本发明专利技术公开了登革病毒2型NS3蛋白的表位多肽，该表位肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，具有特异性高，免疫原性好的优点，该表位多肽可以直接与载体蛋白偶联形成交联体，制成表位多肽的衍生物，制得的衍生物能够制备预防登革病毒2型感染的疫苗，安全、可靠，无毒副作用，对预防和治疗登革病毒2型感染奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药领域，特别涉及登革病毒2型NS3蛋白的表位多肽，还涉及该表位多肽的衍生物和应用。
技术介绍
登革病毒(denguevirus, DV)是引起人类登革热(classical dengue fever,DF)、登革出血热(dengue hemorrhagic fever, DHF)和登革休克综合征(dengue shocksyndrome,DSS)的病原体。近年来，随着人口流动的增加及全球气侯变暖，每年热带和亚热带地区约有I亿人受到该病毒的感染，其中DHF/DSS患者约为50万人，病死率高达5%，如未得到及时治疗，病死率可上升至50%。近年来，在流行地区，DHF/DSS的发病率呈明显增加趋势，已成为严重的公共卫生问题。但迄今为止，DF、DHF和DSS的发病机制仍不十分清楚，也缺乏安全有效的预防疫苗和治疗药物。因此，DF、DHF和DSS已成为当今世界严重的公共 卫生问题，对其病原体、发病机理及防治策略的相关研究具有重要意义。DV是黄病毒属的单链正股RNA病毒，基因组约为10kb、含有一个0RF，编码3个结构蛋白(C，prM和E)和7个非结构蛋白(NSl-NS2a/2b-NS3-NS4a/4b-NS5)。DV有四个血清型(DV1-DV4)，以蚊虫为传播媒介，其中主要流行的是DV2。目前，DV致病机理和人体免疫防御机制不明，缺乏有效的治疗手段，临床上仍以治疗为主。由于人体抵抗不同型DV感染的能力弱，发病地区的人群反复感染DV是比较常见的，因而潜在的DHF/DSS发生的可能性很大，导致DV的危害性呈上升趋势。DV致病机理和人体免疫防御机制不明使得DV的疫苗研究仍处在实验阶段。DV疫苗研究的重点集中在研制四价疫苗，希望获得能同时针对四型DV的疫苗，从而在根本上防治DV感染和DHF/DSS的出现。减毒四价活疫苗曾一度被认为是最具前景的候选疫苗。但由于是减毒或灭活病原体，存在一定的毒副作用。基因工程疫苗研究虽然取得了较大进步，获得了各种重组的DV蛋白。但无论是大肠杆菌还是真核体系的酵母菌、杆状病毒、哺乳动物细胞等表达方式均有不足，且重组蛋白纯化复杂，避免蛋白结构和功能改变困难。迄今为止，仍然没有获得既安全又有效的疫苗。20世纪80年代初，Lerner等提出发展合成多肽疫苗，并预测合成多肽疫苗将是人类预防疾病的终极武器。合成肽疫苗(synthetic peptide vaccine)就是用化学合成抗原表位氨基酸序列法制备而成的具有保护性作用的类似天然抗原决定簇的多肽疫苗。多肽具有免疫背景明确、稳定、纯度高、易于获得、批间差异极小、无毒副作用等优点，还有一个极大的优势就在于可对任意氨基酸顺序组合进行合成，可以极方便地将多种病原的表位、同类病原不同亚型的表位组合在一起，从而获得针对多种疾病的超级疫苗。这种疫苗不含核酸，是最为理想的安全新型疫苗，也是目前研制预防和控制感染性疾病和恶性肿瘤的新型疫苗的主要方向之一。对于合成肽疫苗的设计，最重要的一步是找到特异的抗原表位。登革病毒的非结构蛋白3(NS3)是一个多功能蛋白，具有多种酶活性，涉及到病毒多聚蛋白的加工和RNA的复制及5’加帽。该蛋白具有很好的免疫原性，并存在特异的CD4+和CD8+ T细胞识别表位。可诱导机体产生特异性的体液免疫和细胞免疫反应。因此，急需一种登革病毒2型NS3蛋白的表位肽，特异性高、免疫原性好。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一个登革病毒2型NS3蛋白的表位多肽；本专利技术的目的之二在于提供一个含登革病毒2型NS3蛋白的表位多肽的衍生物，本专利技术的目的之三在于提供衍生物在制备预防或治疗登革病毒2型感染的药物中的应用。本专利技术的目的之四在于提供衍生物在制备诊断或检测登革病毒2型感染的试剂中的应用。