，得到环烯醚萜类化合物。方法二 (1)粉碎干燥的清香藤茎，然后利用闪式提取技术，溶剂提取法或超声提取法，采用20%-95%的乙醇提取，过滤，合并滤液，减压回收提取液至醇浓度低于5%，得总提取液； (2)将上述总提取液分别用乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂，收集得到乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物，乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物经大孔吸附树脂柱色谱(如XAD-4，Diaion HP-20，D101、D102、D401，D1、D2、D3、D4，HPD-100,X-5、D_201，HPD-300，AB-8XAD-6、XAD-7、XAD-8、HPD400、HPD60等型号)处理，依次用水和醇梯度洗脱，各洗脱部位利用薄层色谱和HPLC技术(210nm检测)，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效部位，得到10%-100%醇洗脱下来的环烯醚萜类化合物的有效部位，即得富含环烯醚萜类成分的粗提物； (3)上述粗提物采用正相硅胶柱色谱法分离，以不同比列的氯仿/二氯甲烷-甲醇-水，石油醚-乙酸乙酯/丙酮或氯仿/ 二氯甲烷-甲醇作为洗脱剂洗脱，或反相柱色谱分离，或快速中低压反相柱色谱分离，以甲醇-水或乙醇-水梯度洗脱，减压回收溶剂，所得流分利用薄层色谱和HPLC技术(210nm检测)，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效流分； (4)上述步骤(3)中所得有效流分经半制备或制备型HPLC色谱分离，以甲醇-水，乙腈-水或甲醇-乙腈-水为流动相洗脱，得到环烯醚萜类化合物。(5)上述步骤(2)中将剩余水层溶液经活性炭色谱柱，先后利用水(100 ml)洗脱，醇(300 ml)洗脱。将醇洗脱得到的溶液进行浓缩，得到残渣。残渣经CH2N2甲基化后，利用制备薄层色谱法得到环烯醚萜类化合物。本专利技术提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法一和方法二中的步骤(2)的醇为乙醇，其梯度洗脱浓度为10% -100%。本专利技术提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法一和方法二中的步骤(2)的大孔吸附树脂选自 XAD-4, Diaion HP-20, D101、D102、D401, D1、D2、D3、D4, HPD-100, X-5、D-201, HPD-300, AB-8XAD-6、XAD-7, XAD-8, HPD400、HPD600 中的一种。本专利技术提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法一中的步骤(3)为粗提物经正相硅胶柱色谱法处理，洗脱溶剂为氯仿或二氯甲烷-甲醇-水、石油醚-乙酸乙酯/丙酮、氯仿/ 二氯甲烷-甲醇，洗脱比例分别为50:1 0. 1-1:5:1,10:1-1:1,20:1-1 1的洗脱部位富集环烯醚職类化合物的流分。本专利技术提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法二中的步骤(3)为粗提物经正相硅胶柱色谱法处理，洗脱溶剂为氯仿或二氯甲烷-甲醇-水、石油醚-乙酸乙酯/丙酮、氯仿/ 二氯甲烷-甲醇，洗脱比例分别为50:1 0. 1-1:5:1,10:1-1:1,20:1-1 1的洗脱部位富集环烯醚職类化合物的流分。本专利技术提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法一和方法二中的步骤(3 )中反相色谱柱的填料可为RP-18，RP-8或RP-2。本专利技术提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法一中的步骤(3)为粗提物经反相柱色谱或快速中低压柱色谱法处理，洗脱溶剂为1:10-10:1的甲醇-水或乙醇-水，混合比例1:9-9:1的流分为环烯醚萜类化合物的流分。本专利技术提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法二中的步骤(3)为步骤(2)的正丁醇萃取物经反相柱色谱或快速中低压柱色谱法处理，洗脱溶剂为1:10-10:1的甲醇-水或乙醇-水，混合比例1:9-9:1的流分富含环烯醚萜类化合物的流分。·本专利技术提供的环烯醚萜类化本文档来自技高网...
【技术保护点】
清香藤中环烯醚萜类化合物的制备方法，其特征在于：方法一：(1)粉碎干燥的清香藤茎，然后利用闪式提取技术，溶剂提取法或超声提取法，采用20%?95%的乙醇提取，过滤，合并滤液,?减压回收提取液至醇浓度低于5％，得总提取液；?????(2)总提取液经大孔吸附树脂柱色谱处理，依次用不同比例的水和醇梯度洗脱，各洗脱部位利用薄层色谱和HPLC?技术，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效部位，得到10％??100％醇洗脱下来的流分为环烯醚萜类化合物的有效部位，即得富含环烯醚萜类成分的粗提物；?????(3)上述粗提物采用正相硅胶柱色谱法分离，以不同比列的氯仿/二氯甲烷?甲醇?水，石油醚?乙酸乙酯/丙酮或氯仿/二氯甲烷?甲醇作为洗脱剂洗脱，或反相柱色谱分离，或快速中低压反相柱色谱分离，以甲醇?水或乙醇?水梯度洗脱，减压回收溶剂，所得流分利用薄层色谱和HPLC技术，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效流分；?(4)上述步骤(3)?中所得有效流分经半制备或制备型HPLC?色谱分离，以甲醇?水，乙腈?水或甲醇?乙腈?水为流动相洗脱，得到环烯醚萜类化合物；方法二：?(1)?粉碎干燥的清香藤茎，然后利用闪式提取技术，溶剂提取法或超声提取法，采用20%?95%的乙醇提取，过滤，合并滤液,?减压回收提取液至醇浓度低于5％，得总提取液；?(2)将上述总提取液分别用乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂，收集得到乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物，乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物经大孔吸附树脂柱色谱处理，依次用水和醇梯度洗脱，各洗脱部位利用薄层色谱和HPLC?技术，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效部位，得到10％??100％醇洗脱下来的环烯醚萜类化合物的有效部位，即得富含环烯醚萜类成分的粗提物；(3)上述粗提物采用正相硅胶柱色谱法分离，以不同比列的氯仿/二氯甲烷?甲醇?水，石油醚?乙酸乙酯/丙酮或氯仿/二氯甲烷?甲醇作为洗脱剂洗脱，或反相柱色谱分离，或快速中低压反相柱色谱分离，以甲醇?水或乙醇?水梯度洗脱，减压回收溶剂，所得流分利用薄层色谱和HPLC技术，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效流分；?(4)上述步骤(3)?中所得有效流分经半制备或制备型HPLC?色谱分离，以甲醇?水，乙腈?水或甲醇?乙腈?水为流动相洗脱，得到环烯醚萜类化合物；(5)上述步骤(2)中将剩余水层溶液经活性炭色谱柱，先后利用水(100?ml)洗脱，醇(300?ml)洗脱；将醇洗脱得到的溶液进行浓缩，得到残渣；残渣经CH2N2甲基化后，利用制备薄层色谱法得到环烯醚萜类化合物。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孟大利，张辘辘，陈超，徐丽焕，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：
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