为实现上述专利技术目的，技术方案为 I.登革病毒2型NS3蛋白的表位多肽，所述表位多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO. I所/Jn ο2.含权利要求I所述表位多肽的衍生物，所述衍生物为所述表位多肽与载体蛋白·偶联的交联体。优选的，所述载体蛋白为牛血清白蛋白。3.所述的衍生物在制备预防或治疗登革病毒2型感染的疫苗中的应用。4.所述的衍生物在制备诊断或检测登革病毒2型感染的试剂中的应用。本专利技术有益效果在于本专利技术公开了登革病毒2型NS3蛋白的表位多肽，是以抗登革病毒NS3蛋白单克隆4F5抗体为基础，以噬菌体肽库初步确定单克隆4F5抗体所对应的抗原表位所在区域，然后合成表位多肽，通过拮抗试验，检测到表位多肽能够抑制单克隆4F5抗体结合登革病毒2型抗原的活性。为了增强表位多肽的免疫原性，将表位多肽与载体蛋白偶联形成交联体，免疫BALB/c小鼠后能产生特异的免疫反应，因此可以利用表位多肽研制登革病毒2型的疫苗和诊断试剂。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术作进一步的详细描述，其中 图I筛选的噬菌体与抗体4F5的结合能力鉴定结果图(4F5为单克隆抗体，匪S为正常鼠血清)。图2筛选噬菌体肽库的氨基酸序列及登革病毒2型(Trl751株)所对应的序列。图3 4F5与表位多肽反应的ELISA结果图。图4表位多肽的拮抗试验ELISA结果图。图5表位多肽与BSA偶联的交联体免疫动物后抗血清效价测定图。图6抗交联体血清与DV2的免疫荧光分析结果图(a: DV2感染的细胞与表位多肽免疫的抗血清孵育；b:正常细胞与表位多肽免疫的抗血清孵育；c: DV2感染的细胞与对照多肽免疫的抗血清孵育；d:正常细胞与对照多肽免疫的抗血清孵育)。具体实施例方式为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。以下将参照附图，对本专利技术的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件进行。实施例I、材料的准备 登革病毒2型(DV2，Trl751株)由本实验室保存。实验动物BALB/c小鼠，6-8周龄，SPF级，雌性，体重18_22g，购自第三军医大学实验动物中心。合成多肽由上海生工生物工程公司合成，用二甲亚砜(DMSO)溶解成5mg/mL的浓度，_70°C保存，临用时用磷酸盐缓冲液(PBS)稀释成lmg/mL。弗氏佐剂、弗氏不完全佐剂购自美国Sigma公司；噬菌体肽库展示试剂盒(Ph.D. -7 Phage Display Peptide Library Kit),购自美国 NEB 公司。LB液体培养基胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCllOg加蒸馏水至IOOOmL,调整pH至7. 4,高压蒸气灭菌。LB固体培养基1. 5g琼脂粉加入IOOmL LB培养液中，高压蒸气灭菌后倾倒平板。DNA 电泳缓冲液(50XTAE) Tris 242g，冰乙酸 57. lml, Na2EDTA · 2H20 37. 2g，力口水至IOOOmL即可，应用浓度为1XTAE。EB溶液EB贮存液(10mg/ml)，O. 2g EB溶解于20mL H2O中，混匀后于4°C避光保存。EB染色液10 μ L EB贮存液，IOOmL I X TAE缓冲液。PBS 缓冲液(pH7. 2) =Na2HPO4 14mmol, NaH2P046mmoI，NaCl2 9g，加蒸本文档来自技高网...
【技术保护点】
登革病毒2型NS3蛋白的表位多肽，其特征在于：所述表位多肽的氨基酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：田衍平，陈宗涛，徐小峰，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学，
类型：发明
国别省市：
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